本發(fā)明屬于食品檢測(cè)領(lǐng)域，特別是一種同時(shí)檢測(cè)食品中防腐劑、甜味劑、著色劑的方法。

背景技術(shù)：

防腐劑、甜味劑、著色劑都是食品加工領(lǐng)域十分常見的食品添加劑。為控制食品添加劑在食品加工領(lǐng)域中的各種不規(guī)范使用情況，近年來(lái)各執(zhí)法監(jiān)管部門加強(qiáng)了對(duì)食品添加劑的管控力度。常規(guī)防腐劑、甜味劑以及著色劑的檢驗(yàn)頻率很高，參考《GB/T 23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定高效液相色譜法》、《GB/T 5009.140-2003飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定》、《GB/T 5009.35-2003食品中合成著色劑的測(cè)定》、《GB/T 23377-2009食品中脫氫乙酸的測(cè)定高效液相色譜法》等國(guó)標(biāo)方法，若按照常規(guī)方法對(duì)上述種類食品添加劑進(jìn)行分別檢驗(yàn)，基本上需要多臺(tái)儀器，四種方法分別進(jìn)行檢測(cè)。苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定約需要耗時(shí)25分鐘，乙酰磺胺酸鉀的測(cè)定約需要耗時(shí)15分鐘，多種合成著色劑的測(cè)定約需要耗時(shí)60分鐘，脫氫乙酸的測(cè)定約需要耗時(shí)15-20分鐘。

上述項(xiàng)目消耗的檢驗(yàn)時(shí)間為依照標(biāo)準(zhǔn)方法執(zhí)行后統(tǒng)計(jì)的時(shí)間，該系列數(shù)值可能因各個(gè)實(shí)驗(yàn)室條件(包括實(shí)驗(yàn)儀器、實(shí)驗(yàn)耗材等相關(guān)因素)不同而有差異。由此可見，依國(guó)標(biāo)分別測(cè)定上述種類食品添加劑，僅單樣品就大約需要120分鐘，設(shè)備占用時(shí)間較長(zhǎng)。且不同檢測(cè)項(xiàng)目分別進(jìn)行樣品前處理，更增加了人工成本，占用了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。綜上，該項(xiàng)技術(shù)存在很大的技術(shù)改進(jìn)空間。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種同時(shí)檢測(cè)食品中防腐劑、甜味劑、著色劑的方法，其通過(guò)優(yōu)化色譜條件，可實(shí)現(xiàn)多種防腐劑、甜味劑、著色劑等食品添加劑，縮短實(shí)驗(yàn)周期，大幅提高工作效率。

本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種同時(shí)檢測(cè)食品中防腐劑、甜味劑、著色劑的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

1)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：

稱取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，共同加入至超純水，配制1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A，該1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A中每種物質(zhì)的濃度相同，依次為1mg/L、3mg/L、7mg/L、10mg/L、20mg/L；稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液，共同加入至超純水，配制1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B，1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B每種物質(zhì)的濃度相同，依次為0.12mg/L、0.36mg/L、1mg/L、5mg/L、25mg/L，將1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A與1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B按體積比1:1混合制成1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液C，備用；

2)樣品工作液的制備：

待測(cè)樣品混勻后稱取適量加入25mL比色管中，溶解、加水定容混勻，采用0.45μm濾膜過(guò)濾，制成樣品工作液；

3)采用液相色譜法進(jìn)行分析：

將1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液C與樣品工作液注入液相色譜儀，進(jìn)行液相色譜分析，以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液C中各標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積與樣品工作液中待測(cè)樣品的峰面積作比較，保留時(shí)間定性，峰面積定量，外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算。

所述的液相色譜條件為：

色譜柱：Agilent SB-C184.6mm×150mm；

流動(dòng)相：有機(jī)相為甲醇，水相為0.02mol/L乙酸銨溶液；

流速：1mL/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：210-254nm；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：20μL；

檢測(cè)器采用紫外檢測(cè)器或DAD檢測(cè)器。

所述的流動(dòng)相的洗脫條件為梯度洗脫：0min甲醇：乙酸銨水溶液：10:90；9min甲醇：乙酸銨水溶液：24:76；13min甲醇：乙酸銨水溶液：35:65；23min甲醇：乙酸銨水溶液：98:2；26min甲醇：乙酸銨水溶液：98:2；30min甲醇：乙酸銨水溶液：10:90。

