一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及木蝴蝶提取、分離純化黃酮苷技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種從木蝴蝶中提取、 分離純化2種黃酮苷的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 木蝴蝶為紫葳科植物木蝴蝶Oroxylum indicum(L.) Vent.的成熟種子，味苦、甘， 性涼，入肺、肝、胃經(jīng)，有清肺利咽、止咳、舒肝和胃、止痛及清熱的作用。臨床上用于治療以 咳嗽為主癥的上呼吸道感染、急性支氣管炎、咽炎、肺炎、百日咳及聲帶疾患。藥理研宄表 明，黃酮為木蝴蝶的主要活性成分，也是木蝴蝶及其相關(guān)制劑質(zhì)量控制的主要指標(biāo)。據(jù)文獻(xiàn) 報道，分離純化木蝴蝶種黃酮苷的方法主要有反復(fù)硅膠柱層析法及高速逆流色譜法，硅膠 柱層析法的操作過程繁瑣，回收率較低，經(jīng)常使用氯仿、苯等毒性較強(qiáng)的有機(jī)溶劑；在高速 逆流色譜法中溶劑系統(tǒng)的選擇比較困難，缺乏理論指導(dǎo)。因此，建立一種高效快速的提取、 分離純化木蝴蝶中黃酮苷的方法對于深化木蝴蝶的藥理研宄及完善質(zhì)量控制體系等具有 重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，高效、 快速、簡便。
[0004] 本發(fā)明是以如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的 方法，具體步驟如下：
[0005] (1)木蝴蝶中黃酮苷的提?。簩⒛竞幉姆鬯?，用有機(jī)溶劑進(jìn)行提取，過濾，提 取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物，有機(jī)溶劑的用量是木蝴蝶藥材用量的6~20倍；
[0006] (2)木蝴蝶中黃酮苷的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對步驟⑴中粗提物 的組成進(jìn)行分離分析，流動相為甲醇-水，甲醇與水的體積比45:55,流速為1.0 mL/min ;
[0007] (3)木蝴蝶中黃酮苷的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對步驟1中得到的 粗提物中的成分進(jìn)行分離純化，流動相為甲醇-水，甲醇與水的體積比50:50,流速為20~ 30mL/min ;根據(jù)色譜圖手動收集目標(biāo)組分餾分，減壓濃縮除去溶劑；
[0008] (4)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇 溶解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，色譜條件見步驟（2)，2種化合物的純度都達(dá) 到了 98%以上，經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷和黃芩 素-7-0-匍萄糖苷。
[0009] 其進(jìn)一步是：步驟（2)分析型高效液相色譜儀中的色譜柱采用分析型C18柱，檢測 波長為220nm，柱溫為室溫。
[0010] 步驟（3)中半制備型高效液相色譜儀中的色譜柱采用半制備型C18柱，檢測波長為 220nm，柱溫為室溫。
[0011] 步驟（1)提取方法為冷浸、超聲或加熱回流。。
[0012] 步驟（1)有機(jī)溶劑為甲醇或水或50 %乙醇或70 %乙醇或95 %乙醇。
[0013] 步驟⑴提取次數(shù)為2-5次；提取時間為1-3小時。
[0014] 步驟（1)提取次數(shù)為3次；提取時間為2小時。
[0015] 步驟（2)中分離分析用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式為40%甲醇-水等度 洗脫或45 %甲醇-水等度洗脫或50 %甲醇-水等度洗脫。
[0016] 步驟（3)分離純化用甲醇-水洗脫液進(jìn)行洗脫，洗脫方式有甲醇-水梯度洗脫或 45%甲醇-水等度洗脫或50%甲醇-水等度洗脫或55%甲醇-水等度洗脫。
[0017] 本發(fā)明的有益效果是：高效、快速從木蝴蝶中提取黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷和黃 芩素-7-0-葡萄糖苷，2種化合物的純度都達(dá)到了 98%以上；工藝過程綠色環(huán)保，對環(huán)境無 嚴(yán)重危害，綜合成本低。
【附圖說明】
[0018] 圖1是木蝴蝶粗提物的分析型高效液相色譜圖；
