本發(fā)明屬于雙載藥纖維支架的應(yīng)用領(lǐng)域，特別涉及一種ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

癌癥是一種嚴重危害人類健康和生命的疾病，其危害性僅次于心血管疾病。當今世界控制癌癥的主要目標就是降低癌癥的死亡率，提高生存率。經(jīng)過近百年的努力，癌癥從不治之癥能達到如今治愈率達到l/3以上的成果，這些主要得力于現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展。目前，手術(shù)、放療和化療是治療腫瘤的三大常規(guī)治療方法，手術(shù)治療為最常見的治療方法，但是術(shù)后復發(fā)率較高。手術(shù)過程中可能引起各種感染，這可能會導致癌癥的復發(fā)并且影響抗癌藥物的療效。世界衛(wèi)生組織最新數(shù)據(jù)顯示，到2020，全球癌癥發(fā)病率將增加50％，換句話說，每年將新增癌癥患者多達1500萬人。此外，炎癥和其他因素導致腫瘤的環(huán)境是酸性的，很多研究利用此特點，借助ph敏感材料達到藥物的可控釋放。

靜電紡絲技術(shù)普遍應(yīng)用于傷口敷料、組織工程支架、藥物釋放系統(tǒng)等。采用靜電紡絲法所得的組織工程支架，接近于天然細胞外基質(zhì)中纖維的尺寸。而同軸靜電紡是在靜電紡的基礎(chǔ)上稍作改裝，將傳統(tǒng)的單噴絲頭改造為含有兩個針頭的噴絲頭，兩種不同的紡絲液分從兩個針頭中噴出，在噴嘴處匯合形成復合射流，最終形成核殼結(jié)構(gòu)的纖維。常規(guī)靜電紡材料在藥物緩釋上效果不佳，利用同軸靜電紡可將需要緩釋的藥物載在芯層，有殼層的包裹使得芯層藥物釋放緩慢。迄今為止，已經(jīng)探索出多種用于制備芯-殼結(jié)構(gòu)纖維的技術(shù)，比如自組裝法、激光消融法和基于靜電紡絲技術(shù)的tuft(tubesbyfibertemplates)法等。但是這些方法的制備過程和步驟相對靜電紡比較復雜難于控制。

明膠是一種極性很強的生物高分子,含有大量的酞胺基，是天然蛋白質(zhì)變性而來，生物相容性好，代謝的最終產(chǎn)物是水和二氧化碳，可通過正常的新陳代謝排除體外，而中間產(chǎn)物乳酸也是體內(nèi)糖類正常代謝的產(chǎn)物，不會產(chǎn)生副作用和細胞毒性。在體內(nèi)可降解，滿足作為組織工程支架的要求。明膠屬于親水性材料，可溶于水，不能滿足實驗需要，在使用過程中，需要使用交聯(lián)劑改善其性能。

聚乳酸己內(nèi)醋(plcl)是一種脂肪族聚酯共聚物。物相容性好，在體內(nèi)可完全降解且無毒副作用，力學性能強，可紡性高，能較好的應(yīng)用在軟骨組織、骨組織、血管、尿路上皮組織、心臟組織等組織工程。

碳酸氫鈉(化學式：nahco3)，俗稱小蘇打、蘇打粉、重曹、焙用堿等。易溶于水的白色堿性粉末，在與水結(jié)合后開始起作用釋出二氧化碳co2，在酸性液體中反應(yīng)更快，而隨著環(huán)境溫度升高，釋出氣體越快，水溶液呈弱堿性。

環(huán)丙沙星，白色粉末狀，對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、支原體等都有很強的抗菌活性。它是典型的兩性化合物，c‐3位含有羧酸基團，c‐7位含有哌嗪基團，屬于a‐酮酸類物質(zhì)，在酸性或堿性條件下加熱均可發(fā)生脫羧反應(yīng)。

