本發(fā)明涉及一種布洛芬及酮基布洛芬對映異構(gòu)體的拆分方法。(二)
背景技術(shù)：
：2-取代芳基丙酸類衍生物是一類非甾體抗炎鎮(zhèn)痛消炎藥或者是合成非甾體抗炎鎮(zhèn)痛消炎藥的關(guān)鍵中間體。這類藥物臨床已廣泛應(yīng)用以及進(jìn)入臨床試驗的包括萘普生、布洛芬、酮洛芬、氟比洛芬等二十余種。除了S-萘普生，其它2-芳基丙酸類非甾體類抗炎藥都以消旋體形式上市。這類藥物之所以成為密集研究的焦點，一是由于它們在臨床上的廣泛應(yīng)用，另一則是由于它們存在許多共同點的同時，其對映體又存在著不同的生物學(xué)特性。生物學(xué)行為的不同包括立體選擇性的蛋白結(jié)合，葡萄糖醛酸化和代謝，以及這類藥物中一部分R-對映體向S-對映體的單向轉(zhuǎn)化。這些不同的生物學(xué)特性也影響了藥物的藥效學(xué)和藥動學(xué)，因此，對2-取代-芳基丙酸衍生物對映體的拆分顯得尤為重要。目前，2-芳基丙酸類藥物對映體的獲得研究國內(nèi)外已有很多報道，主要有不對稱合成法、生物法以及色譜法等。不對稱合成法是獲得手性藥物的理想方法，該方法采用不對稱催化劑進(jìn)行誘導(dǎo)反應(yīng)，再經(jīng)過一系列的后續(xù)處理，以得到較為純凈的對映體。2-芳基丙酸類物質(zhì)采用不對稱合成法可得到較為純凈的單一對映體，該方法是早期單一手性2-芳基丙酸類物質(zhì)獲取的主要方法。采用該方法獲取的單一對映體相對純度較高，但該方法制備過程復(fù)雜，樣品后續(xù)處理副產(chǎn)物難以去除，且價格較為昂貴。生物拆分法，通常是采用微生物菌體、酶或者動植物組織等生物材料與外消旋手性藥物作用得到單一對映體的方法。該方法主要利用酶等生物材料的單一立體選擇性，實質(zhì)是酶催化的動力學(xué)拆分。整個反應(yīng)過程時間較長，反應(yīng)條件要求較高，且后續(xù)處理較為復(fù)雜。目前常用于2-芳基丙酸類物質(zhì)的色譜拆分方法主要有毛細(xì)管電泳法、高速逆流色譜法以及高效液相色譜法。毛細(xì)管電泳法分離速度快，但分離量較小?，F(xiàn)階段采用高速逆流色譜法拆分2-芳基丙酸類物質(zhì)的文獻(xiàn)相對較少，該方法需尋求合適的溶劑體系，且大多選擇環(huán)糊精系列物質(zhì)作為手性添加劑對2-取代芳基丙酸衍生物進(jìn)行拆分，成本較大，較為復(fù)雜。高效液相色譜法拆分2-取代芳基丙酸衍生物，主要有固定相法和流動相添加法，前者采用手性材料作為固定相，價格昂貴，成本較高，后者在流動相中加入手性試劑，如環(huán)糊精等，后處理較為復(fù)雜，難以拿到較為純凈的單一對映體。(三)技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明目的是提供一種布洛芬及酮基布洛芬對映異構(gòu)體的拆分方法，解決了流動相添加法后處理復(fù)雜以及手性固定相法較為昂貴等問題。本發(fā)明采用1R,2S,5R-(-)-薄荷醇作為手性試劑，對布洛芬與酮基布洛芬進(jìn)行酯化反應(yīng)，得到非對映異構(gòu)體，再用非手性色譜柱進(jìn)行拆分分離，這種柱前衍生2-取代芳基丙酸的色譜拆分方法相對于以上拆分方法具有高效，經(jīng)濟(jì)實用，分離度高等優(yōu)點。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：本發(fā)明提供一種布洛芬及酮基布洛芬對映異構(gòu)體的拆分方法，所述方法為：(1)預(yù)處理：將布洛芬或酮基布洛芬與1R,2S,5R-(-)-薄荷醇和對甲苯磺酸混合，溶于甲苯中，加熱攪拌回流，TLC跟蹤至反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾除去甲苯，用石油醚與乙酸乙酯作為淋洗液進(jìn)行硅膠柱層析，TLC檢測流出液，收集目標(biāo)組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥，獲得布洛芬薄荷醇酯或酮基布洛芬薄荷醇酯；所述布洛芬或酮基布洛芬與1R,2S,5R-(-)-薄荷醇和對甲苯磺酸物質(zhì)的量之比為1:1.2:0.05，所述甲苯體積用量以布洛芬或酮基布洛芬物質(zhì)的量計為3ml/mmol；(2)拆分：將步驟(1)布洛芬薄荷醇酯或酮基布洛芬薄荷醇酯用甲醇溶解后作為供試品進(jìn)行高效液相色譜法拆分，色譜柱為YMC-ODS-C18(4.6mm×150mm，10μm)，流動相為甲醇與水混合液或乙腈與水混合液，流速為0.6-0.8mL/min，檢測波長為212-254nm；柱溫為30-40℃，獲得布洛芬薄荷醇酯非對映異構(gòu)體或者酮基布洛芬薄荷醇酯非對映異構(gòu)體。進(jìn)一步，步驟(2)所述布洛芬薄荷醇酯拆分時的流動相為乙腈與水以體積比90:10的混合溶液。進(jìn)一步，步驟(2)所述酮基布洛芬薄荷醇酯拆分時的流動相為甲醇與水以體積比75:25的混合溶液。進(jìn)一步，步驟(2)所述布洛芬薄荷醇酯拆分時的流速為0.6mL/min，流動相為乙腈與水體積比90:10，檢測波長為254nm，柱溫為30℃。進(jìn)一步，步驟(2)所述酮基布洛芬薄荷醇酯拆分時的流速為0.8mL/min，流動相為甲醇與水體積比80:20，檢測波長為254nm，柱溫為30℃。按照本發(fā)明，因酯化反應(yīng)為可逆反應(yīng)，故本反應(yīng)過程中需采用分水器進(jìn)行脫水處理，反應(yīng)進(jìn)程采用TLC進(jìn)行跟蹤檢測，且反應(yīng)結(jié)束后，采用200-300目硅膠柱進(jìn)行分離純化。