用于尿白蛋白和尿肌酸酐的快速檢測(cè)的制作方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于尿白蛋白和尿肌酸酐的快速檢測(cè)發(fā)明領(lǐng)域
[0001]利用側(cè)流層析法測(cè)量白蛋白和肌酸酐水平、以及白蛋白-肌酸酐比率的方法和設(shè)備。
[0002]發(fā)明背景
[0003]白蛋白-肌酸酐比率(ACR)測(cè)定同時(shí)測(cè)量尿中的兩種分析物:白蛋白和肌酸酐。當(dāng)機(jī)體正確地行使功能時(shí)，白蛋白在正常情況下不出現(xiàn)在尿中，因?yàn)樗ㄟ^(guò)腎臟的作用被留在血流中。當(dāng)少量白蛋白從腎臟排出到尿中時(shí)，存在被稱(chēng)為微量白蛋白尿的病癥。當(dāng)白蛋白從腎臟異常滲漏至尿中時(shí)，出現(xiàn)微量白蛋白尿。
[0004]肌酸酐是肌肉中的磷酸肌酸的副產(chǎn)物。在正常行使功能的機(jī)體中，肌酸酐以恒定速率被排出到尿中。當(dāng)同時(shí)測(cè)量白蛋白和肌酸酐時(shí)，結(jié)果被稱(chēng)為白蛋白-肌酸酐比率。由于利尿輸出和患者的水化狀態(tài)不同，所以使用ACR來(lái)確定尿中的白蛋白以校正尿的濃度。
[0005]具有糖尿病或高血壓的個(gè)體中的微量白蛋白尿已顯示出與發(fā)生神經(jīng)病、心血管疾病(CVD)、視網(wǎng)膜病、驚厥前期、炎性病癥和死亡的風(fēng)險(xiǎn)提高相關(guān)聯(lián)。ACR測(cè)定作為腎臟損傷的早期檢測(cè)方法以及療效的監(jiān)測(cè)方法。ACR測(cè)定常用于具有慢性疾病(例如，糖尿病和高血壓)且發(fā)生腎衰竭的風(fēng)險(xiǎn)提高的患者。
[0006]現(xiàn)有的肌酸酐測(cè)量方法包括比色實(shí)驗(yàn)，包括基于Jaffe’ s反應(yīng)的化學(xué)方法，其使用堿性苦味酸；和酶法，通過(guò)該方法，利用肌酸酶轉(zhuǎn)化肌酸酐，通過(guò)過(guò)氧化物酶產(chǎn)生顏色強(qiáng)度和測(cè)量反應(yīng)性底物。
[0007]通過(guò)四種方法中的一種測(cè)量尿中的白蛋白，包括比色法，通過(guò)該方法，染料與白蛋白分子直接反應(yīng)，從而形成有色的白蛋白-染料復(fù)合體；或免疫學(xué)方法，該方法使用比濁法(nephelometry)或池度測(cè)定法(turbidimetry);和基于經(jīng)標(biāo)記抗體的競(jìng)爭(zhēng)性或夾心免疫測(cè)定法。
[0008]目前用于進(jìn)行白蛋白-肌酸酐比率檢測(cè)的方法操作復(fù)雜或需要昂貴的儀器且一般在臨床實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。開(kāi)發(fā)可以為照護(hù)點(diǎn)(point-of-care)產(chǎn)品或柜臺(tái)售賣(mài)(over-the-counter)產(chǎn)品的簡(jiǎn)化測(cè)定將是有利的。
[0009]發(fā)曰月概沐
[0010]本文公開(kāi)了簡(jiǎn)化的用于分析物和分析物比率測(cè)定的照護(hù)點(diǎn)測(cè)定，其利用一次性檢測(cè)條(strip)和可重復(fù)使用的測(cè)量?jī)x器。所公開(kāi)的方法和設(shè)備利用側(cè)流免疫層析法的原理以在單個(gè)測(cè)定中測(cè)量尿白蛋白和尿肌酸酐二者并測(cè)定白蛋白-肌酸酐比率(ACR)。將患者的尿樣品放置在檢測(cè)盒中，所述檢測(cè)盒含有用于進(jìn)行檢測(cè)的試劑。然后將檢測(cè)盒插入讀取、計(jì)算和報(bào)告結(jié)果的檢測(cè)盒讀取器中。
