中放置有至少一種特異于肌酸酐的綴合物和至少一種特異于白蛋白的綴合物。尿樣品中的白蛋白和肌酸酐與綴合物混合并與各自的白蛋白-和肌酸酐-特異性綴合物結(jié)合。樣品-綴合物復(fù)合物從綴合物墊經(jīng)過(guò)含4個(gè)分析區(qū)108、109、110、111的膜107。4個(gè)分析區(qū)108、109、110、111含有在膜107上的特異性固定化的分析物-結(jié)合試劑。
[0066]樣品是獲自需要其尿肌酸酐濃度、尿白蛋白濃度、和/或白蛋白-肌酸酐比率的個(gè)體的尿樣品。尿樣品包含約5-50 μ 1的體積。在某些實(shí)施方式中，尿樣品體積為約8-40 μ 1、約10-30 μ 1、約12-20 μ 1、或約15 μ 1。尿樣品在運(yùn)行緩沖液中被稀釋?zhuān)渲袠悠废鄬?duì)于運(yùn)行緩沖液的稀釋度為約1:2、約1:3、約1:4、約1:5、約1:6、約1:7、約1:8、約1:9、約1:10、約 1:11、約 1:12、約 1:13、約 1:14、約 1:15、約 1:16、約 1:17、約 1:18、約 1:10、約 1:20、約1:21、約1:22、約1:23、約1:24、或約1:25。在所公開(kāi)的系統(tǒng)、方法和試劑盒中使用的合適的運(yùn)行緩沖液包括經(jīng)緩沖的鹽溶液、去污劑、蛋白質(zhì)和防腐劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，經(jīng)緩沖的鹽溶液是磷酸鹽緩沖鹽水。在另一實(shí)施方式中，去污劑是聚山梨醇酯-80。在另一實(shí)施方式中，蛋白質(zhì)是酪蛋白或酪蛋白鈉。在另一實(shí)施方式中，防腐劑是疊氮化鈉。在另一實(shí)施方式中，運(yùn)行緩沖液是pH 7.4的10mM磷酸鹽緩沖液、0.15M NaCl、0.5% (重量/體積)聚山梨醇酯-80去污劑、1% (重量/體積)酪蛋白鈉、和0.02% (重量/體積)疊氮化鈉。
[0067]Crt-檢測(cè)(肌酸酐檢測(cè))分析區(qū)108包含固定在硝酸纖維素膜上的第一肌酸酐綴合物-特異性固定劑，例如肌酸酐，其未結(jié)合或結(jié)合載體。如果尿樣品不含肌酸酐，則來(lái)自綴合物墊104的未結(jié)合的肌酸酐-特異性綴合物最大程度地與Crt-檢測(cè)分析區(qū)結(jié)合。如果肌酸酐-特異性綴合物已與尿樣品中的肌酸酐結(jié)合，則抑制肌酸酐-特異性綴合物與Crt-檢測(cè)分析區(qū)108結(jié)合，從而導(dǎo)致與尿樣品中的肌酸酐濃度成正比的Crt-檢測(cè)分析區(qū)信號(hào)強(qiáng)度降低。Crt-Con (肌酸酐對(duì)照)分析區(qū)109利用第二肌酸酐綴合物-特異性固定劑捕獲未被Crt-檢測(cè)分析區(qū)保留的肌酸酐-特異性綴合物，而不論它們是否已結(jié)合尿肌酸酐。用于第一肌酸酐綴合物-特異性固定劑的示例性載體包括但不限于，牛血清白蛋白(BSA)、鑰孔戚血藍(lán)蛋白(KLH)、卵白蛋白(0A)、樹(shù)形分子等等。載體是不與任一分析物的測(cè)量所使用的任何試劑和不與患者樣品中的非分析物交叉反應(yīng)的惰性分子。
[0068]Alb-檢測(cè)(白蛋白檢測(cè))分析區(qū)110包含第一白蛋白綴合物-特異性固定劑，例如人血清白蛋白(HSA)。如果尿樣品不含白蛋白，則來(lái)自綴合物墊104的未結(jié)合的白蛋白-特異性綴合物最大程度地與Alb-檢測(cè)分析區(qū)結(jié)合。如果白蛋白-特異性綴合物已與尿樣品中的白蛋白結(jié)合，則抑制白蛋白-特異性綴合物與Alb-檢測(cè)分析區(qū)110結(jié)合，從而導(dǎo)致與尿樣品中的白蛋白濃度成正比的Alb-檢測(cè)分析區(qū)信號(hào)強(qiáng)度降低。Alb-Con(白蛋白對(duì)照)分析區(qū)111利用第二白蛋白綴合物-特異性固定劑捕獲未被Alb-檢測(cè)分析區(qū)保留的白蛋白-特異性綴合物，而不論它們是否已結(jié)合尿白蛋白。
