一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的lc-ms/ms測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法，更具體地說(shuō)是采 用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)定性定量測(cè)定蔬菜和水果中殘留的四氯蟲酰胺含量的方 法，屬于農(nóng)藥殘留量的測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 雙酰胺類殺蟲劑是近年來(lái)全球熱門的殺蟲劑產(chǎn)品，可廣泛應(yīng)用于水稻、蔬菜、棉花 等作物的害蟲控制，具有低毒、環(huán)境安全、高活性等優(yōu)點(diǎn)，包括氯蟲苯甲酰胺、氰蟲酰胺、氟 蟲雙酰胺等品種，四氯蟲酰胺（SYP-9080)是由中化集團(tuán)下屬沈陽(yáng)化工研究院研發(fā)、中化農(nóng) 化有限公司經(jīng)營(yíng)的新產(chǎn)品，我國(guó)首個(gè)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的雙酰胺類殺蟲劑，已獲得國(guó)家農(nóng) 業(yè)部的臨時(shí)登記。
[0003] 四氯蟲酰胺（SYP-9080)屬于魚尼丁受體激活劑類殺蟲劑，其通過(guò)與害蟲體內(nèi)魚 尼丁受體結(jié)合，打開鈣離子通道，使儲(chǔ)存在細(xì)胞內(nèi)的鈣離子持續(xù)釋放到肌漿中，鈣離子和肌 漿中基質(zhì)蛋白結(jié)合，引起肌肉持續(xù)收縮。昆蟲體癥狀表現(xiàn)為抽搐、拒食，最終死亡。四氯蟲 酰胺為低毒、廣譜殺蟲劑，對(duì)鱗翅目害蟲均具有很好的活性。防治對(duì)象包括稻縱卷葉螟、二 化螟、小菜蛾、甜菜夜蛾、玉米螟、甘蔗螟、小卷蛾、食心蟲等。
[0004] 隨著四氯蟲酰胺的登記、推廣和使用，有關(guān)四氯蟲酰胺殘留消解動(dòng)態(tài)及最終殘留 量等環(huán)境行為的研究勢(shì)必增加，同時(shí)，作為我國(guó)主要出口市場(chǎng)的歐盟、日本等國(guó)家規(guī)定若田 間使用農(nóng)藥沒有在該國(guó)家登記，沒有制定相應(yīng)的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，出口至其國(guó)家的食品農(nóng) 產(chǎn)品包括畜禽肉等動(dòng)物源性食品中殘留限量均實(shí)行0. 〇lmg/L的"一律標(biāo)準(zhǔn)"。
[0005] 迄今為止，未見國(guó)內(nèi)外有關(guān)于食品農(nóng)產(chǎn)品中四氯蟲酰胺殘留量檢測(cè)方法的報(bào)道， 使用LC-MS/MS測(cè)定食品農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，因此建立簡(jiǎn) 便、快速、準(zhǔn)確、耐用、能準(zhǔn)確定性和定量分析蔬菜和水果中四氯蟲酰胺殘留量的LC-MS/MS 檢測(cè)方法具有重要意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的 LC-MS/MS測(cè)定方法，包括如下步驟：
[0008] (1)提取 稱取樣品于具塞離心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取lmin，加入氯 化納或乙fe納中的一種和無(wú)水硫fe緩，振湯后尚心。
[0009] (2)凈化 移取樣品提取液上清液于離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩離心，過(guò)膜 后，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)檢測(cè)；
[0010] ⑶標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含四氯蟲酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 液，用空白提取凈化液配制成至少3個(gè)濃度的四氯蟲酰胺系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液；
[0011] ⑷液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS)測(cè)定 將步驟（3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行LC-MS/MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜 峰面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；在相同條件下將步驟（2)中凈化 后的樣品液注入LC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中四氯蟲酰胺的色譜峰面積，代入標(biāo)準(zhǔn)曲 線，得到樣品液中四氯蟲酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣品中四 氯蟲酰胺殘留量。
[0012] 步驟（1)中樣品若為脫水蔬菜和水果，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤(rùn)。
[0013] 步驟（1)中采用乙腈提取時(shí)加入氯化鈉鹽析，采用含1 %乙酸的乙腈溶液提取時(shí) 加入乙酸鈉鹽析；含水量較少的樣品鹽析時(shí)需加入一定量的水。
[0014] 步驟（2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無(wú)水硫酸鎂、C18和PSA組成，每體積提取液中 無(wú)水硫酸鎂、C18和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
[0015] 步驟⑷中液相色譜的流動(dòng)相為：含5mmol/L乙酸銨的水溶液和乙腈，流速 0. 2-0. 4mL/min，進(jìn)樣量 5iiL。
