了納米免疫傳感器的穩(wěn) 定性。
[0031] ④制備簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，降低了檢驗(yàn)苯并(a)巧的成本。
【附圖說明】
[0032] 圖1為不同電極修飾材料的循環(huán)伏安表征圖。
[0033] 圖2為基于本專利構(gòu)建的納米免疫傳感器用于苯并(a)巧檢測(cè)的響應(yīng)電流圖。
[0034] 圖3為肉制品I中苯并(a)巧檢測(cè)的差分脈沖伏安圖。
[0035] 圖4為肉制品II中苯并(a)巧檢測(cè)的差分脈沖伏安圖。
【具體實(shí)施方式】
[0036] 下面參照附圖對(duì)本發(fā)明【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0037] 參見圖1、圖2、圖3、圖4。
[003引實(shí)施例1
[0039] 用納米免疫傳感器檢測(cè)肉制品I中苯并(a)巧
[0040] 1.-種用于苯并(a)巧快速檢測(cè)的納米免疫傳感器的制備方法 [0041 ] a.電極預(yù)處理
[0042] 將玻碳電極用粒徑為0.05皿的氧化侶拋光粉拋光打磨至電極表面呈鏡面，然后用 蒸饋水沖洗干凈，再依次置于體積分?jǐn)?shù)為50%的硝酸、丙酬、去離子水中超聲清洗3min，氮 氣吹干，備用；
[0043] b.聚酷胺-胺-P孤A功能化石墨締復(fù)合物的制備
[0044] 準(zhǔn)確稱取0.2g石墨締加入到lOmL聚二締丙基二甲基氯化錠水溶液(PDDA，體積分 數(shù)為0.25% )中，超聲處理30min，水洗Ξ次去除過量的石墨締，制得PDDA功能化的石墨締， 取O.Olg P孤A功能化的石墨締加入到lOmL N，N-二甲基甲酯胺中，使其濃度為Img/mL，超聲 處理15min，得到均勻一致的P孤A功能化石墨締的N，N-二甲基甲酯胺懸浮液，備用；
[0045] 準(zhǔn)確稱取0.0?聚酷胺-胺溶于lOmL甲醇中，使其濃度為2mg/mL，超聲處理20min， 得到均勻透明的聚酷胺-胺的甲醇溶液，然后將聚酷胺-胺的甲醇溶液與PDDA功能化石墨締 的N，N-二甲基甲酯胺懸浮液按1:1混合均勻，超聲處理35min，制得聚酷胺-胺-PDDA功能化 石墨締復(fù)合物；
[0046] C.納米金的制備
[0047] 準(zhǔn)確量取50mL 0.1 mg/血的氯金酸溶液置于燒杯中，用玻璃棒攬拌下加熱至沸騰， 迅速加入2.5mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1 %的巧樣酸鋼溶液，持續(xù)攬拌至溶液顏色變?yōu)榫萍t色，得到納 米金溶液。（注：制備納米金使用的玻璃器皿在使用前需經(jīng)銘酸洗液浸泡2地，并沖洗，烘干 處理）
[004引d.納米免疫傳感器的制備
[0049] 將步驟a中得到的玻碳電極應(yīng)用Ξ電極系統(tǒng)，即W玻碳電極為工作電極、Ag/AgCl 電極為參比電極、銷絲電極為輔助電極，在-0.2V~+0.6V的電位區(qū)間，采用LK98BII型微機(jī) 電化學(xué)分析系統(tǒng)W50mV · 的掃描速度在新配制的0.05mol/L硫酸溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃 描10圈，對(duì)玻碳電極表面進(jìn)行活化處理。