鹽酸阿霉素(doxouribicn)為兩親性蒽環(huán)類抗生素，抗腫瘤適應(yīng)癥較廣。是一類作用效果強的抗腫瘤藥物，適用于治療白血病、惡性淋巴瘤、乳腺癌、肉瘤、肺癌、膀胱癌等。鹽酸阿霉素的作用機理是通過對rna和dna合成的抑制(對rna的抑制作用極強)，可殺死各種生長周期的腫瘤細胞。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架的應(yīng)用，該方法實驗原理簡單，操作簡單，所得纖維支架生物相容性好，可降解，力學性能好，ph敏感性使得藥物釋放實現(xiàn)可控性，具有消炎和抗癌的作用，且能起到抗癌藥的緩釋效果，在組織工程支架方面具有巨大應(yīng)用潛能。

本發(fā)明的一種ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架的應(yīng)用，ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架作為組織工程支架的應(yīng)用。

ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架在交聯(lián)劑中進行交聯(lián)后用于組織工程支架；

其中ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架的制備，包括：

(1)將明膠溶于溶劑中，然后依次加入碳酸氫鈉飽和溶液、抗菌藥物，攪拌溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(2)將聚乳酸己內(nèi)酯plcl溶于溶劑中，然后加入抗癌藥物，攪拌溶解，得到芯層plcl紡絲液；

(3)將上述紡絲液進行同軸靜電紡絲，得到ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架。

所述步驟(1)、(2)中溶劑均為六氟異丙醇hfip。

所述步驟(1)中抗菌藥物為環(huán)丙沙星。

所述步驟(1)中殼層明膠濃度為14-16％(w/v)，抗菌藥物相對于明膠的濃度為9-11％(w/w)。

所述步驟(2)中抗癌藥物為抗癌藥dox。

所述步驟(2)中芯層plcl紡絲液中plcl的濃度為4-6％(w/v)，抗癌藥鹽酸阿霉素(dox)在plcl中的質(zhì)量百分比為4-6％(w/w)。

所述步驟(3)中同軸靜電紡的工藝參數(shù)為：注射器規(guī)格為5ml；同軸針頭內(nèi)部直徑約為0.6-0.7mm，外部直徑約為1.4-1.4mm；噴出流速殼層為0.6-0.8ml/h，芯層為0.2-0.4ml/h；電壓為15-20kv，接收距離為25-30cm，紡絲時間為5-9h，鋁箔收集，并在鋁箔上放置20個圓形載玻片收集；環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％。

步驟(3)得到的ph敏感性同軸聚乳酸己內(nèi)酯plcl/明膠雙載藥纖維支架放在交聯(lián)劑中進行交聯(lián)，交聯(lián)后的纖維進行接觸角測試，力學性能測試，抗菌實驗，藥物釋放，細胞毒性實驗，降解實驗。

所述交聯(lián)劑為戊二醛，濃度為25％(g/ml)交聯(lián)時間為8-10h。

力學測試，將纖維裁剪為1*5cm大小。

抗菌實驗中：抗菌使用菌種是大腸桿菌(atcc29522)和金黃色葡萄球菌(atcc6538)。

藥物釋放的緩沖溶液，為磷酸鹽緩沖溶液(ph7.4，血液ph)和醋酸鹽緩沖液(ph5.0，腫瘤環(huán)境ph)。

細胞毒性實驗所用細胞為纖維細胞(l929)和肝癌細胞(smmc-7721)；

細胞毒性實驗培養(yǎng)纖維細胞用的是dmem高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)基，培養(yǎng)肝癌細胞用的是rpmi1640不完全培養(yǎng)基。

本發(fā)明中殼層藥物為抗菌性藥物環(huán)丙沙星，芯層藥物為抗癌藥鹽酸阿霉素(doxorubicinhydrochloride)；另外，在殼層加入碳酸氫鈉，使得纖維支架具有ph敏感性，在酸性條件下釋藥快，堿性或中性條件下釋藥慢。載藥纖維支架可置于腫瘤的手術(shù)切除后的部位，抗菌藥用于消除手術(shù)過程中的感染，抗癌藥用于癌癥治療及防治癌癥復發(fā)。本發(fā)明具有藥物控釋功能的纖維支架，該支架生物相容性好，可降解，具有ph敏感性，力學性能好，可起到消炎和抗癌的作用。

