一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒及其制備方法，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分：試劑R1：緩沖液、表面活性劑、螯合劑、防腐劑，試劑R2：緩沖液、無機(jī)鹽離子、防腐劑、穩(wěn)定劑、膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體，制備方法為：按照組分含量配制好試劑；將待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2混合；用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值；根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的心型脂肪酸結(jié)合蛋白的濃度。本發(fā)明具有檢測(cè)方便、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】
一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體來說是一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白 的試劑盒及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)是心臟中富含的一種新型小胞質(zhì)蛋白，它具有高度 心臟特異性，但在心臟以外的組織中也有低濃度表達(dá)，心肌缺血性損傷出現(xiàn)后，H-FABP可以 早在胸痛發(fā)作后1-3小時(shí)在血液中被發(fā)現(xiàn)，6-8小時(shí)達(dá)到峰值而且血漿水平在24-30小時(shí)內(nèi) 恢復(fù)正常，心型脂肪酸結(jié)合蛋白由132個(gè)氨基酸組成，分子量為15 kDa，心型脂肪酸結(jié)合蛋 白（H-FABP)基因位于染色體I上，它是心臟最豐富的蛋白質(zhì)之一，心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)結(jié)合兩個(gè)脂肪酸分子并參與脂肪?；o酶A的運(yùn)輸，活躍于氧化過程，從而在線粒體 中產(chǎn)生能量。
[0003] 心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)的特征看似與肌紅蛋白的相似，這兩種在心肌和骨 骼組織中表達(dá)的低分子量胞質(zhì)蛋白是線粒體氧化的基質(zhì)而且在癥狀發(fā)作后2小時(shí)內(nèi)釋放，6 小時(shí)出現(xiàn)最大濃度，24小時(shí)內(nèi)恢復(fù)基線濃度，然而，他們?cè)谛呐K和肌肉組織中的濃度不同， 心臟中H-FABP濃度比骨骼肌中高2-10倍，與此相反，心臟細(xì)胞中肌紅蛋白濃度比骨骼細(xì)胞 中低2倍，肌紅蛋白的正常血漿濃度比心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)的高10-15倍，游離血 漿肌紅蛋白水平升高是被廣泛接受的早期心肌損傷標(biāo)志而且在1994年Bhayana等人證明了 血漿肌紅蛋白水平升高比CK-MB和cTnT水平升高在癥狀發(fā)作后3-6小時(shí)內(nèi)排除急性心肌梗 塞(AMI)上具有優(yōu)越性。盡管在發(fā)表的幾個(gè)準(zhǔn)則中肌紅蛋白被推薦為心臟損傷的早期標(biāo)志 物，但心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)更加具有心臟特異性而且由于其生物學(xué)特性它可能被 認(rèn)為是一種更準(zhǔn)確的診斷試驗(yàn)。
[0004] 目前，H-FABP的檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫法等，但這些方法都有局限 性，酶聯(lián)免疫吸附法操作復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)，放射免疫法有放射性元素，對(duì)環(huán)境有一定的污染，而 且測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確度低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)操作復(fù)雜、污染環(huán)境以及測(cè)定準(zhǔn) 確度低的缺陷，而提供一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題提供的技術(shù)方案是:本發(fā)明公開了一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié) 合蛋白的試劑盒，包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 表面活性劑 5~15 mL/L 整合劑 1CK60 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 40~300 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 穩(wěn)定劑 6~18 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體1~8 g/L 其溶劑為純化水。
[0007] 作為優(yōu)選，本發(fā)明公開了一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒，包括彼此獨(dú)立 的試劑R1和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑R1: 緩沖液 100 mmol/L 表面活性劑 10 mL/L 整合劑 35 mmol/L 防腐劑 0.4 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 100 mmol/L 無機(jī)鹽離子 200 mmol/L 防腐劑 〇.4g/L 穩(wěn)定劑 12 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體4 g/L 其溶劑為純化水。
[0008] 作為優(yōu)選，所述的試劑R1中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MES緩沖液、M0PS0緩 沖、甘氨酸緩沖液中的一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-20,所述的螯合劑 采用EDTA ? 2Na，所述的防腐劑采用疊氮鈉、Proclin-300、苯酚中的一種或多種的組合。
[0009] 作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MES緩沖液、M0PS0緩 沖、甘氨酸緩沖液中的一種或多種組合，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀中 的一種或多種的組合，所述的防腐劑采用疊氮鈉、Proclin-300、苯酚中的一種或多種的組 合，所述的穩(wěn)定劑采用蔗糖、甘油、牛血清白蛋白中的一種或多種的組合。
