個實施方案中，所述轉錄終 止子由56〇10側:4、569 10側:5、569 10側:6、或沈〇10側:36組成。在說明性實施方案 中，基因表達盒包含與轉基因可操作連接的泛素轉錄終止子，其中所述轉基因可W是殺蟲 劑抗性轉基因、除草劑耐受性轉基因、氮利用效率轉基因、水分利用效率轉基因、營養(yǎng)品質 轉基因、DNA結合轉基因、選擇標志物轉基因、或它們的組合。在一個實施方案中，提供了包 含與多接頭序列、非泛素轉基因、或二者的組合可操作連接的轉錄終止子的核酸載體，其中 所述轉錄終止子包含SEQ ID N0:4或與SEQ ID N0:4具有90%序列同一性的序列。在一個實 施方案中，轉錄終止子長度小于化b，在另一個實施方案中，轉錄終止子由SEQ ID N0:4的3' UTR序列組成。
[0129] 在一個實施方案中，提供了核酸構建體，其包含如本文中所述的泛素啟動子和3'- UTR。在一個實施方案中，所述核酸構建體包含泛素3'-UTR。在一個實施方案中，所述泛素 3 ' -UTR是柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素3 ' -UTR。
[0130] 在一個實施方案中，3'-UTR可W是二穗短柄草泛素1C化bilC)3'-UTR。
[0131]
[0132] 在一個實施方案中，3'-UTR可W是二穗短柄草泛素1化bil)3'-UTR。
[0133]
[0138] 在一個實施方案中，提供了核酸構建體，其包含如本文中所述的泛素啟動子和3'- 1]了尺，其中所述3'-1711?與56〇10腸：4、56〇10腸：5、56〇10腸：6、或56〇10腸：36至少 80%'85%'90%'91%'92%'93%'94%'95%'96%'97%'98%'99%'99.5%'99.8%、或 100%相同。在一個實施方案中，提供了包含如本文中所述的泛素啟動子和3'-UTR的核酸構 建體，其中所述泛素啟動子和3'-UTR可操作連接于多接頭的相反末端。在一個實施方案中， 提供了包含如本文中所述的泛素啟動子和3'-UTR的基因表達盒，其中所述泛素啟動子和 3'-UTR可操作連接于非泛素轉基因的相反末端。在一個實施方案中，3'-UTR由SEQ ID NO: 4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、或沈Q ID N0:36組成。在一個實施方案中，提供了包含如本 文中所述的泛素啟動子和3'-UTR的基因表達盒，其中所述泛素啟動子包含SEQ ID NO:2A且 3'-UTR包含SEQ ID N0:4,其中所述啟動子和3'-UTR可操作連接于非泛素轉基因的相反末 端。在一個實施方案中，3'-UTR由SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、或沈Q ID NO: 36組成。在一個實施方案中，所述啟動子由SEQ ID N0:2A、15或40組成，并且3'-UTR由SEQ ID N0:4組成。在說明性實施方案中，基因表達盒包含與轉基因可操作連接的泛素3'-UTR， 其中所述轉基因可W是殺蟲劑抗性轉基因、除草劑耐受性轉基因、氮利用效率轉基因、水分 利用效率轉基因、營養(yǎng)品質轉基因、DNA結合轉基因、選擇標志物轉基因、或它們的組合。在 另一個實施方案中，所述轉基因與泛素啟動子和自柳枝稷、二穗短柄草、或粟分離的相同泛 素基因的3 ' -UTR可操作連接。
[0139] 在一個實施方案中，提供了載體，其包含第一轉基因和/或多接頭W及第二轉基因 和/或多接頭，其中所述第一轉基因和/或多接頭與包含選自SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、 沈Q ID NO:3、和沈Q ID NO:35的序列的啟動子可操作連接、并且與包含選自沈Q ID N0:4、 沈Q ID N0:5、SEQ ID N0:6、或沈Q ID N0:36的序列的3'-UTR可操作連接，并且所述第二轉 基因和/或多接頭與包含選自56〇10側:1、569 10側:2、569 10側:3、和沈〇10側:35的 序列的啟動子可操作連接，并且與包含選自SEQ ID NO:4、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、或 SEQ ID N0:36的序列的3'-UTR可操作連接;進一步地，其中第一轉基因和/或多接頭與第二 轉基因和/或多接頭的啟動子來源于來自不同植物物種的化i基因。在另一個實施方案中， 所述載體提供有第Ξ轉基因和/或多接頭，其中所述第Ξ轉基因和/或多接頭與包含選自 沈9 10側:1、569 10側:2、569 10側:3、和沈9 10側:35的序列的啟動子可操作連接、并 且與包含選自沈Q ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、或沈Q ID N0:36的序列的3'-UTR 可操作連接，進一步地，其中第Ξ轉基因的啟動子和/或多接頭來源于來自與第一和第二轉 基因和/或多接頭的啟動子不同的植物物種的化i基因。