[0019] 圖2是木蝴蝶粗提物的半制備型高效液相色譜圖；
[0020]圖3是黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷的高效液相色譜圖及紫外光譜圖；
[0021] 圖4是黃芩素-7-0-葡萄糖苷的高效液相色譜圖及紫外光譜圖；
【具體實施方式】
[0022] 下面結(jié)合實施例和附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)方案，但保護(hù)范圍不被此限制。實 施例中所用設(shè)備或原料皆可從市場獲得。所用試劑均購自天津市化學(xué)試劑三廠，所用水為 去離子水。
[0023] 從木蝴蝶中提取、分離純化2種黃酮苷的方法，其步驟為：
[0024] (1)木蝴蝶中黃酮苷的提取：將木蝴蝶藥材粉碎，用15倍量70%乙醇加熱回流提 取3次，每次2h，過濾，將提取液合并，減壓濃縮得粗提物。
[0025] (2)木蝴蝶中黃酮苷的分離分析：用分析型高效液相色譜儀對粗提物的組成進(jìn)行 分離分析，色譜柱為分析型C 18柱（250X4. 6mm I. D.，5 ym)，流動相為甲醇-水（45 :55, V/ V);流速為1.0 mL/min，檢測波長為220nm，柱溫為室溫。
[0026] (3)木蝴蝶中黃酮苷的分離純化：用半制備型高效液相色譜儀對粗提物中的成分 進(jìn)行分離純化，色譜柱為半制備型C 18柱（250 X 25. 4mm I.D.，10 μ m)，流動相為甲醇-水 (50 :50，V/V)，檢測波長為220nm，柱溫為室溫。根據(jù)色譜圖手動收集目標(biāo)組分餾分，減壓濃 縮除去溶劑。
[0027] (4)化合物的純度檢測及結(jié)構(gòu)鑒定：將每一個目標(biāo)組分餾分減壓濃縮后用甲醇溶 解，其純度用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，色譜條件見步驟（2)，分析結(jié)果表明2種化合物的 純度都達(dá)到了 98%以上。經(jīng)核磁共振波譜分析2種化合物分別是黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷 和黃零素-7-0-匍萄糖苷。
[0028] 發(fā)明人通過使用不同濃度的甲醇作流動相，采用不同的洗脫方式，控制甲醇-水 洗脫液的流速為20-30mL/min (優(yōu)選25mL/min)，優(yōu)選出了實現(xiàn)本發(fā)明目的的純化條件，有 關(guān)實驗結(jié)果如下：
[0029] 表一木蝴蝶粗提物的半制備型高效液相色譜分離條件
[0030]
[0031] 在實施例1 ￥，洗脫液中甲醇的濃^較高，洗脫時間較短，2 ^目標(biāo)化合物與其附 近的雜質(zhì)組分之間的分離效果均不夠理想，所得化合物的純度較低。實施例2中，洗脫液中 甲醇的濃度適中，各成分之間分離良好，分離時間也較為適宜。實施例3中，洗脫液中甲醇 的濃度較低，2種目標(biāo)化合物與其附近的雜質(zhì)組分之間的分離情況良好，但分離時間太長。 實施例4采用甲醇-水梯度洗脫，也可以在合適的時間內(nèi)獲得良好的分離效果，但由于洗脫 液的濃度不斷發(fā)生變化導(dǎo)致難以實現(xiàn)回收再利用。
[0032] 圖1是木蝴蝶粗提物的分析型高效液相色譜圖。圖2是當(dāng)選用實施例2體系時 木蝴蝶粗提物的半制備型高效液相色譜圖，由圖可見，各成分分離良好，分離時間也較為適 宜。根據(jù)色譜圖手動收集各峰組分，回收溶劑后，即可得到相應(yīng)的高純度化合物。經(jīng)高效液 相色譜峰面積歸一化法分析測試，純度高于98%，這一點可從圖3至圖4中看出。圖1-4 中，I :黃零素_7_〇_雙匍萄糖苷；Π :黃零素-7-0-匍萄糖苷。
[0033] 經(jīng)核磁共振波譜分析證實所提取純化得到的2個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0034]
[0035] 2個化合物的鑒定結(jié)果如下：
[0036] 黃芩素-7-0-雙葡萄糖苷,H-NMRGOOMHzJMSO-de): Sppm:12.6(lH，s，5-OH)， 8· 6 (1H，s，6-OH)，8· 0 ~8· 3 (2H，d，2'，6' -Η)，7· 5 ~7.8(3H，m，3'，4'，5'-H)，7.2(lH，s，8-Η), 7. I (1Η, s, 3-Η), 5. I (1Η, d, J = 6. 4Hz, anomeric H of inner glucose), 4. 2 (1Η, d, J =6.3Hz，anomeric H of terminal glucose) .13C-MVtR(IOOMHzjD