高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及有機(jī)物分析領(lǐng)域，尤其涉及高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法。
【背景技術(shù)】
[0002]高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、栗、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓栗打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
[0003]通常，樣品中含有一些對(duì)分析者來(lái)說(shuō)不感興趣的東西。鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些生物物質(zhì)是一些可能在使用時(shí)與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)。這些物質(zhì)有比分析者的目標(biāo)物或少或大的保留值。那些保留值較小的物質(zhì)如鹽類一般來(lái)說(shuō)在空體積時(shí)就被沖出色譜柱。這些非目標(biāo)產(chǎn)物的干擾能被檢測(cè)器檢測(cè)到而且能形成色譜峰，氣泡，基線上移或者是負(fù)峰。如果樣品成分在柱子中有很強(qiáng)的保留而且流動(dòng)相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫下來(lái)，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會(huì)積累在柱頭。這些行為通常只有通過(guò)平行實(shí)驗(yàn)才能發(fā)現(xiàn)。有著中等保留值的樣品能被緩慢洗出而且表現(xiàn)為寬峰，基線擾動(dòng)，或者基線漂移。有時(shí)候這些被吸附的樣品成分累積到一定程度足以使他們開(kāi)始形成新的固定相。分析物能與這些雜質(zhì)作用形成一定的分離機(jī)理。保留時(shí)間會(huì)波動(dòng)，拖尾會(huì)出現(xiàn)。如果足夠的污染產(chǎn)生，柱子的反壓能超過(guò)栗所能承受的最大壓力，使柱子無(wú)法工作以及在堵塞處產(chǎn)生空體積。這時(shí)，我們就要對(duì)色譜柱進(jìn)行再生。而現(xiàn)有的反相填料柱再生方法一般是通過(guò)水一甲醇一異丙醇一二氯甲烷一異丙醇一甲醇一水進(jìn)行清洗，操作繁瑣，沖洗用料量大。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是現(xiàn)有的高效液相色譜儀中反相填料柱再生方法效果差，無(wú)專門的再生方法，為此提供一種高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉(zhuǎn)反相填料柱，用40-44倍體積的HPLC級(jí)水反沖反相填料柱，HPLC級(jí)水流速控制在4-6L/min，沖洗時(shí)進(jìn)4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用32-38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5-8L/min ； (3)、用28-30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6-9 L/min; (4)、用20-28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7-10 L/min。
[0006]本發(fā)明的有益效果是采用HPLC級(jí)水-甲醇-氯仿-甲醇流速逐漸提高、與反相填料柱相比的體積倍數(shù)逐漸降低的方法來(lái)再生反相填料柱，再生效果好，縮短了再生流程，反相色譜柱中水分含量少。
【具體實(shí)施方式】
[0007]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0008]實(shí)施例1:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉(zhuǎn)反相填料柱，用40倍體積的HPLC級(jí)水反沖反相填料柱，HPLC級(jí)水流速控制在4L/min，沖洗時(shí)進(jìn)4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用32倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5L/min; (3)、用28倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6L/min； (4)、用20倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7 L/min。
[0009]實(shí)施例2:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉(zhuǎn)反相填料柱，用42倍體積的HPLC級(jí)水反沖反相填料柱，HPLC級(jí)水流速控制在5L/min，沖洗時(shí)進(jìn)4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用36倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在7L/min; (3)、用29倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在7 L/min; (4)、用24倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在8 L/min。
[0010]實(shí)施例3:高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟:(1)、倒轉(zhuǎn)反相填料柱，用44倍體積的HPLC級(jí)水反沖反相填料柱，HPLC級(jí)水流速控制在6L/min，沖洗時(shí)進(jìn)4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在8L/min; (3)、用30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在9 L/min; (4)、用28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在10 L/min。
[0011]本發(fā)明可以有效去除反相填料柱中的水分，保證固定相的水分含量變化較小，從而保持水分條件的一致性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，其特征是它包括以下步驟:(1)、倒轉(zhuǎn)反相填料柱，用40-44倍體積的HPLC級(jí)水反沖反相填料柱，HPLC級(jí)水流速控制在4-6L/min，沖洗時(shí)進(jìn)4等分的200uL的二甲壓砜；(2)、用32-38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5-8L/min; (3)、用28-30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6_9 L/min ；(4)、用20-28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7-10 L/min。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了高效液相色譜儀中反相填料柱的再生方法，它包括以下步驟：（1）、倒轉(zhuǎn)反相填料柱，用40-44倍體積的HPLC級(jí)水反沖反相填料柱，HPLC級(jí)水流速控制在4-6L/min，沖洗時(shí)進(jìn)4等分的200uL的二甲壓砜；（2）、用32-38倍體積的甲醇反沖反相沖填料柱，甲醇流速控制在5-8L/min；（3）、用28-30倍體積的氯仿反沖反相填料柱，氯仿流速控制在6-9？L/min；（4）、用20-28倍體積的甲醇反沖反相填料柱，甲醇流速控制在7-10？L/min。采用HPLC級(jí)水-甲醇-氯仿-甲醇流速逐漸提高、與反相填料柱相比的體積倍數(shù)逐漸降低的方法來(lái)再生反相填料柱，再生效果好，反相色譜柱中水分含量少。
【IPC分類】G01N30/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105424839
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510929869
【發(fā)明人】袁泳
【申請(qǐng)人】袁泳
【公開(kāi)日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2015年12月15日