一種蔬菜和水果中硅噻菌胺殘留量的測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種蔬菜和水果中娃嚷菌胺殘留量的測(cè)定方法，更具體地說(shuō)是采用氣 相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)定性定量測(cè)定蔬菜和水果中殘留的娃嚷菌胺含量的方法，屬于 農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 娃嚷菌胺(通用名：Silthiof am,試驗(yàn)代號(hào):Mon65500，商品名稱(chēng):Latitude，其他名 稱(chēng)：Silthio地am),是由孟山都公司開(kāi)發(fā)的酷胺類(lèi)殺菌劑。主要用作種子處理，防治谷物上 的全蝕病?；瘜W(xué)名稱(chēng):N-締丙基-4,5-二甲基-2-(立甲基娃基)嚷吩-3-甲酯胺，英文名稱(chēng):N-al lyl-4,5-dimethy 1-2-( trimethylsiIyl )thiophene-3-carboxamide ,CAS登錄號(hào)： 175217-20-6，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
外觀為白色晶狀粉末;烙點(diǎn)：86.1~88.3°C ;沸點(diǎn)>280°C ;蒸汽壓8.1 X 10ImPa(20°C) 分配系數(shù)：Kowlo評(píng)=3.72 (20 °C ); Henry常數(shù)5.4 X 10-1 化 m3mol-l;溶解度：水39.9mg/L (20°C)，正己燒15.5g/L(20°C)，對(duì)二甲苯、1，2-二氯乙燒、甲醇、丙酬、乙酸乙醋均>250g/L (20°C);穩(wěn)定性 iDl'SOeicKp冊(cè)），448d(pH7)，314d(pH9)(25°C)。
[0003] 娃嚷菌胺是由孟山都公司1993-94年發(fā)現(xiàn)、并于1998年在英國(guó)布賴(lài)頓植保會(huì)議上 介紹的新穎殺菌劑，可能是ATP抑制劑，抑制能量(ATP)從線粒體向細(xì)胞溶質(zhì)的傳遞。具有良 好的保護(hù)活性，殘效期長(zhǎng)。持效期長(zhǎng)，用作種子處理劑。1994年，娃嚷菌胺在歐盟進(jìn)入田間試 驗(yàn)階段，1999年在愛(ài)爾蘭首先獲準(zhǔn)登記，繼而在歐盟其他國(guó)家、中國(guó)、南非等取得進(jìn)一步的 登記。2004年1月1日，娃嚷菌胺列入歐盟農(nóng)藥登記指令(91/414)附錄1，其登記資料因此獲 得了運(yùn)一天起算的10年期的保護(hù)權(quán)。娃嚷菌胺的主要適用作物有:大麥、黑小麥和小麥等。 其主要市場(chǎng)包括:比利時(shí)、智利、中國(guó)、捷克共和國(guó)、丹麥、法國(guó)、德國(guó)、愛(ài)爾蘭、波蘭、南非、瑞 典和英國(guó)等，具有很廣闊的應(yīng)用前景。
[0004] 隨著娃嚷菌胺的登記、推廣和使用，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的歐盟等國(guó)家制定了 其在蔬菜、水果、糧谷和畜產(chǎn)品等食品農(nóng)產(chǎn)品中的最大允許殘留量(M化），M化允許值很?chē)?yán) 格，M化范圍為:0.01~0.05mg/kg，歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定若田間使用農(nóng)藥沒(méi)有在該國(guó)家登 記，沒(méi)有制定相應(yīng)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng)產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性 食品中殘留限量均實(shí)行0.0 lmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 現(xiàn)階段，對(duì)娃嚷菌胺殘留量測(cè)定方法的研究較少，報(bào)道的檢測(cè)方法主要為蔬菜和 水果中娃嚷菌胺殘留檢測(cè)方法，運(yùn)些檢測(cè)方法均采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜化C-MS/MS)測(cè)定蔬 菜和水果中娃嚷菌胺殘留量的檢測(cè)方法，使用LC-MS/MS巧憶食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快 速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，但由于其價(jià)格較昂貴，很多檢測(cè)機(jī)構(gòu)、企業(yè)或科研院所未配置該 儀器或配置臺(tái)數(shù)較少，由于不同的化合物采用LC-MS/MS檢測(cè)時(shí)，需使用不同的流動(dòng)相或色 譜柱，運(yùn)樣需要不斷更換色譜柱、流動(dòng)相并耗費(fèi)比較長(zhǎng)的時(shí)間對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行平衡，運(yùn)一定程度 上制約了 LC-MS/MS的應(yīng)用。