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【主權(quán)項】
1. 用于對包含新表位的膚片段進(jìn)行定量的生物測定方法，所述新表位是由蛋白酶對動 脈粥樣硬化斑塊的蛋白質(zhì)進(jìn)行切割而形成的，所述方法包括將包含所述膚片段的樣品與對 所述新表位具有特異性結(jié)合親和力的免疫結(jié)合配偶體相接觸，W及測定所述免疫結(jié)合配偶 體與所述樣品中膚片段的結(jié)合水平。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對包含C端新表位的膚片段具有特 異性結(jié)合親和力。3. 根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對包含N端新表位的膚片段具有特 異性結(jié)合親和力。4. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對包含新表位的膚片段 具有特異性結(jié)合親和力，所述新表位是由蛋白酶在CRP的下列任一部分序列中對CRP進(jìn)行切 割而形成的：5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對包含新表位的膚片 段具有特異性結(jié)合親和力，所述新表位是由蛋白酶在ApoE的下列任一部分序列中對ApoE進(jìn) 行切割而形成的：6.根據(jù)權(quán)利要求4或5的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對膚N端的下列任一序列具有 特異性結(jié)合親和力：或者對膚C端的下列任一序列具有特異性結(jié)合親和力：V7. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的方法，其中所述膚片段是光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚 糖、基底膜蛋白聚糖、核屯、蛋白聚糖、雙糖鏈蛋白聚糖的片段。8. 根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對包含新表位的膚片段具有特異 性結(jié)合親和力，所述新表位是由蛋白酶在光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚 糖、核屯、蛋白聚糖和雙糖鏈蛋白聚糖的下列任一部分序列中切割光亮蛋白聚糖、多功能蛋 白聚糖、基底膜蛋白聚糖、核屯、蛋白聚糖或雙糖鏈蛋白聚糖而形成的：9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對膚N端的下列任一序列具有特異 性結(jié)合親和力：10.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對膚C端的下列任一序列具有特 異性結(jié)合親和力：11.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對包含新表位的膚片 段具有特異性結(jié)合親和力，所述新表位是由蛋白酶在III型膠原蛋白的下列任一部分序列 中在符號*標(biāo)記的位點處對HI型膠原蛋白進(jìn)行切割而形成的：O12.根據(jù)權(quán)利要求11的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對膚N端的下列任一序列具有特 異性結(jié)合親和力：或者對膚C端的下列任一序列具有特異性結(jié)合親和力：13. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對包含新表位的膚片 段具有特異性結(jié)合親和力，所述新表位是由蛋白酶在彈性蛋白的下列任一部分序列中對彈 性蛋白進(jìn)行切割而形成的：14. 根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體對膚N端的下列任一序列具有特 異性結(jié)合親和力：或者對膚C端的下列任一序列具有特異性結(jié)合親和力：O15. 根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體不與作為所述新表位序 列之來源的完整蛋白特異性結(jié)合。16. 根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述免疫結(jié)合配偶體是單克隆抗體或者具有 特異性結(jié)合親和力的單克隆抗體片段。17. 根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的方法，其中所述方法W競爭性免疫測定的形式進(jìn)行，其 中將所述免疫結(jié)合配偶體和競爭劑在所述樣品存在下解育，所述競爭劑與所述樣品中的膚 片段競爭結(jié)合所述免疫結(jié)合配偶體。