[0069]用于檢測(cè)區(qū)的固定劑是第一分析物綴合物-特異性試劑，例如用于競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定的分析物(肌酸酐或白蛋白)或分析物衍生物，或用于夾心測(cè)定的分析物綴合物-特異性試劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，用于肌酸酐的檢測(cè)區(qū)固定劑是肌酸酐或肌酸酐衍生物例如肌酸酐-載體綴合物。在另一實(shí)施方式中，用于白蛋白的檢測(cè)區(qū)固定劑是純化的人白蛋白、重組的人白蛋白、能夠結(jié)合白蛋白-特異性綴合物的人白蛋白片段、能夠結(jié)合白蛋白-特異性綴合物的人白蛋白結(jié)構(gòu)域、或人白蛋白衍生物例如包含HAS和促進(jìn)HAS與膜結(jié)合的另一種蛋白質(zhì)或分子的人白蛋白綴合物。
[0070]當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“衍生物”指的是與第二分子綴合的分析物，其保留其原始構(gòu)象的至少95%并以類(lèi)似于分析物的親和力與分析物結(jié)合劑結(jié)合。示例性分析物衍生物是與載體蛋白綴合的分析物、或與功能性基團(tuán)例如生物素綴合的分析物。
[0071]用于對(duì)照區(qū)的固定劑是與初始標(biāo)記的抗-分析物綴合物結(jié)合的第二分析物綴合物-特異性試劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，對(duì)照固定劑是對(duì)肌酸酐-或白蛋白-特異性綴合物特異的多克隆抗體。在某些實(shí)施方式中，對(duì)照固定劑是對(duì)肌酸酐-或人白蛋白-特異性綴合物抗體的種類(lèi)特異的多克隆抗體。對(duì)照固定劑的非限制性例子是山羊抗-兔抗體、山羊抗-小鼠抗體、山羊抗-綿羊抗體、兔抗-山羊抗體、兔抗-小鼠抗體、兔抗-綿羊抗體、小鼠抗-山羊抗體、小鼠抗-兔抗體、小鼠抗-綿羊抗體、綿羊抗-山羊抗體、綿羊抗-兔抗體、或綿羊抗-小鼠抗體。
[0072]在一個(gè)示例性實(shí)施方式中，如果肌酸酐-特異性綴合物包含兔抗-肌酸酐抗體且白蛋白-特異性綴合物包含小鼠抗-人白蛋白，那么肌酸酐-特異性對(duì)照固定劑是山羊抗-兔抗體且白蛋白-特異性對(duì)照固定劑是山羊抗-小鼠抗體。
[0073]儲(chǔ)存器墊112促進(jìn)從檢測(cè)膜107吸收經(jīng)稀釋的尿樣品并確保毛細(xì)管作用繼續(xù)沿著膜的整個(gè)長(zhǎng)度使綴合物和經(jīng)緩沖的尿移動(dòng)并清除膜上的任何未結(jié)合的綴合物。儲(chǔ)存器提供額外的毛細(xì)作用體積以使跨越檢測(cè)膜的分析物運(yùn)輸不僅僅依賴(lài)于檢測(cè)膜107的毛細(xì)作用體積。
