MSO-CB): δ ppm: 182. 6 (C-5)，163. 5 (C-2)，151. 5 (C-9)，149. 3 (C-7)，146. 4 (C-6)，131. 9 (C-4,），130. 8 (C-6or C-Γ )，130. 5 (C-Γ or C-6)，129. I (C-3,，5'），126. 4 (C-2, or C-6'），106. I (C-10)，104. 6 (C-3)，104. 5 (C-4)，103. 7 (C-l"'），100. 9 (C-l")，94. 4(C-8)，77. I (C-5"'），76. 8 (C-3")，75. 7 (C-3"），75. 6(C-3"，），75. 5(C-2"，），73. 2(C-2"），70. 2(C-4"or C-4"，），69. 6(C-4"，or C-4"），69. 2(C-6"），61. l(C-6"，）·
[0037] 黃芩素-7-0-葡萄糖苷,H-NMRGOOMHz，DMS0-d6) : δ ppm: 12. 4(1H, s, 5-OH), 8. 4( 1H, s, 6-OH), 7. 9 (2H, d, 2'，6' -H), 7. 5 ~7. 7 (3H, m, 3'，4'，5' -H), 7. I (1H, s, 8-H), 7. 0 (1H, s ,3-H), 5. I (1H, d, J = 6. 4Hz, anomeric H). 13C-NMR(100MHz, DMS〇-d6) : δ ppm: 182. 9 (C-4), 163. 9 (C-2)，151. 9 (C-9)，149. 7 (C-7)，146. 8 (C-5)，132. 5 (C-4,），131. 3 (C-6)，131. 0 (C-Γ )，129. 6 (C-3,，5,），126. 8 (C-2,，6,），106. 5 (C-10)，105. 2 (C-3)，101. 3 (C-Γ，），94. 7 (C-8)， 77. 8 (C-3 "），76. 3 (C-5 "），73. 5 (C-2 "），70. 0 (C-4 "），60. 9 (C-6 "）·
[0038] 本發(fā)明從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷，首先用70%乙醇加熱回流提取將 黃酮苷類(lèi)成分提取出來(lái)；接下來(lái)用分析型高效液相色譜儀對(duì)提取物的組成進(jìn)行分離分析； 然后，用半制備型高效液相色譜儀對(duì)提取物中的成分進(jìn)行分離純化就可以得到2種化合 物；最后，用高效液相色譜法對(duì)化合物的純度進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)核磁共振波譜分析對(duì)化合物的 結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。該方法所得目標(biāo)化合物純度高，雜質(zhì)含量極低，這一點(diǎn)可從圖3至圖4中看 出。除此之外，還具有如下優(yōu)勢(shì)：
[0039] (1)用70%乙醇加熱回流對(duì)木蝴蝶中黃酮苷類(lèi)成分進(jìn)行提取是利用了"相似相 溶"的原理，黃酮苷的極性較弱，在70%乙醇中的溶解度最大，溫度升高，溶解度增大。因此， 用70%乙醇加熱回流提取可以使黃酮苷最大程度溶出，而脂溶性雜質(zhì)盡量不被溶出。不僅 提高了提取效率，而且可以使粗提物盡可能純凈，最大限度降低了制備型C 18柱被污染的程 度。
[0040] (2)用高效液相色譜法對(duì)木蝴蝶粗提物的組成進(jìn)行分離分析，用甲醇-水作流動(dòng) 相等度洗脫可以在短時(shí)間內(nèi)對(duì)2種目標(biāo)化合物實(shí)現(xiàn)基線分離。
[0041] (3)用半制備型高效液相色譜法對(duì)化合物進(jìn)行分離純化，可以得到2種高純度單 體化合物，方法操作簡(jiǎn)單，效率高，工藝周期短，節(jié)省試劑，降低了生產(chǎn)成本。
[0042] (4)用高效液相色譜法對(duì)制備所得化合物的純度進(jìn)行測(cè)定，該方法準(zhǔn)確、快速。
[0043] (5)提取、分離、純化過(guò)程中僅用到乙醇、甲醇和水，不使用對(duì)環(huán)境和人體危害大的 氯仿、苯等有機(jī)溶劑，乙醇-水提取液及甲醇-水洗脫液經(jīng)減壓蒸餾回收后均可以重復(fù)使用 多次，綠色環(huán)保。
[0044] (6)優(yōu)化了層析方法的條件（洗脫液的組成和流速），使化合物的純度和純化效率 都大為提尚。
[0045] 【具體實(shí)施方式】只是本發(fā)明比較有代表性的例子，顯然本發(fā)明的技術(shù)方案不限于上 述實(shí)施例。