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用的利用手性衍生試劑對布洛芬與酮基布洛芬進(jìn)行柱前衍生化高效液相色譜手性拆分方法簡便易行，流動相簡單，不需要加入手性添加劑，后處理簡單，且經(jīng)濟(jì)實用，靈敏度高，能快速有效的分離2-取代芳基丙酸衍生物(布洛芬及酮基布洛芬)。(四)附圖說明圖1為實施例1布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖2為實施例3布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖3為實施例4布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖4為實施例5布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖5為實施例6布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖6為實施例7酮基布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖7為實施例8酮基布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖8為實施例9酮基布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖9為實施例10酮基布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖10為實施例11酮基布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖11為實施例12酮基布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖；圖12為實施例13酮基布洛芬薄荷酯液相色譜分離圖。(五)具體實施方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此：實施例1：布洛芬拆分(1)向圓底燒瓶中依次加入1R,2S,5R-(-)-薄荷醇(1.87g，12mmol)，布洛芬(2.06g，10mmol)和對甲苯磺酸(0.1g，0.5mmol)，其摩爾比為1.2:1：0.05，溶于30mL甲苯中，加熱攪拌回流，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾除去甲苯，用石油醚與乙酸乙酯作為淋洗液進(jìn)行200-300目硅膠柱層析，TLC檢測流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥，得到布洛芬薄荷醇酯純品1.99g。(2)取10mg步驟(1)所得的布洛芬薄荷醇酯，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，并用甲醇定容，得到供試品溶液；將供試品溶液按下述液相色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析；采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；乙腈-水＝90:10，v/v為流動相；流速為0.6mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖1所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為30.106min和31.908min，分離度為1.613。實施例2：布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)。采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；流動相分別為乙腈與水的體積比為100:0，95:5，90:10，85:15，80:20；流速為0.6mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液分別采用上述液相色譜條件分離，所得的兩異構(gòu)體分離度如表1所示：表1不同條件下異構(gòu)體分離度乙腈-水100:095:590:1085:1580:20分離度1.1631.2491.2391.2051.100從上表1可以看出，隨著乙腈與水比例的變化，兩異構(gòu)體的分離度略有變化，但影響較小，本方法適用性較高。實施例3：布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)。采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；乙腈-水＝90:10，v/v為流動相；流速為0.7mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖2所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為26.387min和27.982min，分離度為1.240。實施例4：布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；乙腈-水＝90:10，v/v為流動相；流速為0.8mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖3所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為23.207min和24.610min，分離度為1.215。