[0140] 轉基因表達還可被位于啟動子序列下游的內含子區(qū)所調節(jié)。啟動子和內含子兩者 都能調節(jié)轉基因表達。啟動子對于驅動轉錄是必要的，而內含子的存在能增加表達水平，從 而產生用于翻譯和蛋白質合成的mRNA轉錄物。內含子基因區(qū)有助于轉基因的穩(wěn)定表達。
[0141] 在一個實施方案中，提供了包含如本文中所述的泛素啟動子和內含子的核酸構建 體。在一個實施方案中，內含子與啟動子的3'端可操作連接。在一個實施方案中，提供了包 含泛素內含子的核酸構建體，所述泛素內含子與分離自柳枝稷、二穗短柄草或粟的泛素啟 動子的3'端，或運種啟動子序列的衍生物的3'端可操作連接。在一個實施方案中，所述泛素 內含子是柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素內含子，或運種內含子序列的衍生物。
[0142] 在一個實施方案中，內含子可W是二穗短柄草泛素1C內含子。
[0143]
[0148] 在一個實施方案中，內含子可W是粟泛素2化M2)內含子2。
[0149]
[0152]在一個實施方案中，提供了包含如本文中所述的泛素啟動子和內含子的核酸構建 體，其中所述內含子與沈9 10顯:7、沈9 10顯:8、569 10^:9、569 10^:10、或沈9 10 NO: 37至少80%'85%'90%'91%'92%'93%'94%'95%'96%'97%'98%'99%'99.5%、 99.8%、或100%相同。在一個實施方案中，提供了包含如本文中所述的泛素啟動子、內含子 序列和多接頭的核酸構建體，其中所述啟動子和內含子與多接頭可操作連接。在一個實施 方案中，提供了包含如本文中所述的泛素啟動子、內含子序列和非泛素轉基因的基因表達 盒，其中所述啟動子和內含子與所述轉基因的5'端可操作連接。任選地，所述構建體包含與 非泛素轉基因或多接頭的3'端可操作連接的3'-UTR。在一個實施方案中，所述啟動子和3'- UTR序列選自本文中所述的那些，并且所述內含子序列由SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:8、SEQ 10^:9、569 10^:10、或569 10^:37組成。在一個實施方案中，基因表達盒包含與啟動 子可操作連接的泛素內含子，其中所述啟動子為柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素啟動子，或為 源自植物(例如，玉米泛素1啟動子）、病毒(例如，木馨葉脈花葉病毒啟動子)或細菌(例如， 根癌±壤桿菌Smas)的啟動子。在說明性實施方案中，基因表達盒包含與轉基因可操作連接 的泛素內含子，其中所述轉基因可W是殺蟲劑抗性轉基因、除草劑耐受性轉基因、氮利用效 率轉基因、水分利用效率轉基因、營養(yǎng)品質轉基因、DNA結合轉基因、選擇標志物轉基因、或 它們的組合。
[0153] 轉基因表達還可受到位于啟動子序列下游的5 ' -UTR區(qū)的調節(jié)。啟動子和5 ' -UTR兩 者都能調節(jié)轉基因表達。啟動子對于驅動轉錄是必要的，而5'-UTR的存在能增加表達水平， 結果產生用于翻譯和蛋白質合成的mRNA轉錄物。5'-UTR基因區(qū)有助于轉基因的穩(wěn)定表達。
[0154] 在一個實施方案中，提供了包含如本文中所述的泛素啟動子和5'-UTR的核酸構建 體。在一個實施方案中，5 ' -UTR與啟動子的3 '端可操作連接。在一個實施方案中，提供了包 含泛素 5'-UTR的核酸構建體，所述泛素 5'-UTR與分離自柳枝稷、二穗短柄草或粟的泛素啟 動子的3'端、或運種啟動子序列的衍生物的3'端可操作連接。在另一個實施方案中，5'-UTR 的3'端與來自柳枝稷、二穗短柄草或粟的泛素內含子的5'端可操作連接，如本文所述。
[01巧]在一個實施方案中，5'-UTR可W是二穗短柄草泛素1 C化bilC)5'-UTR。
[0巧6] CCGATCGAAAAGTCCCCGCAAGAGCAAGCGACCGATCTCGTGAATCTCCGTCAAG(SEQ ID N0:11) [0157]在一個實施方案中，5'-UTR可W是二穗短柄草泛素1化bil)5'-UTR。
[015 引
[0165] 在一個實施方案中，提供了包含如本文中公開的泛素啟動子和5'-UTR的核酸構建 體，其中所述5'-17^與沈9 10側：11、沈9 10側：12、沈9 10側：13、569 10側：14、或沈9 ID NO: 38 至少 80 %、85 %'90%、91 %'92%'93%、94 %'95%'96%、97 %'98%、99 %、 99.5%、99.8%、或100%相同。在一個實施方案中，提供了包含泛素啟動子和與多接頭可操 作連接的5'-UTR的核酸構建體，其中所述啟動子與SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID NO: 3、或SEQ ID N0:35至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99 %、99.5 %、99.8%、或100 %相同。