使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)分析食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留 具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高、選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)幾百種農(nóng)藥的多殘留分析，但迄今為止 未見(jiàn)食品農(nóng)產(chǎn)品中娃嚷菌胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法的報(bào)道，因此建立簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn) 確、耐用、能準(zhǔn)確定性和定量分析蔬菜和水果中氣酸菌酷胺殘留量的GC-MS/MS檢測(cè)方法具 有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種蔬菜和水果中娃嚷菌胺殘留量的測(cè)定方法。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:一種蔬菜和水果中娃嚷菌胺殘留 量的測(cè)定方法，包括如下步驟：
[000引（1)提取稱(chēng)取樣品于具塞離屯、管中，加入乙臘或含1 %乙酸的乙臘溶液均質(zhì)提取 Imin，加入氯化鋼或乙酸鋼中的一種和無(wú)水硫酸儀，振蕩后離屯、。
[0009] (2)凈化移取樣品提取液上清液于離屯、管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，滿旋振 蕩，離屯、，吸取一定量?jī)艋旱獨(dú)獯蹈珊?，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑溶解定 容，過(guò)膜后，待氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)檢測(cè)。
[0010] (3)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含娃嚷菌胺的同種類(lèi)基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理時(shí)，得樣品提取凈化 殘?jiān)?，加入適量溶劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液，滿旋混勻，配制成至少3個(gè)濃度的娃嚷菌胺系列混合標(biāo)準(zhǔn) 工作液。
[0011] (4)氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)測(cè)定將步驟(3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作 液進(jìn)行GC-MS/MS測(cè)定，W標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn) 工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化后的樣品液注入GC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液 中娃嚷菌胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到樣品液中娃嚷菌胺含量，然后根據(jù)樣品 液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中娃嚷菌胺殘留量;若上機(jī)溶液中娃嚷菌胺殘留量超過(guò) 線性范圍上限，需用定容溶劑將上機(jī)溶液濃度稀釋至線性范圍之內(nèi)。
[0012] 步驟(1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱(chēng)樣量，并加適量水充分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟(1)中采用乙臘提取時(shí)加入氯化鋼鹽析，采用含1%乙酸的乙臘溶液提取時(shí)加 入乙酸鋼鹽析;含水量較少的樣品鹽析時(shí)需加入一定量的水。
[0014] 步驟(2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無(wú)水硫酸儀、Cis和PSA組成，每毫升提取液中無(wú) 水硫酸儀、Cis和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟(4)中氣相色譜條件為:色譜柱:HP-5MS毛細(xì)管色譜柱，柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.25mm， 膜厚0.25皿;進(jìn)樣口溫度250°C ;載氣：He，不分流模式進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1化;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分鐘2 °C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持IOmin;傳輸線溫度:290°C。
[0016] 步驟(4)中質(zhì)譜條件為：電離模式：電子轟擊電離化I，70eV);離子源溫度280°C;碰 撞氣:氣氣;多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式MRM，監(jiān)測(cè)參數(shù)為：
