本發(fā)明涉及一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測(cè)方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

麝香壯骨膏收載于一九九六年版中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)。麝香壯骨膏具有鎮(zhèn)痛、消炎之功效。用于風(fēng)濕痛，關(guān)節(jié)痛，腰痛，神經(jīng)痛，肌肉酸痛，扭傷，挫傷。

麝香壯骨膏配方組成如下：八角茴香、山柰、生川烏、生草烏、麻黃、蒼術(shù)、白芷、當(dāng)歸、干姜、人工麝香、薄荷腦、水楊酸甲酯、硫酸軟骨素鈉、冰片、鹽酸苯海拉明、樟腦等。輔料為橡膠、氧化鋅、立德粉、松香、凡士林、羊毛脂。麝香壯骨膏效果良好，經(jīng)臨床驗(yàn)證，療效顯著，備受患者青睞。目前，麝香壯骨膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)性狀、外觀、含膏量、耐熱、微生物限度有規(guī)定，并未對(duì)其中各成分進(jìn)行鑒別試驗(yàn)及含量測(cè)定。文獻(xiàn)高效液相色譜法測(cè)定止痛消炎軟膏中水楊酸甲酯的含量(今日藥學(xué)2014年5月第24卷第05期)提供了水楊酸甲酯的含量測(cè)定方法，所用流動(dòng)相為體積比80:20的甲醇:水，檢測(cè)波長(zhǎng)300nm，其方法不涉及鹽酸苯海拉明的含量檢測(cè)。專利文獻(xiàn)CN104569279A一種消炎鎮(zhèn)痛膏的質(zhì)量檢測(cè)方法公開了鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量測(cè)定方法，其中鹽酸苯海拉明采用高效液相色譜法測(cè)定，而水楊酸甲酯采用氣相色譜測(cè)定。

現(xiàn)有技術(shù)中未發(fā)現(xiàn)利用同一色譜條件測(cè)定鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，也未發(fā)現(xiàn)麝香壯骨膏的其他檢測(cè)方法，麝香壯骨膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有待提高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測(cè)方法，該方法采用同一色譜條件可同時(shí)測(cè)定麝香壯骨藥物組合物中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量。

術(shù)語說明：

麝香壯骨膏：收載于一九九六年版中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十一冊(cè)的藥品名稱。標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：WS₃-B-2268-96。

麝香壯骨藥物組合物：是指用麝香壯骨膏原料藥配方制備的藥學(xué)上可接受的各種劑型的制劑。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種中藥麝香壯骨藥物組合物的含量檢測(cè)方法,其特征在于所述方法包括采用高效液相色譜法同一色譜條件同時(shí)測(cè)定麝香壯骨膏中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量。

根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選的，一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測(cè)方法，采用高效液相色譜法測(cè)定，步驟如下：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分?jǐn)?shù)比45～55:45～55的甲醇-硫酸銨溶液為流動(dòng)相，硫酸銨溶液濃度為0.1％～1％，g/V；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；

對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對(duì)照品和水楊酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加80％～100％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.2～0.4mg、水楊酸甲酯0.8～1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，加上述體積分?jǐn)?shù)比45～55:45～55的甲醇-硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；

供試品溶液的制備：取麝香壯骨藥物組合物適量相當(dāng)于鹽酸苯海拉明9mg-18mg，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％～100％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取1～3小時(shí)，放冷，再稱定重量，用80％～100％(V/V)甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液20～30mL置50mL容量瓶中，加上述體積分?jǐn)?shù)比45～55:45～55的甲醇-硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，本發(fā)明所述的含量檢測(cè)方法照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測(cè)定。

本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，所述的流動(dòng)相為體積份數(shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液。

本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，所述對(duì)照品溶液的制備中，加入濃度為80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液。

本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，所述供試品溶液的制備中，加入甲醇的濃度為80％(V/V)。

本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，所述供試品溶液的制備中，回流提取時(shí)間為2小時(shí)。

本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)選的，所述對(duì)照品溶液和供試品溶液的制備中甲醇-硫酸銨溶液的體積分?jǐn)?shù)比45～55:45～55；優(yōu)選為50:50。

本發(fā)明更進(jìn)一步優(yōu)選的，一種中藥麝香壯骨膏的含量檢測(cè)方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測(cè)定：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分?jǐn)?shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；

對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對(duì)照品和水楊酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積分?jǐn)?shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過即得；

供試品溶液的制備：取麝香壯骨膏280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積分?jǐn)?shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

下述實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。

實(shí)驗(yàn)例1：含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)

1.儀器與試藥

儀器：LC-20AT高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器；

對(duì)照品：鹽酸苯海拉明對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院：批號(hào)100066-200807純度99.9％)；

