準確稱取25 ± 0.1 mg標準品于25mL容量瓶中，用乙臘溶解，定容得1000.0 jig/mL標準儲 備液;移取1. OmL標準儲備液置于IOOmL容量瓶中，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑 定容得到10.Oyg/mL標準中間液;將不含氣挫菌苯胺的小麥空白樣品按上述前處理步驟處 理，取8血空白提取凈化液，濃縮至干后，加入8血體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑滿旋 溶解，用該溶液最終配制成1、2、5、10、20、50iig/L基質標準工作溶液。
[0034] (3)氣相色譜串聯(lián)質譜法(GC-MS/MS)測定 將不同濃度梯度的標準工作液分別注入GC-MS/MS，W外標法進行氣挫菌苯胺含量的定 量分析，即W標準工作液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線;在 相同條件下將樣品提取液注入GC-MS/MS進行測定，測得樣品液中氣挫菌苯胺的色譜峰面 積，代入標準工作曲線，得到樣品液中氣挫菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質量 計算得到樣品中氣挫菌苯胺殘留量。
[00巧]其中色譜條件為：
[0036] 色譜柱:HP-5MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm，膜厚0.25皿。
[0037] 進樣口溫度:250. (TC，進樣模式:不分流進樣，進樣量:化L。
[0038] 載氣:化，恒流模式，流速1.2mL/min。
[0039] 爐箱升溫程序:初溫60°C保持2min，W每分鐘20°C的速度升至200°C，然后W每分 鐘2°C的速度升至220°C，再W每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin。
[0040] 傳輸線溫度:290°C。
[0041] 其中，質譜參數(shù)為：
[0042] 電離模式:電子轟擊電離，即EI模式，能量70eV。
[0043] 離子源溫度:280。碰撞氣:氣氣。
[0044] 掃描方式:多反應監(jiān)測(SM)掃描模式;MRM檢測參數(shù)見表1。 表1:實施例1的MRM檢測參數(shù)
*為定量離子對。
[0045] 定性鑒定:在相同的條件下，如果樣液中農藥色譜峰保留時間與標準溶液中相應 農藥保留時間相一致，并且在扣除背景后的樣品質譜圖中，所選擇的離子均出現(xiàn)，而且離子 豐度比與標準溶液的離子豐度比相一致，則可判斷樣液中存在運種農藥;若上述兩個條件 不能同時滿足，則判斷不含該種農藥。
[0046] W標準工作液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線如表 2。 表2小麥巧白基質中氣畔蔭龍胺的標準工作曲線
[004引在不含氣挫菌苯胺的小麥中加入10、20和20化g/kg3個濃度水平的氣挫菌苯胺標 準溶液，待農藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定。將測定濃度與農藥理論添加 濃度進行比較，得到農藥添加回收率，每個添加水平平行測定6次，得其相對標準偏差，測定 結果見表3。由表3可W看出，在3個加標水平上，氣挫菌苯胺的平均回收率為85.4%~ 89.7 %，平均相對標準偏差(RSD)為5.8 %~8.8 %，說明本發(fā)明方法的回收率較高，重復性 好。
[0049]表3氣挫菌苯胺的回收率和重復性(n = 6)
[0050] 檢出限；
[0051 ]將不同濃度的氣挫菌苯胺基質標準工作溶液注入GC-MS/MS，W最低濃度基質標準 溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過程的濃縮倍數(shù)(小麥的濃縮倍數(shù)為0.2倍)計算檢出 限，氣挫菌苯胺的檢出限為〇.51]ig/kg。