所述紫外檢測(cè)器的檢測(cè)參數(shù)為：檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；所述DAD檢測(cè)器的檢測(cè)參數(shù)為，檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm及254nm波長(zhǎng)。

在步驟2)的樣品工作液的制備步驟中，選用超純水作為提取溶劑，再經(jīng)過(guò)超聲提取或煮沸的方式進(jìn)行前處理。

在步驟2)的樣品工作液的制備步驟中，待測(cè)樣品選用乙酸鋅與亞鐵氰化鉀作為蛋白沉淀劑先進(jìn)行除蛋白。

所述的超純水符合《GB/T 6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》中一級(jí)水的要求。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果為：

1、本發(fā)明可同時(shí)檢測(cè)食品中防腐劑、甜味劑、著色劑等11種食品添加劑的方法，這11種食品添加劑包括：苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸等3種防腐劑；安賽蜜、糖精鈉等2種甜味劑；莧菜紅、胭脂紅、日落黃、檸檬黃、誘惑紅、亮藍(lán)等6種著色劑，采用本發(fā)明的方法色譜分析時(shí)間為35分鐘，較分別檢測(cè)上述項(xiàng)目需要色譜分析時(shí)間120分鐘節(jié)省檢測(cè)分析時(shí)間240％。

2、本發(fā)明的11種待測(cè)食品添加劑具有良好的水溶性特征，因此實(shí)驗(yàn)前處理方法中選用超純水作為提取溶劑，再經(jīng)過(guò)超聲提取(或煮沸)的方式進(jìn)行前處理，溶解。超純水符合《GB/T 6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》中一級(jí)水的要求。如樣品中蛋白質(zhì)含量較高，可選用乙酸鋅與亞鐵氰化鉀作為蛋白沉淀劑先進(jìn)行除蛋白。

3、本發(fā)明的檢測(cè)器采用紫外檢測(cè)器進(jìn)行分析時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；如果采用DAD檢測(cè)器，可以同時(shí)采集230nm及254nm波長(zhǎng)，檢出限可以進(jìn)一步降低。

4、本發(fā)明優(yōu)化后的色譜條件對(duì)11種常見食品添加劑進(jìn)行分析檢測(cè)，在保證各待測(cè)組分回收率的前提下，節(jié)省檢測(cè)分析時(shí)間240％，減少設(shè)備占用，大幅節(jié)省了分別處理樣品的時(shí)間與人工成本。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明的食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)品紫外檢測(cè)器色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述，以下實(shí)施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。

一種同時(shí)檢測(cè)食品中防腐劑、甜味劑、著色劑的方法，該方法包括如下步驟：

1)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：

稱取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品各1mg，共同加入1L超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為1mg/L的1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A；

稱取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品各3mg，共同加入1L超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為3mg/L的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A；

稱取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品各7mg，共同加入1L超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為7mg/L的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A；

稱取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品各10mg，共同加入1L超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為10mg/L的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A；

稱取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品各20mg，共同加入1L超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為20mg/L的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A；

稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品各0.12mg，共同加入至超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為0.12mg/L的1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B；

稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品各0.36mg，共同加入至超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為0.36mg/L的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B；

稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品各1mg，共同加入至超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為1mg/L的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B；

稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品各5mg，共同加入至超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為5mg/L的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B；

稱取檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品各25mg，共同加入至超純水，配制成標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度均為25mg/L的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B；

將1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液A與1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液B按體積比1:1自1號(hào)至5號(hào)逐個(gè)對(duì)應(yīng)混合制成1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液C，備用；

2)樣品工作液的制備：

待測(cè)樣品混勻后稱取適量加入25mL比色管中，超聲30min(或煮沸10min)溶解、加水定容混勻，采用0.45μm濾膜過(guò)濾，制成樣品工作液；

待測(cè)樣品選用超純水作為提取溶劑，再經(jīng)過(guò)超聲提取或煮沸的方式進(jìn)行前處理。

待測(cè)樣品選用乙酸鋅與亞鐵氰化鉀作為蛋白沉淀劑先進(jìn)行除蛋白。

超純水符合《GB/T 6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法》中一級(jí)水的要求。

3)采用液相色譜法進(jìn)行分析：

將1至5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液C與樣品工作液注入液相色譜儀，進(jìn)行液相色譜分析。