水楊酸甲酯對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院：批號(hào)110707-201413純度99.7％)；

試劑：甲醇為色譜純，水為純化水，硫酸銨為分析純；

供試樣品：麝香壯骨膏為山東明人福瑞達(dá)衛(wèi)生材料有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：20160304、20160305、20160306。

2.色譜條件

檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇：通過比較200、205nm、210nm、215nm、220nm、225nm、230nm、258nm、300nm波長(zhǎng)處實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，高波長(zhǎng)處峰面積響應(yīng)值太小，低波長(zhǎng)處接近末端吸收，雜質(zhì)峰較多，在210nm處水楊酸甲酯和鹽酸苯海拉明均有良好響應(yīng)值，故選擇210nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

流動(dòng)相的選擇：以體積分?jǐn)?shù)比50:50:0.5的乙腈-水-三乙胺為流動(dòng)相時(shí)，出峰太早。以甲醇-硫酸銨溶液為流動(dòng)相時(shí)試驗(yàn)了不同體積比及0.1％～1％(g/V)的硫酸銨溶液，結(jié)果硫酸銨濃度低時(shí)柱效低，峰形不好看，以體積分?jǐn)?shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動(dòng)相時(shí)可達(dá)到良好效果。

綜上所述，色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分?jǐn)?shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm，流速1.0mL/min。

3.對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對(duì)照品和水楊酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積分?jǐn)?shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

4.供試品溶液的制備：取本品280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取25mL置50mL容量瓶中，用上述體積分?jǐn)?shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

5.提取方法的選擇：取本品280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，分別加熱回流提取1h、1.5h、2h、3h，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取25mL置50mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，測(cè)定。結(jié)果見表1，表明回流2小時(shí)即可將有效成分完全溶出，故選擇2h為供試品加熱回流時(shí)間。

表1提取方法的選擇

6.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)及陰性干擾試驗(yàn)

6.1按處方量比例制成不含鹽酸苯海拉明的麝香壯骨膏，然后按照供試品溶液制備方法制成鹽酸苯海拉明陰性對(duì)照液；

6.2按處方量比例制成不含水楊酸甲酯的麝香壯骨膏，然后按照供試品溶液制備方法制成水楊酸甲酯陰性對(duì)照液。

在上述色譜條件下，分別精密量取供試品溶液及陰性對(duì)照溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，供試品色譜圖中鹽酸苯海拉明，水楊酸甲酯與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，且陰性對(duì)照無干擾。見附圖1～圖3。

7.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備和線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品貯備液(鹽酸苯海拉明0.4987mg/mL,水楊酸甲酯1.9968mg/mL)1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、5.5mL、6.0mL分別置10mL量瓶中，加80％(V/V)甲醇至刻度搖勻。取上7個(gè)濃度的對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量均為10μl，按含量測(cè)定方法測(cè)定峰面積，并以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，數(shù)據(jù)見表2和表3，標(biāo)準(zhǔn)曲線見下圖4～圖5。

表2鹽酸苯海拉明線性關(guān)系考察

結(jié)果：鹽酸苯海拉明回歸方程為：Y＝31094X+54838，r＝0.9998，在49.87μg/mL～299.22μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

表3水楊酸甲酯線性關(guān)系考察

結(jié)果：水楊酸甲酯回歸方程為：Y＝40275X+7660404，r＝0.9986，在199.68μg/mL～1098.24μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

8.精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品貯備液4.0mL置10mL量瓶中，加80％(V/V)甲醇稀釋至刻度，搖勻，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10μl。結(jié)果見表4-表5。表明，儀器精密度良好。

表4儀器精密度(鹽酸苯海拉明)結(jié)果

表5儀器精密度(水楊酸甲酯)結(jié)果

9.穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品，按含量測(cè)定方法測(cè)定后，樣品置室溫下放置0h、2h、4h、8h、12h、24h，分別進(jìn)樣10μl，記錄峰面積，計(jì)算峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，結(jié)果見表6-表7。表明供試品溶液中的鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯室溫放置24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

表6鹽酸苯海拉明穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表

表7水楊酸甲酯穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表

10.重復(fù)性試驗(yàn)

取批號(hào)為20160304的樣品6份，每份280cm²，精密稱定每份含膏量，按含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量，并計(jì)算樣品含量的RSD值，結(jié)果見表8-表9。

表8鹽酸苯海拉明重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

表9水楊酸甲酯重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

11.回收率試驗(yàn)

取批號(hào)為20160304的樣品6份，每份140cm²，精密稱定每份含膏量，每份分別加入鹽酸苯海拉明對(duì)照品和水楊酸甲酯對(duì)照品，按含量測(cè)定項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表10和表11，表明該測(cè)定方法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