有益效果

(1)本發(fā)明實驗原理簡單，操作簡單；

(2)本發(fā)明所使用的原材料較易得到；

(3)本發(fā)明所得纖維支架生物相容性好，可降解，較強的力學性能，具有抗癌療效，可用于癌癥治療。

附圖說明

圖1為明膠、plcl和載藥纖維支架的應(yīng)力應(yīng)變曲線；

圖2載藥前后納米纖維的抗菌圖；其中a為未載藥纖維在大腸桿菌中的抑菌圈；b為載藥纖維在大腸桿菌中的抑菌圈；c為未載藥纖維在金黃色葡萄球菌的抑菌圈；d為載藥纖維在金黃色葡萄球菌中的抑菌圈；

圖3載藥同軸纖維在醋酸和磷酸鹽緩沖液中的環(huán)丙沙星釋藥圖；

圖4載藥同軸纖維在醋酸和磷酸鹽緩沖液中的dox釋藥圖；

圖5載藥纖維對l929和smmc-7721的細胞毒性圖；其中a是同軸纖維在l929上的細胞毒性實驗圖；b是同軸纖維在7721上的細胞毒性實驗圖；

圖6載藥纖維浸泡在醋酸和磷酸鹽緩沖液中的sem圖；其中a是同軸纖維在磷酸緩沖液中浸泡3天的sem圖；b是同軸纖維在醋酸緩沖液中浸泡3天的sem；c是同軸纖維在磷酸緩沖液中浸泡兩個月的sem；d是同軸纖維在醋酸緩沖液中浸泡兩個月的sem，圖中靶值為5μm。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。

實施例1

(1)秤取0.452g明膠溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中。

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.217ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0453g環(huán)丙沙星，用磁力攪拌器攪拌27h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.154gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中，后加入0.0752gdox，用磁力攪拌器攪拌28h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液；

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.7ml/h，芯層為0.4ml/h，靜電壓為17kv，接收距離為28cm，接收裝置為鋁箔，并在鋁箔上放20個圓形玻片，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為7.5h。(5)依照以上步驟將得到載藥的同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，放在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)8小時，放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)將玻片剪下剝?nèi)ヤX箔，用接觸角分析儀(322w,thermocahnco.,usa)對纖維的接觸角進行測試。將2μl的小液滴，滴在纖維表面，在5s的時間內(nèi)記錄接觸角值，實驗反復5次，取平均值。得到纖維的接觸角數(shù)據(jù)，正如文獻所述，明膠為親水性的，接觸角為32±3.6°，plcl為疏水性的，接觸角為124±2.7°，而未載藥同軸纖維支架的接觸角為23±4.2°，載藥同軸纖維支架的接觸角為12±0.2°，因碳酸氫鈉是親水性的，所載藥物也是親水性的，使得載藥纖維親水性較好。

表1

實施例2

(1)秤取0.450g明膠溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中；

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.219ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，用磁力攪拌器攪拌27h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到純明膠紡絲液；

(3)用5ml注射器抽取上述紡絲液，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速為0.8ml/h，靜電壓為15kv，接收距離為25cm，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為5h。

(5)依照以上步驟將得到純明膠纖維支架，放在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)8小時，放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)將纖維裁剪為1*5cm大小，固定在力學測試儀上(hy-9940fs,china)進行測試，實驗反復5次取平均值，得純明膠纖維支架的應(yīng)力應(yīng)變曲線，如圖1，明膠斷裂應(yīng)力為1.483±0.2mpa，斷裂伸長率為22.52％±1.1，明膠的力學性能不佳。