[0010] 作為優(yōu)選，所述的試劑R2中，所述的膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的制備 方法為： 用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為80-500nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙 烯微球的質(zhì)量濃度為1%_5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基 胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在20 °C_37°C的條件下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)，在 25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀 釋，使用超聲分散儀進(jìn)行超聲分散，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘， 去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1%-3%為止，然后邊攪拌邊加入抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為 0.5%-2.0%為止，最后加入牛血清白蛋白，直至牛血清白蛋白的濃度為15 g/L為止，4 °C的條 件下封閉8-12小時(shí)即可制備得到膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體。
[0011]作為優(yōu)選，本發(fā)明還公開了上述測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒的制備方法和 使用方法，包括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: 緩沖液 15~185 mmol/L 表面活性劑 5~15 mL/L 整合劑 10~60 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 40~300 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 穩(wěn)定劑 6~18 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體1~8 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的心型脂肪酸結(jié)合蛋白的濃度。
[0012]作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的試劑R1和試劑R2的體積比為1:1; 作為優(yōu)選，步驟(b)中，所述的待測(cè)樣本與試劑R1和試劑R2的總體積的體積比在1:5到 1:200之間。
[0013]本發(fā)明的檢測(cè)原理是:本品以乳膠凝集法為原理，樣本中（血清或血漿）的心型脂 肪酸結(jié)合蛋白可與吸附在乳膠顆粒上的抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體產(chǎn)生抗原抗體的凝集 反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物，其濁度的變化通過測(cè)定特定波長(zhǎng)的吸光度值，即可算出H-FABP 的含量。
[0014] 樣本中心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)的活性
式中：A AT以空白管吸光度作對(duì)照的樣品管吸光度值 A AS以空白管吸光度作對(duì)照的校準(zhǔn)管吸光度值 CS校準(zhǔn)液中H-FABP的濃度。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明在試劑R1中添加了螯合劑，而 螯合劑采用EDTA ? 2Na，因此在試劑R1和樣本孵育的過程中，去除了金屬離子對(duì)本檢測(cè)的干 擾，因此測(cè)定的準(zhǔn)確度大大提高，另外本發(fā)明不含有任何放射性物質(zhì)，不會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污 染，而且操作比較方便。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不僅限于這些實(shí)施例。
[0017] 實(shí)施例i 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: Tris緩沖液 100 mmol/L 吐溫-20 10 mL/L EDTA ? 2Na 35 mmol/L 疊氮鈉 0.4 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 疊氮鈉 〇.4g/L 甘油 12 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體4 g/L 其溶劑為純化水。
[0018] 實(shí)施例2 本發(fā)明的試劑盒包括彼此獨(dú)立的試劑R1和試劑R2雙液體組分，其中 試劑R1: MES緩沖液 15 mmol/L 吐溫-20 15 mL/L EDTA ? 2Na 10 mmol/L 苯酚 0.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 50 mmol/L 氯化儀 300 mmol/L 苯酸 0.6 g/L 甘油 18 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體3g/L 其溶劑為純化水。 實(shí)施例3 試劑盒的制備和使用方法 1、膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的制備：用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為 120nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為5%的溶液，然后每毫升 溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在25°C的條件下反 應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉 淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，使用超聲分散儀進(jìn)行超聲分散，再使用離心機(jī)，在 25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀 釋，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為3%為止，然后邊攪拌邊加入抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗 體，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1%為止，最后加入牛血清白蛋白，直至牛血清白蛋白的 濃度為15 g/L為止，4°C的條件下封閉8小時(shí)即可制備得到膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白 抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: Tris緩沖液 100 mmol/L 吐溫-20 10 mL/L EDTA ? 