[0016] 步驟（4)中液相色譜使用梯度洗脫的方法，梯度洗脫程序?yàn)椋?br>【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在于，所述方法包括以下 步驟： (1) 提取 稱取蔬菜和水果樣品于具塞離心管中，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取 Imin，加入氣化納或乙酸納中的一種和無(wú)水硫酸緩振湯后尚心； (2) 凈化 移取樣品提取液上清液于離心管中，加入基質(zhì)分散固相萃取劑，渦旋振蕩離心，過(guò)膜 后，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS)檢測(cè)； (3) 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制 將不含四氯蟲酰胺的同種類基質(zhì)空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 液，用空白提取凈化液配制成至少3個(gè)濃度的四氯蟲酰胺系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液； (4) 測(cè)定和結(jié)果計(jì)算 將步驟（3)中的各濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)工作液進(jìn)行LC-MS/MS測(cè)定，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的色譜峰 面積對(duì)其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線；在相同條件下將步驟（2)中凈 化后的樣品液注入LC-MS/MS進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得樣品液中四氯蟲酰胺的色譜峰面積，代入基質(zhì) 標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到樣品液中四氯蟲酰胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質(zhì)量計(jì)算得到樣 品中四氯蟲酰胺殘留量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在 于，步驟（1)中蔬菜和水果樣品若為脫水樣品，需降低稱樣量，并加適量水充分浸潤(rùn)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在 于，步驟（1)中采用乙腈提取時(shí)需加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時(shí)需加 入乙酸鈉鹽析。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在 于，步驟（2)中基質(zhì)分散固相萃取劑由無(wú)水硫酸鎂、C 18和PSA組成，每體積提取液中無(wú)水硫 酸鎂、C18和PSA加入量分別為150mg、50mg和25mg。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法，其特征在 于，步驟（4)中LC-MS/MS的液相色譜分析條件為：填料為C 18的色譜柱，柱溫為30°C ;進(jìn)樣 體積為5 μ L· ;流動(dòng)相為：含5mmol/L乙酸銨的水溶液和乙腈，梯度洗脫；梯度洗脫程序?yàn)?
質(zhì)譜條件為：電噴霧質(zhì)譜檢測(cè)；電噴霧電壓為-3500至-4500V ;霧化氣壓力為 275. 9kPa ;干燥氣為氮?dú)?；干燥氣溫度?50°C ;干燥氣流速為10. OL/min ;多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM)負(fù)離子掃描模式；四氯蟲酰胺的母離子為535. 3?536. 3,子離子分別為499. 2? 502. 2 和 201. 4 ?202. 4。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種果蔬中四氯蟲酰胺殘留的LC-MS/MS測(cè)定方法，用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均質(zhì)提取樣品中殘留的四氯蟲酰胺，提取液經(jīng)乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷鍵合相（C18）基質(zhì)分散凈化后，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測(cè)，采用不含待測(cè)農(nóng)藥的空白基質(zhì)溶液建立校正的標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。本方法平均回收率為88.3%～92.1%，平均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為3.6%～5.3%，檢出限低于0.73μg/kg，具有操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、重復(fù)性好、定性定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)。能滿足0.01mg/kg殘留限量的“一律標(biāo)準(zhǔn)”技術(shù)要求，為保障我國(guó)人民食品安全、對(duì)外出口貿(mào)易健康發(fā)展提供有力的技術(shù)支撐。
【IPC分類】G01N30-02
【公開號(hào)】CN104535692
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510026280
【發(fā)明人】崔淑華, 程剛, 劉潤(rùn)珠, 趙峰
【申請(qǐng)人】山東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
【公開日】2015年4月22日
【申請(qǐng)日】2015年1月19日