[0074]圖3描述了整個(gè)檢測(cè)盒114，其包含兩個(gè)組分，檢測(cè)條100和任選的剛性箱150。盒的剛性箱包含樣品孔115，其中放置經(jīng)稀釋的尿樣品；和盒視窗116，其為讀取器提供檢測(cè)膜107上的分析區(qū)108、109、110和111的檢視。結(jié)構(gòu)支持物113與檢測(cè)條相關(guān)聯(lián)并負(fù)責(zé)保持檢測(cè)條在正確的位置和維持檢測(cè)膜和檢測(cè)條的其它部分之間的接觸。檢測(cè)盒包含在不同位置與檢測(cè)條物理接觸的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，從而當(dāng)在盒內(nèi)部時(shí)，提供足夠的壓力保持檢測(cè)條的位置，并為檢測(cè)條組分103、104、107和112之間的重疊區(qū)提供足夠的壓力以使這些組分保持物理接觸。檢測(cè)盒可由任何剛性材料(例如可塑塑料、熱塑性材料或?qū)訅翰牧?構(gòu)成。
[0075]指定的時(shí)間長(zhǎng)度之后，利用檢測(cè)盒讀取器117定量4個(gè)分析區(qū)108、109、110、111中每個(gè)的信號(hào)強(qiáng)度，圖4和5中描述了其的一個(gè)示例性實(shí)施方式。取決于與白蛋白-特異性和肌酸酐-特異性綴合物相關(guān)聯(lián)的標(biāo)記的類(lèi)型，檢測(cè)盒讀取器117具有相應(yīng)的檢測(cè)機(jī)制以檢測(cè)和測(cè)量來(lái)自分析區(qū)108、109、110、111的信號(hào)強(qiáng)度。
[0076]進(jìn)行反應(yīng)和獲得足夠強(qiáng)以測(cè)定分析物濃度的信號(hào)強(qiáng)度所需的時(shí)間長(zhǎng)度為約2-30分鐘、約5-25分鐘、約7-20分鐘、約10-17分鐘、或約15分鐘。在另一些實(shí)施方式中，所述時(shí)間短于約30分鐘、短于約25分鐘、短于約20分鐘、短于約15分鐘、短于約10分鐘、或短于約5分鐘。在另一些實(shí)施方式中，所述時(shí)間為約5分鐘、約6分鐘、約7分鐘、約8分鐘、約9分鐘、約10分鐘、約11分鐘、約12分鐘、約13分鐘、約14分鐘、約15分鐘、約16分鐘、約17分鐘、約18分鐘、約19分鐘、或約20分鐘。
[0077]檢測(cè)盒讀取器是反射分光光度計(jì)(reflectance spectrophotometer)、焚光計(jì)、或光學(xué)讀取器，其基于與分析物-特異性綴合物相關(guān)聯(lián)的標(biāo)記進(jìn)行選擇。例如，如果綴合物被熒光標(biāo)記標(biāo)記，則檢測(cè)盒讀取器是熒光計(jì)。如果綴合物被染料或有色珠子標(biāo)記，則檢測(cè)盒讀取器是反射分光光度計(jì)或光學(xué)讀取器。在某些實(shí)施方式中，如果綴合物被染料或有色珠子標(biāo)記，可通過(guò)裸眼讀取檢測(cè)盒。如果通過(guò)裸眼讀取檢測(cè)盒，則通過(guò)與有色標(biāo)準(zhǔn)品的比較來(lái)測(cè)定分析物的量。
[0078]在一個(gè)實(shí)施方式中，綴合物被熒光標(biāo)記標(biāo)記且測(cè)量?jī)x器是熒光計(jì)，所述熒光計(jì)測(cè)量檢測(cè)條101上的4個(gè)分析區(qū)108、109、110、111的熒光強(qiáng)度，從而由這些讀數(shù)計(jì)算結(jié)果。如下所述調(diào)整分析檢測(cè)區(qū)108和110中的每一個(gè)的強(qiáng)度:將每個(gè)檢測(cè)線強(qiáng)度除以其各自的分析對(duì)照區(qū)109或111。通過(guò)將經(jīng)調(diào)整的值與利用純凈的肌酸酐和白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品建立的校準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較來(lái)測(cè)定肌酸酐和白蛋白的濃度，并利用具有標(biāo)準(zhǔn)化量的肌酸酐和白蛋白二者的尿?qū)φ諛悠愤M(jìn)行確證。然后根據(jù)來(lái)源于白蛋白和肌酸酐標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)學(xué)算法計(jì)算結(jié)果。結(jié)果被表示為尿白蛋白的濃度、尿肌酸酐的濃度、樣品中存在的白蛋白與肌酸酐的比率。