表10鹽酸苯海拉明回收率測(cè)定結(jié)果(n＝6)

表11水楊酸甲酯回收率測(cè)定結(jié)果(n＝6)

12.樣品測(cè)定

取麝香壯骨膏3批按含量測(cè)定方法測(cè)定，測(cè)定并計(jì)算鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，測(cè)定結(jié)果見表12和表13。

表12 3批麝香壯骨膏鹽酸苯海拉明的含量

表13 3批麝香壯骨膏水楊酸甲酯的含量

綜上：本發(fā)明含量測(cè)定的方法通過檢測(cè)麝香壯骨膏中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，從而檢測(cè)制劑的質(zhì)量。

本發(fā)明的有益效果如下：

本發(fā)明采用同一色譜條件同時(shí)檢測(cè)麝香壯骨膏中鹽酸苯海拉明和水楊酸甲酯的含量，操作簡(jiǎn)便、快速、檢測(cè)成本低、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好、且能較全面反映麝香壯骨膏的配方組成。麝香壯骨膏輔料為橡膠、氧化鋅、立德粉、松香、凡士林、羊毛脂，直接加熱回流后的樣品對(duì)柱子損害較大，柱效降低較快，供試品制備采用流動(dòng)相稀釋一步的方法以后，減小了對(duì)柱子的損害。本發(fā)明可用于對(duì)麝香壯骨膏進(jìn)行含量測(cè)定。

附圖說明

圖1是麝香壯骨膏鹽酸苯海拉明含量陰性對(duì)照高效液相色譜圖；其中，縱坐標(biāo)是電壓，單位：毫伏，橫坐標(biāo)是時(shí)間，單位：分鐘；

圖2是麝香壯骨膏水楊酸甲酯含量陰性對(duì)照高效液相色譜圖；

圖3是麝香壯骨膏含量樣品高效液相色譜圖；

圖4是鹽酸苯海拉明線性圖；其中，縱坐標(biāo)是峰面積，橫坐標(biāo)是濃度，單位：mg/mL；

圖5是水楊酸甲酯線性圖；其中，縱坐標(biāo)是峰面積，橫坐標(biāo)是濃度，單位：mg/mL。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例所述的效果。下述實(shí)施例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明，所用的麝香壯骨膏為山東明人福瑞達(dá)衛(wèi)生材料有限公司制備。

實(shí)施例1：

一種中藥麝香壯骨膏的含量檢測(cè)方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測(cè)定：

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積分?jǐn)?shù)比50:50甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于3000；

對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對(duì)照品和水楊酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.4mg、水楊酸甲酯1.6mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積分?jǐn)?shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過即得；

供試品溶液的制備：取麝香壯骨膏280cm²，剪成窄條，除去蓋襯，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積分?jǐn)?shù)比50:50的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

本品每100cm²含鹽酸苯海拉明(C₁₇H₂₁NO·HC l)不得少于4.8mg；水楊酸甲酯(C₈H₈O₃)不得少于18.0mg。

實(shí)施例2：

一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測(cè)方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比45:55甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對(duì)照品和水楊酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加90％甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.2mg、水楊酸甲酯0.8mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積比45:55甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：麝香壯骨藥物組合物2.4g，約相當(dāng)于鹽酸苯海拉明9mg，置具塞錐形瓶中，精密加入90％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用90％(V/V)甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積比45:55甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

本品每100cm²含鹽酸苯海拉明(C₁₇H₂₁NO·HC l)不得少于4.8mg；水楊酸甲酯(C₈H₈O₃)不得少于18.0mg。

實(shí)施例3：

一種麝香壯骨藥物組合物的含量檢測(cè)方法，步驟如下：

照中國藥典2015年版四部通則0512高效液相色譜法測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比55:45的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。理論板數(shù)按鹽酸苯海拉明峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

對(duì)照品溶液的制備：取鹽酸苯海拉明對(duì)照品和水楊酸甲酯對(duì)照品適量，精密稱定，加80％(V/V)甲醇制成每1mL含鹽酸苯海拉明0.2mg、水楊酸甲酯0.8mg的混合溶液，取5mL置10mL容量瓶中，用上述體積比55:45的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備：麝香壯骨藥物組合物1g，約相當(dāng)于鹽酸苯海拉明9mg，置具塞錐形瓶中，精密加入80％(V/V)甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流提取2小時(shí)，放冷，再稱定重量，用80％(V/V)甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液25mL置50mL容量瓶中，加上述體積比55:45的甲醇-1％(g/V)硫酸銨溶液流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

測(cè)定法：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL,注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

本品每100cm²含鹽酸苯海拉明(C₁₇H₂₁NO·HC l)不得少于4.8mg；水楊酸甲酯(C₈H₈O₃)不得少于18.0mg。