一種gc-ms/ms測定果蔬中氟唑菌酰胺殘留的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設及一種GC-MS/MS測定果蔬中氣挫菌酷胺殘留的方法，更具體地說是采用 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性定量測定蔬菜和水果中殘留的氣挫菌酷胺含量的方法， 屬于農(nóng)藥殘留量的測定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 氣挫菌酷胺(f Iuxapyroxad)是由己斯夫公司開發(fā)的班巧酸脫氨酶抑制劑類殺菌 劑?；瘜W名稱:3-二氣甲基-1-甲基-N-(3'，4'，5'-S氣聯(lián)苯-2-基)-lH-化挫-4-甲酯胺;分 子式:Cl細12F5N30;相對分子質(zhì)量:381.3;烙點：157 °C ;相對密度：1.42。溶劑中的溶解度 (g/L，20°C):丙酬>250、乙臘168、乙酸乙醋123、甲醇53.4、甲苯20.0。氣挫菌酷胺的化學結(jié) 構(gòu)式如下：
[0003] 氣挫菌酷胺具有高效、廣譜、持效、優(yōu)異的內(nèi)吸傳導性、同時具有預防和治療作用 等優(yōu)點。它能抑制抱子發(fā)芽、芽抱管伸長、菌絲體生長和抱子形成，可有效防治谷物、大豆、 玉米、油菜和特種作物等的主要病害。該產(chǎn)品通過葉面和種子處理來防治一系列真菌病害， 如谷物、大豆、果樹和蔬菜上由殼針抱菌（Septoria)、灰葡萄抱菌（Bot巧tis)、白粉菌 化rySiphe)、尾抱菌（Cercospora)、柄誘菌（Puccinia)、絲核菌（RhiZOCtonia)、核腔菌 (Pyreno曲ora SPP.)等引起的病害。其特別適用于豆類植物，防治由鏈格抱菌(Alternaria spp.)引起的灰霉病(Bot巧tis cinerea)、誘病、白粉病和殼針抱菌引起的病害，大豆誘病 (化akopsora)，棉花上由立枯絲核菌(化izoctonia solani)引起的病害W及向日葵和油巧 菜上由鏈格抱菌引起的病害等。在所有試驗劑量下，對所有作物非常安全。氣挫菌酷胺適配 性強，可與化挫酸菌醋、=挫類殺菌劑和己斯夫其他產(chǎn)品復配使用。研究表明，氣挫菌酷胺 比市售的酷胺類殺菌劑具有更好的活性，該產(chǎn)品無論在活性、多功能性，還是在內(nèi)吸性和耐 雨水沖刷性等方面都為現(xiàn)代殺菌劑建立了新標桿。己斯夫打算將氣挫菌酷胺引入世界上50 多個國家，用于100多種作物上。2011年，氣挫菌酷胺首先在英國登記和上市，現(xiàn)登記和上 市的國家包括澳大利亞、美國、加拿大、歐盟13國、己西和中國等。公司預測，該產(chǎn)品的年峰 值銷售額可達6億歐元。運是所有SDHI類殺菌劑中，開發(fā)公司寄予的期望值最高的產(chǎn)品。
[0004] 隨著氣挫菌酷胺的登記、推廣和使用，作為我國主要出口市場的美國、加拿大等國 家制定了其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化），如美國 規(guī)定氣挫菌酷胺在果蔬中的MRL為0.5~30mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動物源性食品中MRL 為O . Olmg/kg，在堅果及糧谷中脈L為0.06~15mg/kg;加拿大規(guī)定氣挫菌酷胺在果蔬中的 M化為0.02~2mg/kg，在畜產(chǎn)品及水產(chǎn)品等動物源性食品中脈L為0.0 l~0.05mg/kg，在堅果 及糧谷中ML為0.01~3mg/kg;歐盟、日本等國家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒有在該國家登記， 沒有制定相應的殘留限量標準時，出口至其國家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動物源性食品 中殘留限量均實行O.Olmg/L的"一律標準"。
[0005] 現(xiàn)階段，對氣挫菌酷胺殘留量測定方法的研究較少，報道的檢測方法主要為蔬菜 和水果中氣挫菌酷胺殘留檢測方法，運些檢測方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)測 定蔬菜和水果中氣挫菌酷胺殘留量的檢測方法，使用LC-MS/MS測定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點，但由于其價格較昂貴，很多檢測機構(gòu)、企業(yè)或科研院所未 配置該儀器或配置臺數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測時，需使用不同的流動 相或色譜柱，運樣需要不斷更換色譜柱、流動相并耗費比較長的時間對系統(tǒng)進行平衡，運一 定程度上制約了 LC-MS/MS的應用。使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)分析食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng) 藥殘留具有快速、簡便、靈敏度高、選擇性強等優(yōu)點，可實現(xiàn)幾百種農(nóng)藥的多殘留分析，但迄 今為止未見食品農(nóng)產(chǎn)品中氣挫菌酷胺殘留量的GC-MS/MS檢測方法的報道，因此建立簡便、 快速、準確、耐用、能準確定性和定量分析蔬菜和水果中氣酸菌酷胺殘留量的GC-MS/MS檢測 方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種GC-MS/MS測定果蔬中氣挫菌酷胺殘留的方法。
[0007] 為實現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種GC-MS/MS測定果蔬中氣挫菌 酷胺殘留的方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取 稱取樣品于具塞離屯、管中，加入乙臘或含1%乙酸的乙臘溶液均質(zhì)提取Imin,加入氯化 鋼或乙酸鋼中的一種和無水硫酸儀，振蕩后離屯、。