18. 根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其中所述競爭劑是合成膚，或者是切割所述表位的來源蛋 白W顯露所述新表位而形成的純化天然膚。19. 根據(jù)上述任一權(quán)利要求的方法，其中所述樣品是尿、血清、血或血漿的樣品。20. 根據(jù)前述任一權(quán)利要求的方法，其中所述樣品是來自患者的樣品，所述方法還包括 將所測定的所述膚片段的結(jié)合水平與下列特征值進(jìn)行比較：（a)相當(dāng)?shù)慕】祩€體和/或(b) 病理動脈粥樣硬化狀況。21. 針對C端或N端新表位的免疫結(jié)合配偶體，所述新表位是由蛋白酶切割光亮蛋白聚 糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、核屯、蛋白聚糖、雙糖鏈蛋白聚糖、III型膠原蛋白、 ApoE、CRP或彈性蛋白而形成的。22. 根據(jù)權(quán)利要求21的免疫結(jié)合配偶體，其對新表位具有特異性免疫反應(yīng)性，所述新表 位是由蛋白酶在權(quán)利要求5至14中任一項所述蛋白質(zhì)的任一部分序列中切割所述蛋白質(zhì)而 形成的。23. 根據(jù)權(quán)利要求21或22的免疫結(jié)合配偶體，其為單克隆抗體或其結(jié)合片段。24. 產(chǎn)生權(quán)利要求23所述單克隆抗體的細(xì)胞系。25. 包含C端或N端新表位的膚，所述新表位是由蛋白酶在權(quán)利要求5至14中任一項所述 蛋白質(zhì)的任一部分序列中切割所述蛋白質(zhì)而形成的。26. 根據(jù)權(quán)利要求25的膚，其作為半抗原與載體綴合W產(chǎn)生針對所述膚的免疫應(yīng)答，或 者固定于固體表面或者與檢測標(biāo)記綴合W用于免疫測定中。27. 編碼包含C端或N端新表位的膚的分離核酸分子，所述新表位是由蛋白酶在權(quán)利要 求5至14中任一項所述蛋白質(zhì)的任一部分序列中切割所述蛋白質(zhì)而形成的。28. 包含核酸序列的載體，所述核酸序列包含表達(dá)信號和編碼序列，所述編碼序列編碼 表達(dá)包含C端或N端新表位的膚，所述新表位是由蛋白酶在權(quán)利要求5至14中任一項所述蛋 白質(zhì)的任一部分序列中切割所述蛋白質(zhì)而形成的。29. 轉(zhuǎn)化有權(quán)利要求28所述載體并表達(dá)所述膚的宿主細(xì)胞。30. 免疫測定試劑盒，其包含權(quán)利要求21至23中任一項的免疫結(jié)合配偶體W及與所述 免疫結(jié)合配偶體結(jié)合的競爭劑，并任選地包含W下一種或多種:洗涂試劑、緩沖劑、終止試 劑、酶標(biāo)記、酶標(biāo)記底物、校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品、抗小鼠抗體和使用所述試劑盒進(jìn)行測定的說明書。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于進(jìn)行CVD風(fēng)險評估的生物化學(xué)標(biāo)志物，以及用于對包含新表位的肽片段進(jìn)行定量的生物測定方法，所述新表位通過以蛋白酶切割動脈粥樣硬化斑塊的蛋白質(zhì)例如光亮蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、基底膜蛋白聚糖、核心蛋白聚糖、雙糖鏈蛋白聚糖、III型膠原蛋白、CRP、ApoE或彈性蛋白而形成，所述方法包括將樣品例如尿或血清與對所述新表位具有反應(yīng)性的抗體相接觸，以及測定所述免疫結(jié)合配偶體與所述樣品中肽片段的結(jié)合水平。所述測定可預(yù)測心血管疾病事件的風(fēng)險。
【IPC分類】G01N33/68
【公開號】CN105510601
【申請?zhí)枴緾N201610059831
【發(fā)明人】莫滕·卡爾斯達(dá)爾, 佩爾·奎斯特, 娜塔莎·巴拉斯丘克
【申請人】北歐生物科技公司
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2008年11月4日
【公告號】CN101918846A, EP2208073A2, EP2538218A2, EP2538218A3, EP2538218A8, EP2538221A2, EP2538221A3, EP2538222A2, EP2538222A3, EP2538222A8, EP2538223A2, EP2538223A3, EP2538223A8, US9359633, US20100323377, WO2009059972A2, WO2009059972A3