液相色譜儀采用Agilent 1200液相色譜儀。

液相色譜條件為：

色譜柱：Agilent SB-C184.6mm×150mm；

流動(dòng)相：有機(jī)相為甲醇，水相為0.02mol/L乙酸銨溶液；

流速：1mL/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：210-254nm；

柱溫：30℃；

進(jìn)樣量：20μL；

檢測(cè)器采用紫外檢測(cè)器或DAD檢測(cè)器。

流動(dòng)相的洗脫條件為梯度洗脫：0min甲醇：乙酸銨水溶液：10:90；9min甲醇：乙酸銨水溶液：24:76；13min甲醇：乙酸銨水溶液：35:65；23min甲醇：乙酸銨水溶液：98:2；26min甲醇：乙酸銨水溶液：98:2；30min甲醇：乙酸銨水溶液：10:90。

紫外檢測(cè)器的檢測(cè)參數(shù)為：檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；所述DAD檢測(cè)器的檢測(cè)參數(shù)為，檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm及254nm波長(zhǎng)。

以標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合工作液C中各標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積與樣品工作液中待測(cè)樣品的峰面積作比較，保留時(shí)間定性，峰面積定量，外標(biāo)法進(jìn)行計(jì)算。

圖1中示出了11種食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)品紫外檢測(cè)器色譜圖。其中：出峰順序：5.762min安賽蜜，6.765min檸檬黃，7.679min苯甲酸，8.536min莧菜紅，8.827min糖精鈉，9.352min脫氫乙酸，9.915min山梨酸，14.014min胭脂紅，16.266min日落黃，18.176min誘惑紅，19.864min亮藍(lán)。

上述色譜圖對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度為：安賽蜜1mg/L，檸檬黃0.12mg/L，苯甲酸1mg/L，莧菜紅0.12mg/L，糖精鈉1mg/L，脫氫乙酸1mg/L，山梨酸1mg/L，胭脂紅0.12mg/L，日落黃0.12mg/L，誘惑紅0.12mg/L，亮藍(lán)0.12mg/L。

本方法各待測(cè)物質(zhì)檢出限為：安賽蜜0.4mg/kg，檸檬黃0.04mg/kg，苯甲酸0.30mg/kg，莧菜紅0.02mg/kg，糖精鈉0.18mg/kg，脫氫乙酸0.20mg/kg，山梨酸0.30mg/kg，胭脂紅0.016mg/kg，日落黃0.021mg/kg，誘惑紅0.018mg/kg，亮藍(lán)0.03mg/kg，能滿足國(guó)標(biāo)要求。

本實(shí)驗(yàn)采用外標(biāo)法定量，選擇某已知空白樣品進(jìn)行三水平加標(biāo)回收試驗(yàn)，每一水平平行測(cè)定3次，計(jì)算平均加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，以驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度與精密度。

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸添加三水平分別為10mg、20mg、100mg，檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、誘惑紅、亮藍(lán)添加三水平分別各1mg、5mg、25mg，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果見表1所示：

表1回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，此方法回收率高，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小。與國(guó)標(biāo)中分別對(duì)上述11種食品添加劑進(jìn)行檢測(cè)的方法相比，節(jié)省了人力物力，降低了實(shí)驗(yàn)成本，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間，提升了工作效率。分別檢測(cè)上述項(xiàng)目需要色譜分析時(shí)間120分鐘，本實(shí)驗(yàn)中的方法色譜分析時(shí)間為35分鐘，節(jié)省檢測(cè)分析時(shí)間240％。

盡管為說(shuō)明目的公開的本發(fā)明的實(shí)施例，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以理解，在不脫離本發(fā)明及所附權(quán)利要求的精神和范圍內(nèi)，各種替換、變化和修改都是可能的，因此本發(fā)明的范圍不局限于實(shí)施例所公開的內(nèi)容。