[0011]在一個(gè)實(shí)施方式中，公開(kāi)了用于測(cè)定人樣品中白蛋白-肌酸酐比率的設(shè)備，所述設(shè)備包含含有檢測(cè)條的檢測(cè)盒，其中所述檢測(cè)條包含:單個(gè)樣品施加墊，其含有放置在固體支持物上的樣品孔；綴合物墊，其中放置有肌酸酐-特異性綴合物和白蛋白-特異性綴合物；側(cè)流膜；肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)，其中存在于樣品中且與肌酸酐-特異性綴合物結(jié)合的肌酸酐通過(guò)與膜相關(guān)聯(lián)的肌酸酐-特異性固定劑被保留；肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)，其中未被肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)保留的肌酸酐-特異性綴合物通過(guò)與膜相關(guān)聯(lián)的肌酸酐綴合物-特異性固定劑被保留；白蛋白-特異性檢測(cè)區(qū)，其中存在于樣品中且與白蛋白-特異性綴合物結(jié)合的白蛋白通過(guò)與膜相關(guān)聯(lián)的白蛋白-特異性固定劑被保留；白蛋白-特異性對(duì)照區(qū)，其中未被白蛋白-特異性檢測(cè)區(qū)保留的白蛋白-特異性綴合物通過(guò)與膜相關(guān)聯(lián)的白蛋白綴合物-特異性固定劑被保留；儲(chǔ)存器；用于測(cè)定樣品中白蛋白濃度、樣品中肌酸酐濃度、和白蛋白-肌酸酐比率的測(cè)量設(shè)備。
[0012]在所述設(shè)備的另一實(shí)施方式中，所述樣品是尿樣品。在另一實(shí)施方式中，所述設(shè)備是側(cè)流免疫層析設(shè)備。在另一實(shí)施方式中，所述測(cè)量設(shè)備讀取、計(jì)算并展示結(jié)果為樣品中白蛋白濃度、樣品中肌酸酐濃度、和白蛋白-肌酸酐比率。在另一些實(shí)施方式中，所述測(cè)量設(shè)備是反身才分光計(jì)(reflectance spectrometer)或焚光計(jì)(fluorometer)。
[0013]在設(shè)備的另一些實(shí)施方式中，肌酸酐-特異性綴合物是對(duì)肌酸酐特異的抗體。在另一實(shí)施方式中，肌酸酐-特異性固定劑是肌酸酐。在另一實(shí)施方式中，肌酸酐與載體蛋白結(jié)合，所述載體蛋白例如牛血清白蛋白、鑰孔戚血藍(lán)蛋白或卵白蛋白。在另一實(shí)施方式中，肌酸酐綴合物-特異性固定劑是對(duì)肌酸酐-特異性抗體的種類(lèi)(species)特異的抗體。
[0014]在設(shè)備的另一實(shí)施方式中，白蛋白-特異性綴合物是對(duì)白蛋白特異的抗體。在另一實(shí)施方式中，白蛋白-特異性固定劑是人血清白蛋白。在另一實(shí)施方式中，白蛋白綴合物-特異性固定劑是對(duì)白蛋白-特異性抗體的種類(lèi)特異的抗體。
[0015]在設(shè)備的某些實(shí)施方式中，任何抗體是來(lái)自兔、雞、山羊、豚鼠、倉(cāng)鼠、馬、小鼠、大鼠或綿羊的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0016]在設(shè)備的另一實(shí)施方式中，用可檢測(cè)部分標(biāo)記肌酸酐-特異性綴合物和白蛋白-特異性綴合物，所述可檢測(cè)部分是微?；蛉玖稀Ｋ鑫⒘Ｊ悄z體金顆粒、聚苯乙烯顆粒、丙烯酸顆粒、磁性顆?；蚱渌滔辔⒘＃铱杀粺晒饣衔镏驑?biāo)簽化。