實施例3

(1)秤取0.156gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中，用磁力攪拌器攪拌26h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到plcl紡絲液。

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速為0.4ml/h，靜電壓為17kv，接收距離為27cm，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為6h。

(5)依照以上步驟將得到聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)纖維支架，放在真空干燥箱中干燥24h，將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)9小時，放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)將纖維裁剪為1*5cm大小，固定在力學測試儀上(hy-9940fs,china)進行測試，實驗反復5次取平均值，得plcl纖維支架的應(yīng)力應(yīng)變曲線，如圖1，plcl斷裂應(yīng)力為3.025±0.5mpa，斷裂伸長率為6.09±1.3％，plcl的力學性能較好。

實施例4

(1)秤取0.450g明膠溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中；

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.219ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0454g環(huán)丙沙星，用磁力攪拌器攪拌29h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.155gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中，后加入0.0751gdox，用磁力攪拌器攪拌30h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液。

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.8ml/h，芯層為0.3ml/h，靜電壓為19kv，接收距離為28cm，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為9h。

(5)依照以上步驟將得到載藥的同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，放在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)9小時，再放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)將纖維裁剪為1*5cm大小，固定在力學測試儀上(hy-9940fs,china)進行測試，實驗反復5次取平均值，得載藥纖維支架的應(yīng)力應(yīng)變曲線，如圖1，斷裂應(yīng)力為2.001±0.3mpa，斷裂伸長率為25.75±1.7％，纖維支架的力學性能因plcl的加入較好，滿足組織工程支架的要求。

實施例5

(1)秤取0.453g明膠溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中。

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.214ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，用磁力攪拌器攪拌28h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.156gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中，用磁力攪拌器攪拌28h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液；

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.6ml/h，芯層為0.3ml/h，靜電壓為18kv，接收距離為29cm，接收裝置為鋁箔，并在鋁箔上放置20個圓形玻片，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為9h。

(5)依照以上步驟將得到未載藥的同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，放在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)8小時，再放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)剪取6個帶有纖維支架的圓形玻片，將鋁箔揭去，放在預先配置好的分別含有大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的固體培養(yǎng)基上，每組三個平行樣，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，如圖2a為大腸桿菌，2b為金黃色葡萄球菌，圖中可見并沒有抑菌圈出現(xiàn)，說明纖維本身沒有抗菌性。

實施例6

(1)秤取0.451g明膠溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中。

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.216ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0452g環(huán)丙沙星，用磁力攪拌器攪拌27h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.155gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中，后加入0.0753gdox，用磁力攪拌器攪拌28h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液；

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.6ml/h，芯層為0.4ml/h，靜電壓為18kv，接收距離為27cm，接收裝置為鋁箔，并在鋁箔上放置15個圓形玻片，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為7.5h。

(5)依照以上步驟將得到載藥的同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，放在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)8小時，再放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)剪取6個帶有纖維支架的圓形玻片，將鋁箔揭去，放在預先配置好的分別含有大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的固體培養(yǎng)基上，置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，如圖2c為大腸桿菌，2d為金黃色葡萄球菌，圖中可見兩種菌均具有明顯的抑菌圈，載藥纖維膜對金黃色葡萄球菌的抗菌效果與其對大腸桿菌的抗菌效果具有相同的規(guī)律，均出現(xiàn)明顯的抑菌圈，抑菌圈大小34±3.9mm，說明所得到的載藥纖維支架具有良好的抗菌效果。

實施例7

(1)秤取0.752g明膠溶于5ml六氟異丙醇(hfip)中；

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.363ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，后加入0.075g環(huán)丙沙星，用磁力攪拌器攪拌28h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.203gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于4ml六氟異丙醇(hfip)中，后加入0.012dox，用磁力攪拌器攪拌29h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液。

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.8ml/h，芯層為0.4ml/h，靜電壓為19kv，接收距離為27cm，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為10h。