還可以有很多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，從此文件中所公開(kāi)提到或是聯(lián)想 到的，均應(yīng)認(rèn)為是本專(zhuān)利所要保護(hù)的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在于：具體步驟如下： (1) 木蝴蝶中黃酮苷的提取：將木蝴蝶藥材粉碎，用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，過(guò)濾，提取液 經(jīng)減壓濃縮得粗提物，有機(jī)溶劑的用量是木蝴蝶藥材用量的6~20倍； (2) 木蝴蝶中黃酮苷的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對(duì)步驟（1)中粗提物的組 成進(jìn)行分離分析，流動(dòng)相為甲醇-水，甲醇與水的體積比45:55,流速為I.OmL/min; (3) 木蝴蝶中黃酮苷的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對(duì)步驟1中得到的粗 提物中的成分進(jìn)行分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水，甲醇與水的體積比50:50,流速為20~ 30mL/min;根據(jù)色譜圖手動(dòng)收集目標(biāo)組分餾分，減壓濃縮除去溶劑； (4) 化合物的純度檢測(cè)及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個(gè)目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶解， 其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，色譜條件見(jiàn)步驟（2)，2種化合物的純度都達(dá)到了 98% 以上，經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷和黃芩素-7-0-葡 萄糖苷。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在 于：步驟（2)分析型高效液相色譜儀中的色譜柱采用分析型C18柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫 為室溫。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征 在于：步驟（3)中半制備型高效液相色譜儀中的色譜柱采用半制備型C18柱，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220nm，柱溫為室溫。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在 于：步驟（1)提取方法為冷浸、超聲或加熱回流。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在 于：步驟（1)有機(jī)溶劑為甲醇或水或50%乙醇或70%乙醇或95%乙醇。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在 于：步驟（1)提取次數(shù)為2-5次；提取時(shí)間為1-3小時(shí)。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在 于：步驟（1)提取次數(shù)為3次；提取時(shí)間為2小時(shí)。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在 于：步驟（2)分離分析用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式為40%甲醇-水等度洗脫或 45 %甲醇-水等度洗脫或50 %甲醇-水等度洗脫。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其特征在 于：步驟（3)分離純化用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫或45% 甲醇-水等度洗脫或50 %甲醇-水等度洗脫或55 %甲醇-水等度洗脫。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，涉及木蝴蝶提取、分離純化黃酮苷技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明是以木蝴蝶藥材為原料，經(jīng)過(guò)下述步驟：(1)木蝴蝶中黃酮苷的提??；(2)木蝴蝶中黃酮苷的分離分析；(3)木蝴蝶中黃酮苷的分離純化；(4)化合物的純度檢測(cè)及結(jié)構(gòu)鑒定。用半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，流動(dòng)相為甲醇-水，得到2種高純度的成分，經(jīng)鑒定分別是黃芩素-7-O-雙葡萄糖苷和黃芩素-7-O-葡萄糖苷。優(yōu)點(diǎn)：高效、快速?gòu)哪竞刑崛↑S芩素-7-O-雙葡萄糖苷和黃芩素-7-O-葡萄糖苷，2種化合物的純度都達(dá)到了98％以上；工藝過(guò)程綠色環(huán)保，對(duì)環(huán)境無(wú)嚴(yán)重危害，綜合成本低。
【IPC分類(lèi)】C07H17/07, C07H1/08
【公開(kāi)號(hào)】CN104892702
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510252991
【發(fā)明人】楊冬芝, 董露露, 楊方秀, 湯道權(quán), 孫世安
【申請(qǐng)人】徐州醫(yī)學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年9月9日
【申請(qǐng)日】2015年5月18日