[0017]在設(shè)備的另一實(shí)施方式中，單個(gè)樣品施加墊、綴合物墊、肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)、肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)、白蛋白-特異性檢測(cè)區(qū)、白蛋白-特異性對(duì)照區(qū)、和儲(chǔ)存器全部放置在單個(gè)檢測(cè)條上。在另一實(shí)施方式中，檢測(cè)條被裝在剛性盒中。
[0018]在設(shè)備的另一實(shí)施方式中，所述設(shè)備包含2個(gè)檢測(cè)條，其中第一檢測(cè)條包含:含肌酸酐-特異性綴合物的第一綴合物墊、肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)、肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)、和第一儲(chǔ)存器；且第二檢測(cè)條包含:含白蛋白-特異性綴合物的第二綴合物墊、白蛋白-特異性檢測(cè)區(qū)、白蛋白-特異性對(duì)照區(qū)、和第二儲(chǔ)存器；其中所述第一檢測(cè)條和所述第二檢測(cè)條被排列成平行、彼此相對(duì)、或彼此成一定角度的構(gòu)型以使所述第一檢測(cè)條和所述第二檢測(cè)條共享單個(gè)樣品施加墊。在另一實(shí)施方式中，所述第一檢測(cè)條和所述第二檢測(cè)條被裝在單個(gè)剛性盒中。
[0019]本文還公開(kāi)了測(cè)定樣品中白蛋白-肌酸酐比率的方法，所述方法包括:將樣品放入根據(jù)權(quán)利要求1的檢測(cè)盒的樣品施加墊中，其中樣品進(jìn)入綴合物墊并被暴露于肌酸酐-特異性綴合物和白蛋白-特異性綴合物，其中樣品中的肌酸酐與肌酸酐-特異性綴合物結(jié)合且樣品中的白蛋白與白蛋白-特異性綴合物結(jié)合，其中結(jié)合肌酸酐的肌酸酐-特異性綴合物與肌酸酐檢測(cè)區(qū)中的肌酸酐-特異性固定劑結(jié)合并且未結(jié)合的物質(zhì)被傳遞到肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)，所述肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)與未結(jié)合肌酸酐-特異性固定劑的肌酸酐-特異性綴合物結(jié)合，以及其中結(jié)合白蛋白的白蛋白-特異性綴合物與白蛋白檢測(cè)區(qū)中的白蛋白-特異性固定劑結(jié)合并且未結(jié)合的物質(zhì)被傳遞到白蛋白-特異性對(duì)照區(qū)，所述白蛋白-特異性對(duì)照區(qū)與未結(jié)合白蛋白-特異性固定劑的白蛋白-特異性綴合物結(jié)合，其中樣品與綴合物反應(yīng)并到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間為約2分鐘至約30分鐘；將所述檢測(cè)盒插入測(cè)量設(shè)備中；提供來(lái)自所述樣品的肌酸酐濃度、白蛋白濃度、和白蛋白-肌酸酐比率的數(shù)值結(jié)果。
[0020]在所述方法的另一實(shí)施方式中，所述樣品是尿樣品。在另一實(shí)施方式中，所述檢測(cè)盒是側(cè)流免疫層析設(shè)備的一部分。在另一實(shí)施方式中，所述測(cè)量設(shè)備讀取、計(jì)算并展示結(jié)果為樣品中白蛋白濃度、樣品中肌酸酐濃度、和白蛋白-肌酸酐比率。
[0021]在所述方法的另一實(shí)施方式中，樣品與綴合物反應(yīng)并到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間為約7分鐘至約25分鐘、約10分鐘至約20分鐘、或約15分鐘。
[0022]在所述方法的另一些實(shí)施方式中，肌酸酐-特異性綴合物是對(duì)肌酸酐特異的抗體。在另一實(shí)施方式中，肌酸酐-特異性固定劑是肌酸酐。在另一實(shí)施方式中，肌酸酐與載體分子結(jié)合，所述載體分子例如牛血清白蛋白、鑰孔戚血藍(lán)蛋白、卵白蛋白、或樹(shù)形分子(dendrimers)。在另一實(shí)施方式中，肌酸酐綴合物_特異性固定劑是對(duì)肌酸酐_特異性抗體的種類(lèi)特異的抗體。