沖洗玻碳電極后，用移液槍移取化L步驟b得到的聚 酷胺-胺-P孤A功能化石墨締復(fù)合物滴涂到玻碳電極表面，于室溫驚干，再移取化L納米金溶 液滴涂到修飾的電極表面，于室溫驚干，然后在修飾電極表面滴涂化L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 %的 戊二醒溶液活化修飾的電極表面，于4°C條件下活化30min，然后用抑為7.4的0.2mol/L憐酸 鹽緩沖液沖洗電極，再滴涂化L多環(huán)芳控抗體，并于4°C條件下固定化，再滴涂化L質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為2%牛血清白蛋白溶液于4°C下封閉化，用抑為7.4的0.2mol/L憐酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗干 凈，得到苯并(a)巧納米免疫傳感器，于4°C條件下保存?zhèn)溆谩?br>[0050] 圖1為不同修飾階段電極的循環(huán)伏安圖，a為玻碳電極，b為聚酷胺-胺-PDDA功能化 石墨締-納米金修飾后的電極，C為在制備的納米免疫傳感器上滴加苯并(a)巧后的電極。由 圖可知，a電極(玻碳電極)在電解質(zhì)溶液中出現(xiàn)一對(duì)可逆的氧化還原峰，當(dāng)電極修飾后，氧 化還原峰電流值增大，運(yùn)是因?yàn)樾揎椢锞哂锌焖俚碾娮觽鬟f能力。而滴加苯并(a)巧后(進(jìn) 行免疫反應(yīng)后），氧化還原峰電流值大幅降低，表面抗原-抗體免疫反應(yīng)后生成的免疫復(fù)合 物在部分空間上阻礙了媒介體和底物的擴(kuò)散，電子傳遞受到了阻礙所致。
[0051] 2.上述納米免疫傳感器用于肉制品中苯并(a)巧的快速檢測(cè)
[0052] 取50mg苯并(a)巧標(biāo)準(zhǔn)品加入到lOmL二甲基亞諷中，再用抑為7.4的憐酸鹽緩沖溶 液定容至 lOOmL，然后取該液依次稀釋為 0ng/mL、0.01ng/mL、lng/mL、2.5ng/mL、5ng/mL、 10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL濃度梯度，備用。在權(quán)利要求2所述的納米免疫傳感器上涂上各 個(gè)梯度的上述苯并(a)巧標(biāo)準(zhǔn)品溶液，室溫下解育20min"WAg/AgCl電極為參比電極、銷絲 (片）電極為輔助電極，苯并（a)巧納米免疫傳感器為工作電極，組成Ξ電極測(cè)試系統(tǒng)，在 l.Ommol/L K3[Fe(CN)6]+0.1mol/L KCl+0.2mol/L憐酸鹽緩沖溶液(抑=7.0)進(jìn)行差分脈沖 伏安法的檢測(cè)。差分脈沖伏安法的檢測(cè)參數(shù)如下，掃描速度為50mV · S-1，電壓范圍為-0.2V ~+0.6V。^苯并(a)巧濃度為零時(shí)電流值和各濃度梯度的差值為縱坐標(biāo)，苯并(a)巧濃度的 對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，得到苯并(a)巧的免疫響應(yīng)電流差值與其濃度之間的線性曲線，即標(biāo)準(zhǔn)曲線 及線性回歸方程式 AIpc(μA)=4.09621g[C/(ng/mL)]+2.3733，相關(guān)系數(shù)R2 = 0.9925。其中 A Ipc(μΑ)為不同濃度苯并(a)巧的電流響應(yīng)差值值，μΑ，C為苯并(a)巧的濃度，ng/mL。
[005；3] b.測(cè)定
[0化4] 將肉制品I粉碎，取1 Og樣品，進(jìn)行W下的處理，即加入50mL環(huán)己燒，超聲處理1 Omiη 后過濾到濃縮瓶中，在7〇°C旋蒸至20mL，移入分液漏斗，用50mL二甲基亞諷萃取，再用30mL 環(huán)己燒提取，棄去環(huán)己燒層，把提取液旋蒸至lOmL，用5mL二甲基亞諷洗涂濃縮瓶，合并二甲 基亞諷，加入15血水，搖勻后過活化后的Cl姻相萃取小柱抽干，用30mL正己燒洗脫，收集洗 脫液，蒸干后用2m巧醇定容，經(jīng)0.45μπι濾膜過濾，備用。