(5)依照以上步驟所得到同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)8小時，放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)將纖維從鋁箔上揭下，稱取0.091g，分別放在20ml磷酸鹽和醋酸鹽緩沖液中，設(shè)置三個平行實驗，均置于37℃、100次/min的恒溫震蕩器中。

(7)第一天每隔1h取樣，第二天每隔4h取樣，第3-7天每隔8h取樣，之后每24h取一次樣，取樣時間為40天，且每次取1ml介質(zhì)溶液，同時加入1ml新鮮的緩沖溶液，以保持介質(zhì)溶液的體積不變。

(8)將所取樣品用uv-1800型紫外分光光度計(uv-1800,shjhcompany)，在環(huán)丙沙星的最大吸收波長277nm處，分別測定所取樣品的吸光度，根據(jù)環(huán)丙沙星標準釋放曲線，繪制出其釋放曲線如圖3，在醋酸鹽緩沖液中總釋放量較大達81％，在磷酸鹽緩沖液中總釋放量達43％，可見環(huán)丙沙星的釋放有著明顯的ph敏感性，在酸性條件下釋藥多。在酸性條件下，碳酸氫鈉和氫離子反應(yīng)生產(chǎn)二氧化碳，二氧化碳溢出使纖維表面出現(xiàn)孔洞，促進環(huán)丙沙星的釋放。

實施例8

(1)秤取0.753g明膠溶于5ml六氟異丙醇(hfip)中；

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.364ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，后加入0.074g環(huán)丙沙星，用磁力攪拌器攪拌28h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.204gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于4ml六氟異丙醇(hfip)中，后加入0.014dox，用磁力攪拌器攪拌29h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液。

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.7ml/h，芯層為0.4ml/h，靜電壓為19kv，接收距離為29cm，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為9h。

(5)依照以上步驟所得到同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)9小時，放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)將纖維從鋁箔上揭下，稱取0.010g，分別放在20ml磷酸鹽和醋酸鹽緩沖液中，設(shè)置三個平行實驗，均置于37℃、100次/min的恒溫震蕩器中。

(7)第一天每隔1h取樣，第二天每隔4h取樣，第3-7天每隔8h取樣，之后每24h取一次樣，取樣時間為40天，且每次取1ml介質(zhì)溶液，同時加入1ml新鮮的緩沖溶液，以保持介質(zhì)溶液的體積不變。

(8)將所取樣品用uv-1800型紫外分光光度計(uv-1800,shjhcompany)，在dox的最大吸收波長488nm處，分別測定所取樣品的吸光度，根據(jù)dox標準釋放曲線，繪制出其釋放曲線如圖4，在醋酸鹽緩沖液中總釋放量較大達64％，在磷酸鹽緩沖液中總釋放量達38％，而dox也有著明顯的ph敏感性。因殼層的包裹，dox釋藥時間延長，達30天左右，起到藥物緩釋的效果。

實施例9

(1)秤取0.454g明膠溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中。

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.219ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，后加入0.0455g環(huán)丙沙星，用磁力攪拌器攪拌27h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.155gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于3ml六氟異丙醇(hfip)中，后加入0.0754gdox，用磁力攪拌器攪拌29h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液；

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.7ml/h，芯層為0.3ml/h，靜電壓為17kv，接收距離為27cm，接收裝置為鋁箔，并在鋁箔上放20個圓形玻片，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為8h。(5)依照以上步驟將得到載藥的同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，放在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)8小時，將玻片剪下剝?nèi)ヤX箔。

(6)將有纖維的玻片放在酒精蒸汽里2天，再在紫外燈下照24h滅菌，放入24孔板里，同時設(shè)置三個空白對照。在樣品和空白對照的孔里，加400μl的dmem高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)基，預培養(yǎng)2h。加入400μl的l929纖維細胞懸浮液(已知細胞濃度)，分別培養(yǎng)一天，三天，五天。