[0023]在所述方法的另一實(shí)施方式中，白蛋白-特異性綴合物是對(duì)白蛋白特異的抗體。在另一實(shí)施方式中，白蛋白-特異性固定劑是人血清白蛋白。在另一實(shí)施方式中，白蛋白綴合物-特異性固定劑是對(duì)白蛋白-特異性抗體的種類(lèi)特異的抗體。
[0024]在所述方法的某些實(shí)施方式中，任何抗體是來(lái)自兔、雞、山羊、豚鼠、倉(cāng)鼠、馬、小鼠、大鼠或綿羊的單克隆抗體或多克隆抗體。
[0025]在所述方法的另一實(shí)施方式中，用可檢測(cè)部分標(biāo)記肌酸酐-特異性綴合物和白蛋白-特異性綴合物，其中所述可檢測(cè)部分是微?；蛉玖?。所述微粒是膠體金顆粒、聚苯乙烯顆粒、丙烯酸顆粒、磁性顆?；蚱渌滔辔⒘?，且可被熒光化合物著色或標(biāo)簽化。
[0026]在所述方法的另一實(shí)施方式中，單個(gè)樣品施加墊、綴合物墊、肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)、肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)、白蛋白-特異性檢測(cè)區(qū)、白蛋白-特異性對(duì)照區(qū)和儲(chǔ)存器全部放置在單個(gè)檢測(cè)條上。在另一實(shí)施方式中，檢測(cè)條被裝在剛性盒中。
[0027]在所述方法的另一實(shí)施方式中，所述設(shè)備包含2個(gè)檢測(cè)條，其中第一檢測(cè)條包含:含肌酸酐-特異性綴合物的第一綴合物墊、肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)、肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)、和第一儲(chǔ)存器；且第二檢測(cè)條包含:含白蛋白-特異性綴合物的第二綴合物墊、白蛋白-特異性檢測(cè)區(qū)、白蛋白-特異性對(duì)照區(qū)、和第二儲(chǔ)存器；其中所述第一檢測(cè)條和所述第二檢測(cè)條被排列成平行、彼此相對(duì)，或彼此成一定角度的構(gòu)型以使所述第一檢測(cè)條和所述第二檢測(cè)條共享單個(gè)樣品施加墊。在另一實(shí)施方式中，所述第一檢測(cè)條和所述第二檢測(cè)條被裝在單個(gè)剛性盒中。
[0028]本文還公開(kāi)了用于測(cè)定白蛋白-肌酸酐比率的試劑盒，其包含:至少一個(gè)檢測(cè)盒；可重復(fù)使用的檢測(cè)設(shè)備；和從樣品測(cè)定白蛋白-肌酸酐比率的說(shuō)明。在另一實(shí)施方式中，試劑盒還包含運(yùn)行緩沖液(running buffer)。
[0029]在所述試劑盒的一個(gè)實(shí)施方式中，檢測(cè)盒包含:檢測(cè)條，其中所述檢測(cè)條包含:單個(gè)樣品施加墊，其含有放置在固體支持物上的樣品孔；綴合物墊，其中放置有肌酸酐-特異性綴合物和白蛋白-特異性綴合物；側(cè)流膜；肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)，其中存在于樣品中且與肌酸酐-特異性綴合物結(jié)合的肌酸酐通過(guò)與膜相關(guān)聯(lián)的肌酸酐-特異性固定劑被保留；肌酸酐-特異性對(duì)照區(qū)，其中未被肌酸酐-特異性檢測(cè)區(qū)保留的肌酸酐-特異性綴合物通過(guò)與膜相關(guān)聯(lián)的肌酸酐綴合物-特異性固定劑被保留；白蛋白-特異性檢測(cè)區(qū)，其中存在于樣品中且與白蛋白-