[0079]在另一實(shí)施方式中，檢測(cè)盒讀取器是反射分光計(jì)，其測(cè)量從與白蛋白-特異性和肌酸酐-特異性綴合物相關(guān)聯(lián)的有色顆粒反射的光的特定波長(zhǎng)。在檢測(cè)帶和對(duì)照帶位點(diǎn)測(cè)量到的被反射光的量與每個(gè)位點(diǎn)聚集的微粒的密度成正比。數(shù)據(jù)整理和結(jié)果的報(bào)告如上文關(guān)于熒光計(jì)所述。
[0080]在另一實(shí)施方式中，讀取器設(shè)備檢測(cè)磁場(chǎng)且分析物-特異性綴合物中所使用的標(biāo)記是超順磁顆粒。數(shù)據(jù)整理和結(jié)果的報(bào)告如上文關(guān)于熒光計(jì)所述。
[0081]在圖5中所述的讀取器的一個(gè)實(shí)施方式中，微控制器121負(fù)責(zé)協(xié)調(diào)以下過(guò)程:從檢測(cè)盒114中檢測(cè)條100的分析區(qū)108、109、110、111測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度，如上所述處理信號(hào)強(qiáng)度，貯存檢測(cè)結(jié)果和用戶(hù)選項(xiàng)，通過(guò)物理通訊端口 124傳輸結(jié)果，無(wú)線傳輸結(jié)果，向操作者展示結(jié)果，處理各種用戶(hù)命令等等。
[0082]對(duì)白蛋白濃度、肌酸酐濃度和白蛋白-肌酸酐比率的計(jì)算基于數(shù)學(xué)算法和參考標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)源于值被指定的標(biāo)準(zhǔn)品；且在提供儀器之前，在制造廠進(jìn)行預(yù)校準(zhǔn)。結(jié)果被表示為尿白蛋白濃度、尿肌酸酐濃度和尿白蛋白與肌酸酐的比率，其被展示在液晶顯示器126上。經(jīng)一段時(shí)間獲得的系列結(jié)果被貯存在儀器中，其可按需獲取并以數(shù)字格式或圖像格式被展示。典型地，結(jié)果將連同檢測(cè)數(shù)據(jù)一起展示。用戶(hù)可選擇使所有之前貯存的檢測(cè)結(jié)果及其數(shù)據(jù)被展示，或使所有結(jié)果被展示為圖形以至于能夠識(shí)別任何趨勢(shì)。為了向內(nèi)部計(jì)算機(jī)輸入命令，儀器的外部箱上可含有按鈕或鍵盤(pán)。
[0083]結(jié)果還可通過(guò)外部端口 124被下載到外部電腦上并/或在外部打印機(jī)上被打印。儀器的電子設(shè)備由內(nèi)部電池125和/或外部電源123驅(qū)動(dòng)。組件被放在剛性外部箱118中，所述外部箱118具有用于顯示監(jiān)視器126的視窗和用于將檢測(cè)盒114插入讀取器設(shè)備中的檢測(cè)盒槽119。可利用電源開(kāi)關(guān)122打開(kāi)或關(guān)閉檢測(cè)盒讀取器。
[0084]在另一實(shí)施方式中，檢測(cè)盒讀取器尺寸小、緊湊、重量輕、便攜、且被包裝成手持設(shè)備。一般而言，它們與常用的多種手持型血糖儀在外觀和設(shè)計(jì)上是