(7)將有纖維的玻片放在酒精蒸汽里2天，再在紫外燈下照24h滅菌，放入24孔板里，同時設(shè)置三個空白對照。在樣品和空白對照的孔里，加400μl的rpmi1640不完全培養(yǎng)基，預培養(yǎng)2h。加入400μl的smmc-7721細胞懸浮液(已知細胞濃度)，分別培養(yǎng)一天，三天，五天。

(8)其中，培養(yǎng)時間滿一天時，吸出培養(yǎng)基，加40μl噻唑藍(mtt)和360μldmem/rpmi1640，用鋁箔包好，放37℃搖床靜置4h。然后吸去液體，用pbs沖洗一次，然后加入400μl二甲基亞砜(dmso)，用鋁箔包好，放37℃、100次/min的搖床，15min-60min后，用酶標儀(multiskan,thermo-fisher,usa)，在450nm處，檢測吸光度得第一天數(shù)據(jù)。第三、五天做法同第一天。

(9)利用origin軟件處理纖維細胞的一、三、五天數(shù)據(jù)，得圖5a，圖中可見纖維細胞長勢良好，因藥物釋放的孔洞可促進細胞的粘附增值，刺激細胞生長，因而纖維支架上的細胞比空白對照上的多，說明纖維支架具有優(yōu)良的生物相容性。

(10)利用origin軟件處理癌細胞的一、三、五天數(shù)據(jù)，得圖5b，圖中可見癌細胞在空白對照中生長迅速，而在纖維支架上，因抗癌藥dox的存在，癌細胞生長受阻，在第五天可見明顯的下降趨勢。因而，本纖維支架有望應(yīng)用在癌癥的治療方面。

實施例10

(1)秤取0.753g明膠溶于5ml六氟異丙醇(hfip)中；

(2)將碳酸氫鈉配制為飽和溶液，量取0.363ml碳酸氫鈉飽和溶液，加入上述溶液中，后加入0.076g環(huán)丙沙星，用磁力攪拌器攪拌28h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到殼層明膠紡絲液；

(3)秤取0.202gplcl(pcl:plla＝1:1)溶于4ml六氟異丙醇(hfip)中，后加入0.013dox，用磁力攪拌器攪拌29h，直至溶質(zhì)在溶劑中完全溶解，得到芯層plcl紡絲液。

(4)用5ml注射器抽取上述紡絲液，固定在同軸靜電紡裝置上，調(diào)節(jié)紡絲參數(shù)進行電紡，噴出流速殼層為0.7.ml/h，芯層為0.4ml/h，靜電壓為19kv，接收距離為27cm，所處環(huán)境溫度為25℃，濕度為30-40％，紡絲時間為10h。

(5)依照以上步驟所得到同軸聚乳酸己內(nèi)酯(plcl)/明膠雙載藥纖維支架，在真空干燥箱中干燥24h。將干燥的纖維支架放入25％戊二醛蒸汽中，交聯(lián)8小時，放通風處使戊二醛完全揮發(fā)。

(6)將纖維從鋁箔上揭下，稱取0.091g，分別放在20ml磷酸鹽和醋酸鹽緩沖液中，設(shè)置三個平行實驗，均置于37℃、100次/min的恒溫震蕩器中。

(7)分別在第三天，一個月，兩個月的時候取樣，每次取樣都用掃描電鏡(sem；jsm-5600,joel,japan)拍照。6a為纖維支架浸泡在磷酸緩沖液中三天，6b為浸泡在醋酸緩沖液三天，6c為浸泡在磷酸緩沖液兩個月，6d是在醋酸緩沖液兩個月的電鏡圖，圖中可見，在第三天的時候纖維表面出現(xiàn)顆粒狀物質(zhì)，為釋放出的藥物，尤其在醋酸緩沖液中浸泡的纖維表面顆粒狀物質(zhì)更多，這與釋藥的結(jié)論相符合。一個月的時候出現(xiàn)些許降解，而在兩個月的時候出現(xiàn)大面積降解，說明此纖維支架是可降解的，滿足組織工程支架的需要。