[0052]實施例2:豬肉中氣挫菌苯胺殘留量的檢測 [0化3] (1)樣品前處理
[0054] 提取 稱取經充分混勻的5g豬肉樣品于50血離屯、管中，加入5mL水混勻，放置30min，準確加入 20mL乙臘，均質提取2min，加入3g無水硫酸儀和2g氯化鋼，滿旋Imin后，7000;r/min離屯、 5min。離屯、后，取SmL乙臘提取液于40 °C旋蒸或氮氣吹至約ImL,待凈化。
[0化5] 凈化 用5mL乙臘預洗Cis/PSA固相萃取柱，當液面到達吸附劑的頂部時，將上述提取溶液轉 入柱中，用2mL乙臘洗涂試管，并將洗涂液移入SPE柱中，待溶液達到吸附劑頂部時，加入4mL 乙臘至柱子上進行洗脫，洗脫液全部接收到定量試管中，用乙臘定容至lOmL，取ImL凈化液 用氮氣吹干后，用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑定容至ImL,過0.22皿濾膜后，待GC-MS/MS測定。
[0056] (2)標準工作溶液的配制 將lOOOiig/mL標準溶液用體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑稀釋成lOiig/mL標準中 間液，將不含氣挫菌苯胺的豬肉空白樣品按上述前處理步驟處理，取SmL空白提取凈化液， 濃縮至干后，加入SmL體積比為1/1的丙酬/正己燒混合溶劑滿旋溶解，用該溶液最終配制成 1、2、5、10、20、50yg/L基質標準工作溶液。
[0057] (3)氣相色譜串聯(lián)質譜法(GC-MS/MS)測定 操作步驟、色譜和質譜條件與上述小麥樣品中氣挫菌苯胺的測定一致。
[005引定性鑒定：同上述小麥樣品中氣挫菌苯胺的測定一致。
[0化9]線性關系： W標準工作液的色譜峰面積對其相應濃度進行回歸分析，得到標準工作曲線為Y = 34677X+4267.2，相關系數(shù)為0.9996。
[0060] 加標回收率和重復性：
[0061] 在不含氣挫菌苯胺的豬肉中加入10、20和20化g/kg 3個濃度水平的氣挫菌苯胺標 準溶液，待農藥添加30min后按上述處理步驟進行殘留量測定，將測定濃度與農藥理論添加 濃度進行比較，得到農藥添加回收率，每個添加水平平行測定6次，得其相對標準偏差，測定 結果見表4。由表4可W看出，在3個加標水平上，氣挫菌苯胺的平均回收率為81.0%~ 84.5 %，平均相對標準偏差(RSD)為6.1 %~6.8 %，說明本發(fā)明方法的回收率高，重復性好。
[0062] 表4氣挫菌苯胺的回收率和重復性(n = 6)
[0063] 檢出限；
[0064] 將不同濃度的氣挫菌苯胺基質標準工作溶液注入GC-MS/MS，W最低濃度基質標準 溶液色譜峰的3倍信噪比和樣品處理過程的濃縮倍數(shù)(豬肉的濃縮倍數(shù)為0.2倍)計算檢出 限，氣挫菌苯胺的檢出限為〇.65]ig/kg。
[0065] W上的實施例僅是對本發(fā)明的優(yōu)選實施方式進行描述，并非對本發(fā)明的范圍進行 限定，在不脫離本發(fā)明設計精神的前提下，本領域普通工程技術對本發(fā)明的技術方案作出 的各種變型和改進，均應落入本發(fā)明的權利要求書確定的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-MS/MS測定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： (1) 提取 稱取混勻樣品于具塞離心管中，加適量水后，加入乙腈或含1 %乙酸的乙腈溶液均質或 振蕩超聲提取后，加入氯化鈉或乙酸鈉中的一種和無水硫酸鎂，劇烈渦旋lmin后離心； (2) 凈化 