[0017] 步驟(4)中測(cè)定樣液和基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液時(shí)，若樣液中農(nóng)藥色譜峰保留時(shí)間與標(biāo) 準(zhǔn)溶液中相應(yīng)農(nóng)藥保留時(shí)間相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選擇的離子均 出現(xiàn)，而且離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運(yùn)種農(nóng)藥;若 上述兩個(gè)條件不能同時(shí)滿足，則判斷不含該種農(nóng)藥。
[0018] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0019] 本發(fā)明利用分散固相萃取技術(shù)，建立了簡(jiǎn)便、快速并能有效避免樣品中基質(zhì)干擾 的樣品前處理方法，將此前處理方法結(jié)合GC-MS/MS應(yīng)用于蔬菜和水果中娃嚷菌胺定性確證 和定量檢測(cè)，平均回收率為83.0%~90.8%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為5.1 %~7.5%，檢 出限低于0.01化g/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。能滿足美 國(guó)、歐盟、日本等國(guó)家對(duì)相應(yīng)產(chǎn)品安全檢測(cè)的技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全及對(duì)外出 口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為添加在空白蘋(píng)果基質(zhì)中的5ng/mL娃嚷菌胺標(biāo)液的選擇離子色譜圖。
[0021] 圖2為不含娃嚷菌胺的蘋(píng)果空白樣品的選擇離子色譜圖。
[0022] 圖3為W不含娃嚷菌胺的蘋(píng)果空白樣品為基質(zhì)配制的娃嚷菌胺標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 現(xiàn)W W下實(shí)施實(shí)例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，但并不是限制本發(fā)明的范圍。
[0024] 實(shí)施例中使用的儀器與試劑
[0025] TlSBasic均質(zhì)器（IKA,Germany); 58IOR離屯、機(jī)化卵endo;rf，Germany) ;MS3基本型 旋滿混合器（IKA，Germany);7890N氣相色譜-5977C質(zhì)譜儀(Agilent，USA);乙二胺-N-丙基 硅烷(PSA)吸附劑(40~60WI1)、十八烷基硅烷鍵合相(Cis)凈化劑(40~60WI1)均購(gòu)于美國(guó)安 捷倫科技有限公司。
[0026] 試劑：乙臘、丙酬、正己燒化PLC級(jí)，Merke ,Germany);乙酸（HPLC級(jí)，CNWiGermany); 無(wú)水硫酸儀、氯化鋼和乙酸鋼為分析純，均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
[0027] 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度99.5%，購(gòu)自德國(guó)化.E虹enstorfer公司。
[0028] 實(shí)施例1:蘋(píng)果中娃嚷菌胺殘留量的檢測(cè)
[00巧](1)樣品前處理稱(chēng)取經(jīng)充分混勻的蘋(píng)果10.Og于50mL離屯、管中，準(zhǔn)確加入20mL乙 臘，均質(zhì)提取Imin,加入3g無(wú)水硫酸儀和2g氯化鋼，滿旋Imin后，7000;r/min離屯、5min。離屯、 后，取6血乙臘提取液轉(zhuǎn)移至裝有900mg無(wú)水硫酸儀、300mg Ci8和150mg PSA的離屯、管中，滿 旋lmin，50(K)r/min離屯、5min。取1血上清液于氮吹管中，于40°C氮?dú)獯蹈?，加入體積比為1/1 的丙酬/正己燒混合溶劑溶解殘?jiān)?，滿旋混勻過(guò)膜后，移入進(jìn)樣瓶中待GC-MS/MS測(cè)定。
[0030] (2)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制準(zhǔn)確稱(chēng)取25 ± 0 . Img標(biāo)準(zhǔn)品于25mL容量瓶中，用乙臘溶 解，定容得1000.0 yg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液;移取1.0 mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液置于IOOmL容量瓶中，用用體積 比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑定容得到10.Oyg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間液;將不含娃嚷菌胺的蘋(píng)果 空白樣品按上述前處理步驟處理，取SmL空白提取凈化液，濃縮至干后，加入8血體積比為1/ 1的丙酬/正己燒混合溶劑滿旋溶解，用該溶液最終配制成