在一個實施方案中，提供了包含泛素啟動子和與非泛 素轉基因可操作連接的5'-UTR序列的基因表達盒，其中所述啟動子與SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、或沈Q ID N0:35至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、 96 %、97 %、98 %、99 %、99.5 %、99.8 %、或100 %相同。任選地，所述構建體可進一步包含如 本文中公開的泛素內含子，其與5'-UTR的3'端及非泛素轉基因的5'端可操作連接;而且所 述構建體任選地還可包含與非泛素轉基因的3'端可操作連接的3'-UTR。在一個實施方案 中，所述啟動子、內含子和3' -UTR序列選自本文中所述的那些，且所述5 ' -UTR序列由SEQ ID ^:11、569 10^:12、沈9 10顯：13、569 10^:14、或沈9 10顯:38組成。在一個實施方 案中，3'-1]了1?由沈9 10備：11組成。
[0166] 在一個實施方案中，基因表達盒包含與啟動子可操作連接的泛素5'-UTR，其中所 述啟動子為柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素啟動子，或為源自植物(例如，玉米泛素1啟動子）、 病毒(例如，木馨葉脈花葉病毒啟動子)或細菌(例如，根癌±壤桿菌Smas)的啟動子。在說明 性實施方案中，基因表達盒包含與轉基因可操作連接的泛素5'-UTR，其中所述轉基因可W 是殺蟲劑抗性轉基因、除草劑耐受性轉基因、氮利用效率轉基因、水分利用效率轉基因、營 養(yǎng)品質轉基因、DNA結合轉基因、選擇標志物轉基因、或它們的組合。
[0167] 在一個實施方案中，提供了核酸構建體，其包含啟動子和多接頭W及任選地下列 元件中的一種或多種：
[0168] a) 5'非翻譯區(qū)；
[0169] b)內含子;和
[0170] c)3'非翻譯區(qū)，
[0171] 其中
[0172] 所述啟動子由沈9 10側：1、569 10側：2、569 10側：3、或沈9 10側：35或與569 ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、或沈Q ID N0:35具有98%序列同一性的序列組成；
[0173] 所述5'非翻譯區(qū)由沈9 10顯：11、569 10^:12、569 10^:13、沈9 10顯：14、 或沈Q ID N0:38或與SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13、SEQ ID 側：14、或569 ID NO :38具有98%序列同一性的序列組成；
[0174] 所述內含子由沈9 10^:7、569 10^:8、569 10^:9、569 10^:10、或沈9 10 側：37或與沈9 10側：7、569 10顯:8、569 10側：9、569 10側：10、或沈9 10側：37具有 98 %序列同一性的序列組成；
[0175] 所述3'非翻譯區(qū)由沈Q ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、或沈Q ID N0:36或 與沈Q ID NO:4、沈Q ID NO:5、SEQ ID NO:6、或沈Q ID NO:36具有98%序列同一性的序列 組成;進一步地，其中所述啟動子與所述多接頭可操作連接，并且每個任選元件當存在時也 與啟動子及多接頭二者可操作連接。
[0176] 在一個實施方案中，提供了核酸構建體，其包含啟動子和非泛素轉基因 W及任選 地下列元件中的一種或多種：
[0177] a) 5'非翻譯區(qū)；
[0178] b)內含子;和
[0179] c)3'非翻譯區(qū)，
[0180] 其中
[0181] 所述啟動子由沈9 10側：1、569 10側：2、569 10側：3、或沈9 10側：35或與569 ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、或沈Q ID N0:35具有98%序列同一性的序列組成；
[0182] 所述5'非翻譯區(qū)由沈9 10顯：11、569 10^:12、569 10^:13、沈9 10顯：14、 或沈Q ID N0:38或與SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13、SEQ ID 側：14、或569 ID NO:38具有98%序列同一性的序列組成
[0183] 所述內含子由沈9 10^:7、569 10^:8、569 10^:9、569 10^:10、或沈9 10 側：37或與沈9 10側：7、569 10顯:8、569 10側：9、569 10側：10、或沈9 10側：37具有 98 %序列同一性的序列組成
