專利名稱：一種提高轉(zhuǎn)基因鯉受精卵孵化率的方法
所屬領(lǐng)域本發(fā)明屬于鯉魚轉(zhuǎn)基因育種技術(shù)領(lǐng)域，涉及轉(zhuǎn)基因鯉制備中的外源基因?qū)爰夹g(shù)，由其是利用顯微注射技術(shù)構(gòu)建轉(zhuǎn)基因鯉方法。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)基因魚研究已有近二十年的歷史。將外源基因?qū)媵~類受精卵主要采用顯微注射技術(shù)，此外還利用精子攜帶、電脈沖導(dǎo)入等方法構(gòu)建轉(zhuǎn)基因魚。由于用后兩種方法制備轉(zhuǎn)基因魚外源基因整合率較低，在實(shí)際工作中很少采用。而原始制備轉(zhuǎn)基因魚的顯微注射方法是先將魚受精卵的卵膜用人工撥膜或胰酶消化的方法脫膜，然后再進(jìn)行顯微注射。由于整個(gè)受精卵沒有卵膜的保護(hù)給孵化管理帶來很大的不便，更嚴(yán)重的是卵黃等營養(yǎng)物質(zhì)暴露在水體中，極易遭受細(xì)菌等侵害，加之顯微注射對(duì)受精卵造成的機(jī)械損傷，導(dǎo)致孵化率極低。另外采用顯微注射技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因魚外源基因在基因組中的整合是隨機(jī)的。要獲得有外源基因整合的轉(zhuǎn)基因魚，就必需有足夠數(shù)量的轉(zhuǎn)基因魚供篩選。因此，大量制備轉(zhuǎn)基因魚是轉(zhuǎn)基因魚育種研究成敗的關(guān)建。

發(fā)明內(nèi)容
為了提高轉(zhuǎn)基因鯉受精卵的孵化率，擴(kuò)大轉(zhuǎn)基因鯉的數(shù)量，本發(fā)明在原有技術(shù)基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，這一技術(shù)改進(jìn)不僅解決了轉(zhuǎn)基因鯉受精卵孵化率低的問題，而且還簡化了顯微操作程序，同時(shí)轉(zhuǎn)基因鯉數(shù)量得到了大幅度提高。
本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是用拉針儀將顯微注射用玻璃針的直徑拉至10微米，對(duì)未經(jīng)物理或化學(xué)方法脫膜處理的受精卵進(jìn)行外源基因直接導(dǎo)入。由于未脫膜的受精卵有很大的內(nèi)壓，用直徑小于10微米的玻璃針刺壓卵膜可以避免擠破卵子，卵膜上小于10微米的小孔靠卵子的自身修復(fù)能力將很快得到修復(fù)。同時(shí)未脫膜的受精卵有卵膜的包被減少了水體中細(xì)菌的感染機(jī)會(huì)。而玻璃針的直徑小于10微米，針內(nèi)的外源核酸及受精卵的卵黃極易睹塞針尖降低外源基因?qū)氲男?。因此，?0微米直徑的顯微注射用玻璃針對(duì)未脫膜的受精卵直接進(jìn)行外源基因?qū)?，可減少細(xì)菌對(duì)受精卵的危害、提高受精卵的孵化率，達(dá)到了獲得足夠數(shù)量的轉(zhuǎn)基因鯉用于外源基因整合、表達(dá)篩選的目的。
本發(fā)明的有益效果是，在簡化制備轉(zhuǎn)基因鯉的操作程序的同時(shí)，減少了細(xì)菌對(duì)導(dǎo)入外源基因受精卵的危害程度及玻璃針對(duì)受精卵的機(jī)械損傷，提高了導(dǎo)入外源基因受精卵的孵化率，為后序大量的轉(zhuǎn)基因鯉的制備提供了必要的技術(shù)保障。
權(quán)利要求
1.一種提高轉(zhuǎn)基因鯉受精卵孵化率的方法，在對(duì)鯉魚受精卵進(jìn)行外源基因?qū)爰夹g(shù)中，受精卵、顯微注射用玻璃針，其特征是受精卵不脫膜，顯微注射用玻璃針直徑為10微米。
2.根據(jù)權(quán)力要求1所述的一種提高轉(zhuǎn)基因鯉受精卵孵化率的方法，其特征是鯉受精卵不經(jīng)物理或化學(xué)方法進(jìn)行脫膜，用拉針儀將玻璃管拉制成直徑為10微米的注射用玻璃針。
全文摘要
一項(xiàng)能夠提高轉(zhuǎn)基因鯉受精卵孵化率的制備轉(zhuǎn)基因鯉技術(shù)。其特征在于是以鯉魚的受精卵為實(shí)驗(yàn)材料，利用直徑為10微米的顯微注射用玻璃針直接對(duì)未用物理或化學(xué)方法進(jìn)行脫膜處理的鯉受精卵進(jìn)行外源基因?qū)胫苽滢D(zhuǎn)基因鯉。用此改進(jìn)技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因鯉，簡化了制備轉(zhuǎn)基因鯉的操作程序，減少了細(xì)菌對(duì)導(dǎo)入外源基因受精卵的危害程度及玻璃針對(duì)受精卵的機(jī)械損傷，提高了導(dǎo)入外源基因受精卵的孵化率。應(yīng)用此發(fā)明，可提大大高轉(zhuǎn)基因鯉的制備效率。
文檔編號(hào)A01K67/033GK1593117SQ0313260
公開日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2003年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月8日
發(fā)明者梁利群, 孫效文, 閻學(xué)春, 沈俊寶 申請(qǐng)人:中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所