[0055] 將上述納米免疫傳感器在與步驟a中的電解質(zhì)溶液相同的溶液中進(jìn)行差分脈沖伏 安檢測(cè)，掃描速度為50mV · s^，電壓范圍為-0.2V~+0.6V。得到差分脈沖伏安圖曰。然后取出 納米免疫傳感器，用去離子水沖洗去除電極表面的電解質(zhì)，備用。
[0056] 在上述納米免疫傳感器上滴涂上述提取液化L，室溫下解育20miruWAg/AgCl電極 為參比電極、銷絲(片）電極為輔助電極，苯并(a)巧納米免疫傳感器為工作電極，組成Ξ電 極測(cè)試系統(tǒng)，在與步驟a電解質(zhì)溶液相同的溶液中進(jìn)行差分脈沖伏安法的檢測(cè)，掃描速度為 50mV · s^，電壓范圍為-0.2V~+0.6V。得到差分脈沖伏安圖b。將圖a與圖b疊加后得到圖3。 由圖3得到，b圖的響應(yīng)電流值與a圖相比，響應(yīng)電流值變小，說明抗原與抗體產(chǎn)生了結(jié)合，也 就是說，肉制品中有苯并(a)巧被檢測(cè)出來。分別進(jìn)行Ξ次測(cè)量，求其平均值，按線性回歸方 程式計(jì)算其苯并(a)巧的濃度。該肉制品樣品中含有苯并(a)巧，其濃度為4.4ng/mL。
[0化7]實(shí)施例2
[0058] 用納米免疫傳感器檢測(cè)肉制品II中苯并(a)巧
[0059] 1. 一種用于苯并(a)巧快速檢測(cè)的納米免疫傳感器的制備方法
[0060] a.電極預(yù)處理
[0061] 同實(shí)施例1
[0062] b.聚酷胺-胺-石墨締復(fù)合物的制備
[0063] 同實(shí)施例1
[0064] c.納米金的制備 [00化]同實(shí)施例1
[0066] d.納米免疫傳感器的制備
[0067] 將步驟a中得到的玻碳電極應(yīng)用Ξ電極系統(tǒng)，即W玻碳電極為工作電極、Ag/AgCl 電極為參比電極、銷絲電極為輔助電極，在-0.2V~+0.6V的電位區(qū)間，采用LK98BII型微機(jī) 電化學(xué)分析系統(tǒng)W50mV · 的掃描速度在新配制的0.05mol/L硫酸溶液中進(jìn)行循環(huán)伏安掃 描10圈，對(duì)玻碳電極表面進(jìn)行活化處理。沖洗玻碳電極后，用移液槍移取扣L步驟b得到的聚 酷胺-胺-P孤A功能化石墨締復(fù)合物滴涂到玻碳電極表面，于室溫驚干，再移取扣L納米金溶 液滴涂到修飾的電極表面，于室溫驚干，然后在修飾電極表面滴涂扣L質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5 %的 戊二醒溶液活化修飾的電極表面，于4°C條件下活化30min，然后用抑為7.4的0.2mol/L憐酸 鹽緩沖液沖洗電極，再滴涂化L多環(huán)芳控抗體，并于4°C條件下固定化，再滴涂扣L質(zhì)量分?jǐn)?shù) 為2%牛血清白蛋白溶液于4°C下封閉化，用抑為7.4的0.2mol/L憐酸鹽緩沖液反復(fù)沖洗干 凈，得到苯并(a)巧納米免疫傳感器，于4°C條件下保存?zhèn)溆谩?br>[0068] 2.上述納米免疫傳感器用于肉制品中苯并(a)巧的快速檢測(cè)
[0069] 將肉制品II粉碎，取1 Og樣品，進(jìn)行W下的處理，即加入50mL環(huán)己燒，超聲處理 lOmin后過濾到濃縮瓶中，在70°C旋蒸至20mL左右，移入分液漏斗，用50mL二甲基亞諷萃取， 再用30mL環(huán)己燒提取，棄去環(huán)己燒層，把提取液旋蒸至lOmL，用5mL二甲基亞諷洗涂濃縮瓶， 合并二甲基亞諷，加入15mL水，搖勻后過活化后的Ci8固相萃取小柱抽干，用30mL正己燒洗 脫，收集洗脫液，蒸干后用2mL甲醇定容，經(jīng)0.45WI1濾膜過濾，備用。
[0070] 將上述納米免疫傳感器在與步驟a中的電解質(zhì)溶