[0184] 所述3'非翻譯區(qū)由沈Q ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、或沈Q ID N0:36或 與沈Q ID NO:4、沈Q ID NO:5、SEQ ID NO:6、或沈Q ID NO:36具有98%序列同一性的序列 組成;進一步地，其中所述啟動子與所述轉基因可操作連接，并且每個任選元件當存在時也 與啟動子和轉基因二者可操作連接。在另一個實施方案中，提供了包含上文剛才公開的核 酸構建體的轉基因細胞。在一個實施方案中，所述轉基因細胞為植物細胞，并且在另一個實 施方案中提供了植物，其中所述植物包含所述轉基因細胞。
[0185] 根據一個實施方案，轉基因表達被與內含子和5'-UTR區(qū)可操作連接的啟動子所調 節(jié)，其中所述內含子和5'-UTR區(qū)位于所述啟動子序列的下游。與內含子和5'-UTR區(qū)可操作 連接的啟動子可用來驅動轉基因表達。啟動子對于驅動轉錄是必要的，而內含子和5'-UTR 的存在能增加表達水平，從而產生用于翻譯和蛋白質合成的mRNA轉錄物。
[0186] 在一個實施方案中，基因表達盒包含與5'-UTR和內含子區(qū)可操作連接的啟動子。 在一個實施方案中，基因表達盒包含與泛素5'-UTR和泛素內含子可操作連接的泛素啟動 子。在一個實施方案中，與5'-UTR和內含子區(qū)可操作連接的泛素啟動子是與內含子和5'- UTR可操作連接的柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素啟動子。
[0187] 在一個實施方案中，與5'-UTR和內含子可操作連接的啟動子可W是與內含子和 5'-UTR可操作連接的二穗短柄草泛素1C化bilC)啟動子。在一個實施方案中，所述啟動子包 含或為SEQ ID NO: 15的序列：
[018 引
[0189] 在一個實施方案中，與5 ' -UTR和內含子可操作連接的啟動子可W是與5 ' -UTR和內 含子可操作連接的二穗短柄草泛素1化bil)啟動子。在一個實施方案中，所述啟動子包含或 為SEQ ID ^:16的序列：
[0190]
[0191] 在一個實施方案中，與5 ' -UTR和內含子可操作連接的啟動子可W是與5 ' -UTR和內 含子可操作連接的粟泛素2化M2)啟動子。在一個實施方案中，所述啟動子包含或為SEQ ID NO: 17的序列：
[0192]
[0193] 在一個實施方案中，與5 ' -UTR和內含子可操作連接的啟動子可W是與5 ' -UTR和內 含子可操作連接的柳枝稷(Switchgrass)泛素啟動子。在一個實施方案中，所述啟動子包含 或為SEQ ID NO:39的序列
[0194]
[01M]在一個實施方案中，提供了包含與內含子和5'-UTR可操作連接的啟動子的核酸構 建體。在一個實施方案中，所述構建體包含與沈Q ID NO: 15、沈Q ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、 或SEQ ID N0:39至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、 99%、99.5%、99.8%、或100%相同的啟動子。在一個實施方案中，提供了包含與多接頭可 操作連接的泛素啟動子序列的核酸構建體，所述泛素啟動子序列包含或為與SEQ ID NO: 15、沈9 10側：16、沈9 10側：17、或沈9 10側：39至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、或 100% 相同的序列。任選地，所述構建 體可進一步包含與多接頭的3'端可操作連接的3'-UTR。在一個實施方案中，提供了包含與 非泛素轉基因可操作連接的泛素啟動子序列的基因表達盒，其中所述啟動子序列包含或為 與SEQ ID N0:15、沈Q ID N0:16、SEQ ID N0:17、或SEQ ID N0:39至少80%、85%、90%、 91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、或 100% 相同的序列。 任選地，所述構建體可進一步包含與非泛素轉基因的3'端可操作連接的3'-UTR。在一個實 施方案中，3'-UTR序列由沈Q ID N0:4、SEQ ID N0:5、沈Q ID N0:6、或沈Q ID N0:36組成。 在說明性實施方案中，其中所述轉基因可W是殺蟲劑抗性轉基因、除草劑耐受性轉基因、氮 利用效率轉基因、水分利用效率轉基因、營養(yǎng)品質轉基因、DNA結合轉基因、選擇標志物轉基 因、或它們的組合。在一個實施方案中，所述轉基因是除草劑抗性基因。在一個實施方案中， 提供了包含1、2、3或4個啟動子序列的載體，運些啟動子序列獨立地選自SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、或沈Q ID N0:36。