2Na 35 mmol/L 疊氮鈉 0.4 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: Tris緩沖液 100 mmol/L 氯化鈉 200 mmol/L 疊氮鈉 〇.4g/L 甘油 12 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體4 g/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)700nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，孵育時(shí)間5min，加入試劑R2后立即測(cè)定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化AA = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、 檢測(cè)步驟 (a) 取100yl試劑R1與4yl待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入100yl試劑R2,立即測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 AA = A2-A1; (d) 根據(jù)樣本中的心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)的活性
計(jì)算出樣本中的心型脂肪酸結(jié)合蛋白的濃度。
[0019] 實(shí)施例4 試劑盒的制備和使用方法 1、膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的制備：用50 mmol/L的MES緩沖液將粒徑為 120nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為5%的溶液，然后每毫升 溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽，在25°C的條件下反 應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉 淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，使用超聲分散儀進(jìn)行超聲分散，再使用離心機(jī)，在 25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀 釋，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為3%為止，然后邊攪拌邊加入抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗 體，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1%為止，最后加入牛血清白蛋白，直至牛血清白蛋白的 濃度為15 g/L為止，4°C的條件下封閉8小時(shí)即可制備得到膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白 抗體； 2、 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑R1: MES緩沖液 15 mmol/L 吐溫-20 15 mL/L EDTA ? 2Na 10 mmol/L 苯酚 0.2 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: MES緩沖液 50 mmol/L 氯化儀 300 mmol/L 苯酸 0.6 g/L 甘油 18 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體3g/L 其溶劑為純化水； 3、 全自動(dòng)生化分析儀參數(shù)設(shè)置 (a) 檢測(cè)溫度:37°C; (b) 檢測(cè)波長(zhǎng):主波長(zhǎng)700nm; (c) 反應(yīng)時(shí)間：10min，其中，孵育時(shí)間5min，加入試劑R2后立即測(cè)定讀取吸光度 Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化AA = A2-A1 ; (d) 反應(yīng)方向：正反應(yīng)； 4、 檢測(cè)步驟 (a) 取100yl試劑R1與4yl待測(cè)樣本混勻； (b) 將混勻后的溶液在37°C的條件下孵育5min; (c) 加入100yl試劑R2,立即測(cè)定讀取吸光度Al，5min后讀取吸光度A2,計(jì)算吸光度變化 AA = A2-A1; (d) 根據(jù)樣本中的心型脂肪酸結(jié)合蛋白（H-FABP)的活性 計(jì)算出樣本中的心型脂肪酸結(jié)合蛋白的濃度。
[0020]表1為實(shí)施例1所制得的測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的 測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒分別對(duì)質(zhì)控品1進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品1中的心型 脂肪酸結(jié)合蛋白的濃度為6 ng/mL，測(cè)定結(jié)果見表1:

由表1可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒對(duì)質(zhì)控品1的測(cè)定結(jié)果 偏差較小，因此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0021] 表2為實(shí)施例1所制得的測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒以及實(shí)施例2所制得的測(cè)定 心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒分別對(duì)質(zhì)控品2進(jìn)行測(cè)定的結(jié)果，其中質(zhì)控品2中的心型脂肪 酸結(jié)合蛋白的濃度為30 ng/mL，測(cè)定結(jié)果見表2:
由表2可知，本發(fā)明所制得的測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒對(duì)質(zhì)控品2的測(cè)定結(jié)果 偏差較小，因此測(cè)定準(zhǔn)確度高，而且實(shí)施例1為最優(yōu)的選擇。
[0022] 表3為實(shí)施例3所制得的測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本進(jìn)行 的多次反復(fù)測(cè)定以及實(shí)施例4所制得的測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒對(duì)同一待測(cè)樣本 進(jìn)行的多次反復(fù)測(cè)定，對(duì)所得的結(jié)果進(jìn)行SD和CV的計(jì)算，結(jié)果如下：