移取一定體積樣品提取液，濃縮至lmL左右，經C18/PSA固相萃取柱凈化，乙腈洗脫，收集 洗脫液，取部分洗脫液濃縮至干后，用體積比為1/1的丙酮/正己烷混合溶劑溶解定容，過膜 后，待氣相色譜串聯(lián)質譜(GC-MS/MS)檢測； (3) 標準工作溶液的配制 將不含氟唑菌苯胺的同種類基質空白樣品按上述步驟（1)、（2)處理，得樣品提取凈化 殘渣，加入適量溶劑和標準溶液，渦旋混勻，配制成至少3個濃度的氟唑菌苯胺系列標準工 作液； (4) 測定和結果計算 將步驟(3)中的各濃度梯度的標準工作液進行GC-MS/MS測定，以標準工作液的色譜峰 面積對其相應濃度進行回歸分析，得到基質標準工作曲線;在相同條件下將步驟(2)中凈化 后的樣品液注入GC-MS/MS進行測定，測得樣品液中氟唑菌苯胺的色譜峰面積，代入基質標 準工作曲線，得到樣品液中氟唑菌苯胺含量，然后根據(jù)樣品液所代表試樣的質量計算得到 樣品中氟唑菌苯胺殘留量;若上機溶液中氟唑菌苯胺殘留量超過線性范圍上限，需用定容 溶劑將上機溶液濃度稀釋至線性范圍之內。2. 根據(jù)權利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-MS/MS測定方法，其特征在于，步 驟(1)中樣品若為含水量較少的樣品，提取前須加適量水充分浸潤。3. 根據(jù)權利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-MS/MS測定方法，其特征在于，步 驟（1)中采用乙腈提取時需加入氯化鈉鹽析，采用含1%乙酸的乙腈溶液提取時需加入乙酸 鈉鹽析。4. 根據(jù)權利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-MS/MS測定方法，其特征在于，步 驟⑵中進行(WPSA固相萃取凈化，乙腈洗脫時，洗脫體積為6~8mL。5. 根據(jù)權利要求1所述的一種氟唑菌苯胺殘留量的GC-MS/MS測定方法，其特征在于，步 驟(4)中GC-MS/MS分析條件為:色譜柱:HP-5 MS毛細管色譜柱，柱長30m，內徑0.25mm，膜厚 0.25μπι;進樣口溫度250.0°C;載氣：He，不分流模式進樣，進樣量：lyL;恒流模式，流速 1.2mL/min;升溫程序:初溫60°C保持2min，以每分鐘20°C的速度升至200°C，然后以每分鐘2 °C的速度升至220°C，再以每分鐘20°C的速度升至280°C，保持lOmin;傳輸線溫度:290°C ;電 離模式：電子轟擊電離(El，70eV);離子源溫度280°C ;碰撞氣：氬氣；多反應監(jiān)測掃描方式 MRM，監(jiān)測參數(shù)為：
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氟唑菌苯胺殘留量的GC?MS/MS測定方法，該方法主要用于測定糧谷、動物源性食品等復雜基質食品農產品中殘留的氟唑菌苯胺含量的方法。用乙腈或含1%乙酸的乙腈溶液均質提取樣品中殘留的氟唑菌苯胺，C18/PSA固相萃取柱凈化濃縮后，氣相色譜串聯(lián)質譜（GC?MS/MS）檢測，采用不含待測農藥的空白基質溶液建立校正的標準工作曲線，外標法定量。本方法平均回收率為81.0%～89.7%，平均相對標準偏差（RSD）為5.8%～8.8%，檢出限低于0.65μg/kg，具有操作簡便、快速、去雜效果好、靈敏度高、特征性強、重復性好、定性定量準確的優(yōu)點。能滿足美國、歐盟、日本等國家對相應產品安全檢測的技術要求，為保障我國人民食品安全及對外出口貿易健康發(fā)展提供有力的技術支撐。
【IPC分類】G01N30/02, G01N27/62, G01N30/06
【公開號】CN105717211
【申請?zhí)枴緾N201610067251
【發(fā)明人】崔淑華, 李瑞娟, 于建壘
【申請人】崔淑華
【公開日】2016年6月29日
【申請日】2016年1月30日