[0196] 在一個實施方案中，基因表達盒包含泛素啟動子、泛素5'-UTR、泛素內含子、和泛 素3'-UTR。在一個實施方案中，泛素啟動子、泛素5'-UTR、泛素內含子、和泛素3'-UTR可W各 自獨立地是:柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素啟動子;柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素5'-UTR;柳 枝稷、二穗短柄草或粟泛素內含子；W及柳枝稷、二穗短柄草或粟泛素3'-UTR。在一個實施 方案中，基因表達盒包含:a)啟動子，其中所述啟動子與SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、或SEQ ID N0:36至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%、99.5%、99.8%、或100%相同；6)3'-17^，其中所述3'-1711?與沈9 10顯:4、沈9 ID N0:5、SEQ ID N0:6、或SEQ ID N0:37至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.8%、或100%相同；。）5'-1711?，其中所述5'-171尺與 569 10腸：11、569 10腸：12、569 10腸：13、569 10^):14、或569 10側：38至少80%、 85%'90%'91%'92%'93%'94%'95%'96%'97%'98%'99%'99.5%'99.8%、或100% 相同；或d)內含子，其中所述內含子與沈Q ID N0:15、SEQ ID N0:16、SEQ ID ^:17、或沈〇 ID NO :39 至少 80 %、85%'90%、91%'92%'93%、94%'95%'96%、97%'98%、99 %、 99.5%、99.8%、或 100%相同。
[0197] 例如，基因表達盒可包括啟動子、內含子、和5'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸 沈9 10^:1，所述內含子是多核巧酸569 10^:7，所述5'-17^是多核巧酸569 10^:11。 同樣，基因表達盒可包括啟動子、內含子、和5 ' -UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID N0:2,所述內含子是多核巧酸SEQ ID N0:8,所述5'-UTR是多核巧酸SEQ ID N0:12。此外，基 因表達盒可包括啟動子、內含子、和5'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID N0:3,所述 內含子是多核巧酸沈Q ID NO:9和/或SEQ ID NO:10，所述5'-UTR是多核巧酸SEQ ID NO: 13。另外，基因表達盒可包括啟動子、內含子、和5'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID N0:35,所述內含子是多核巧酸沈Q ID N0:37,所述5'-UTR是多核巧酸沈Q ID N0:38。
[019引例如，基因表達盒可包括啟動子、內含子、5'-UTR、和3'-UTR，其中所述啟動子是多 核巧酸SEQ ID N0:1，所述內含子是多核巧酸SEQ ID N0:7,所述5'-UTR是多核巧酸SEQ ID ^:11，所述3'-17^是多核巧酸569 10顯:4。同樣，基因表達盒可包括啟動子、內含子、5'- UTR、和3'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID N0:2,所述內含子是多核巧酸SEQ ID ^:8，所述5'-17^是多核巧酸沈9 10^:12，所述3'-17^是多核巧酸沈9 10^:5。此外，基 因表達盒可包括啟動子、內含子、5'-UTR、和3'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID ^:3，所述內含子是多核巧酸56010^:9和/或56010^:10，所述5'-17^是多核巧酸560 10^:13或14，所述3'-17^是多核巧酸569 10^:6。另外，基因表達盒可包括啟動子、內含 子、5'-UTR、和3'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID N0:35,所述內含子是多核巧酸 沈Q ID NO: 37,所述5'-UTR是多核巧酸沈Q ID NO: 38,所述3'-UTR是多核巧酸沈Q ID NO: 36 ο
[0199] 另外，基因表達盒可包括啟動子、和3'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID 顯：1，且所述3'-17^是569 10顯:6。在一個實施方案中，基因表達盒可包括啟動子和3'- UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ ID N0:1而3'-UTR是SEQ ID N0:5。在一個實施方案 中，基因表達盒可包括啟動子和3'-UTR，其中所述啟動子是多核巧酸SEQ