由表3可知本發(fā)明所制得的測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒的精密度比較好，而且 由表3可知，實(shí)施例3為最優(yōu)的選擇。
[0023] 上述實(shí)施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟 悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對(duì)上述實(shí)施例進(jìn)行修飾或改變。因 此，舉凡所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識(shí)者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完 成的一切等效修飾或改變，仍應(yīng)由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒，其特征在于:包括彼此獨(dú)立的試劑Rl和試 劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑Rl: 緩沖液 15~185 mmol/L 表面活性劑 5~15 mL/L 整合劑 10~60 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 40~300 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 穩(wěn)定劑 6~18 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體1~8 g/L 其溶劑為純化水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒，其特征在于:包括彼 此獨(dú)立的試劑Rl和試劑R2雙液體組分，包括的成分及相應(yīng)含量為： 試劑Rl: 緩沖液 100 mmol/L 表面活性劑 10 mL/L 整合劑 35 mmol/L 防腐劑 0.4 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 100 mmol/L 無機(jī)鹽離子 200 mmol/L 防腐劑 〇.4g/L 穩(wěn)定劑 12 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體4 g/L 其溶劑為純化水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒，其特征在于:所 述的試劑Rl中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MES緩沖液、MOPSO緩沖、甘氨酸緩沖液中的 一種或多種的組合，所述的表面活性劑采用吐溫-20,所述的螯合劑采用EDTA · 2Na，所述的 防腐劑采用疊氮鈉、Proclin-300、苯酚中的一種或多種的組合。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒，其特征在于:所 述的試劑R2中，所述的緩沖液采用Tris緩沖液、MES緩沖液、M0PS0緩沖、甘氨酸緩沖液中的 一種或多種組合，所述的無機(jī)鹽離子采用氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀中的一種或多種的組合， 所述的防腐劑采用疊氮鈉 、Procl in-300、苯酸中的一種或多種的組合，所述的穩(wěn)定劑采用 蔗糖、甘油、牛血清白蛋白中的一種或多種的組合。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒，其特征在于:所 述的試劑R2中，所述的膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體的制備方法為：用50 mmol/L的 MES緩沖液將粒徑為80-500nm的聚苯乙烯微球稀釋成為所含的聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為 1%-5%的溶液，然后每毫升溶液中加入1.0 mg的1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亞胺 鹽酸鹽，在20°C_37°C的條件下反應(yīng)1小時(shí)，反應(yīng)完成后，使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn) 速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，使用超聲分散儀進(jìn) 行超聲分散，再使用離心機(jī)，在25000 rpm/min的轉(zhuǎn)速下離心30分鐘，去上清，再將沉淀用50 mmol/L的MES緩沖液進(jìn)行稀釋，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為1%-3%為止，然后邊攪拌邊 加入抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體，直至聚苯乙烯微球的質(zhì)量濃度為0.5%-2.0%為止，最后加 入牛血清白蛋白，直至牛血清白蛋白的濃度為15 g/L為止，4°C的條件下封閉8-12小時(shí)即可 制備得到膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒的制備方法和使 用方法，其特征在于:包括以下步驟： (a) 按照下列組分含量配制好試劑： 試劑Rl: 緩沖液 15~185 mmol/L 表面活性劑 5~15 mL/L 整合劑 10~60 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 其溶劑為純化水 試劑R2: 緩沖液 50~150 mmol/L 無機(jī)鹽離子 40~300 mmol/L 防腐劑 0.2~0.6 g/L 穩(wěn)定劑 6~18 g/L 膠乳包被抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體1~8 g/L 其溶劑為純化水； (b) 將待測(cè)樣本與試劑Rl和試劑R2混合，使其充分反應(yīng)； (c) 用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定反應(yīng)后的吸光度差值； (d) 根據(jù)吸光度變化值計(jì)算出樣本中的心型脂肪酸結(jié)合蛋白的濃度。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒的制備方法和使用方 法，其特征在于:步驟(b)中，所述的試劑Rl和試劑R2的體積比為1:1。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種測(cè)定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試劑盒的制備方法和使用方 法，其特征在于:步驟(b)中，所述的待測(cè)樣本與試劑Rl和試劑R2的總體積的體積比在1:5到 1:200之間。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK105929176SQ201610358106
【公開日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年5月26日
【發(fā)明人】蔡曉輝, 莊慶華, 吳錚, 徐運(yùn)
【申請(qǐng)人】安徽伊普諾康生物技術(shù)股份有限公司