[0009] (2)凈化 移取樣品提取液上清液于離屯、管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，滿旋振蕩，離屯、，吸取 一定量凈化液氮氣吹干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定容，過膜后，待氣 相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測。
[0010] (3)標準工作溶液的配制 將不含氣挫菌酷胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時，得樣品提取凈 化殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，滿旋混勻，配制成至少3個濃度的氣挫菌酷胺系列混合 標準工作液。
[0011] (4)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測定 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-MS/MS測定，W標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的 樣品液注入GC-MS/MS進行測定，測得樣品液中氣挫菌酷胺的色譜峰面積，代入標準工作曲 線，得到樣品液中氣挫菌酷胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計算得到樣品中氣 挫菌酷胺殘留量;若上機溶液中氣挫菌酷胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容溶劑將上 機溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤。
[0013] 步驟(1)中采用乙臘提取時加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時加 入乙酸鋼鹽析;含水量較少的樣品鹽析時需加入一定量的水。
[0014] 步驟(2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無水硫酸儀、Cis和PSA組成，每毫升提取液中無 水硫酸儀、Cis和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進樣，進樣量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:290°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為：電離模式：電子轟擊電離化I，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氣氣;多反應監(jiān)測掃描方式MRM，監(jiān)測參數(shù)為：
[0017」步驟（4)中測定祥液和基質(zhì)標準工作浴液時，若祥液中農(nóng)藥色譜峰保留時同與標 準溶液中相應農(nóng)藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運種農(nóng)藥;若 上述兩個條件不能同時滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[001引本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-MS/MS應用于蔬菜和水果中氣挫菌酷胺定性確 證和定量檢測，平均回收率為86.0 %~96.0 %，平均相對標準偏差(RSD)為3.5 %~7.1 %， 檢出限低于0.06化g/kg，具有操作簡便、快速、準確、靈敏度高及重復性好的優(yōu)點。能滿足美 國、歐盟、日本等國家對相應產(chǎn)品安全檢測的技術(shù)要求，為保障我國人民食品安全及對外出 口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說明】
[0020] 圖1為添加在空白蘋果基質(zhì)中的5ng/mL氣挫菌酷胺標液的選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含氣挫菌酷胺的蘋果空白樣品的選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為W不含氣挫菌酷胺的蘋果空白樣品為基質(zhì)配制的氣挫菌酷胺標準工作曲 線。
【具體實施方式】
[0023] 現(xiàn)W W下實施實例來說明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 實施例中使用的儀器與試劑
[0025] TlSBasic均質(zhì)器（IKA,Germany); 58IOR離屯、機化卵endo;rf，Germany) ;MS3基本型 旋滿混合器（IKA，Germany);7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent，USA);乙二胺-N-丙基 硅烷(PSA)吸附劑(40~60WI1)、十八烷基硅烷鍵合相(Cis)凈化劑(40~60WI1)均購于美國安 捷倫科技有限公司。
[0026] 試劑：乙臘、丙酬、正己燒化PLC級，Merke，Germany);乙酸（HPLC級，CNW，Germany); 無水硫酸儀、氯化鋼和乙酸鋼為分析純，均購自國藥集團化學試劑有限公司。
[0027] 標準物質(zhì)：純度99.5%，購自德國化.E虹enstorfer公司。
[00%]實施例1:蘋果中氣挫菌酷胺殘留量的檢測
[00巧](1)樣品前處理 稱取經(jīng)充分混勻的蘋果10.0 g于50mL離屯、管中，準確加入20mL乙臘，均質(zhì)提取Imin，加 入3g無水硫酸儀和2g氯化鋼，滿旋Imin后，700化/min離屯、5min。離屯、后，取6mL乙臘提取液 轉(zhuǎn)移至裝有900mg無水硫酸儀、300mg Cis和150mg PSA的離屯、管中，滿旋Imin，SOOOr/min離 屯、5min。取ImL上清液于氮吹管中，于40°C氮氣吹干，加入體積比為1/1的丙酬/正己燒混合 溶劑溶解殘渣，滿旋混勻過膜后，移入進樣瓶中待GC-MS/MS測定。
[0030] (2)標準工作溶液的配制 準確稱取25±0.1 mg標準品于25mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容得1000.Ojig/mL標準儲 備液;移取1. OmL標準儲備液置于IOOmL容量瓶中，用體積比為1/1