實施例5：布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；乙腈-水＝90:10，v/v為流動相；流速為0.6mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為25℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖4所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為28.253min和29.879min，分離度為1.185。實施例6：布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；乙腈-水＝90:10，v/v為流動相；流速為0.6mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為35℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖5所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為26.232min和27.663min，分離度為1.123。實施例7：酮基布洛芬拆分(1)向圓底燒瓶中依次加入1R,2S,5R-(-)-薄荷醇(1.87g，12mmol)，酮基布洛芬(2.54g，10mmol)和對甲苯磺酸(0.1g，0.5mmol)，其摩爾比為1.2:1：0.05，溶于30mL甲苯中，加熱攪拌回流，TLC檢測反應(yīng)進(jìn)程。待反應(yīng)結(jié)束后，蒸餾除去甲苯，用石油醚與乙酸乙酯作為淋洗液進(jìn)行柱層析，TLC檢測流出液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥，得到酮基布洛芬薄荷醇酯純品2.45g。(2)取10mg步驟(1)所得的酮基布洛芬薄荷醇酯，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，并用甲醇定容，得到供試品溶液；將供試品溶液按下述液相色譜條件進(jìn)行高效液相色譜分析；采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；甲醇-水＝75:25，v/v為流動相；流速為0.8mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖6所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為68.916min和73.790min，分離度為1.013。實施例8：酮基布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；甲醇-水＝80:20，v/v為流動相；流速為0.8mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖7所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為30.210min和31.969min，分離度為0.749。實施例9：酮基布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；甲醇-水＝70:30，v/v為流動相；流速為0.8mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖8所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為175.223min和189.350min，分離度為1.451。實施例10：酮基布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；甲醇-水＝75:25，v/v為流動相；流速為0.7mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖9所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為82.902min(峰a)和88.936min(峰b)，分離度為1.184。實施例11：酮基布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；甲醇-水＝75:25，v/v為流動相；流速為0.9mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖10所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為61.889min(峰a)和66.281min(峰b)，分離度為0.998。實施例12：酮基布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；甲醇-水＝75:25，v/v為流動相；流速為0.8mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為25℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖11所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為77.322min(峰a)和83.034min(峰b)，分離度為1.190。實施例13：酮基布洛芬拆分(1)同實施例1中步驟(1)。(2)同實施例1中步驟(2)采用如下液相分析條件進(jìn)行分析：色譜柱：YMC-ODS-C18，4.6mm×150mm，10μm；甲醇-水＝75:25，v/v為流動相；流速為0.8mL/min；檢測波長為254nm；柱溫為35℃；進(jìn)樣體積10μL。供試品溶液采用上述液相色譜條件所得的液相色譜分離圖如圖12所示，從圖中可以看出，兩非對映異構(gòu)體的出峰時間分別為67.130min(峰a)和71.684min(峰b)，分離度為1.019。當(dāng)前第1頁1 2 3