專利名稱：：人極微量白蛋白elisa檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本實(shí)用新型涉及診斷試劑應(yīng)用設(shè)備領(lǐng)域，尤其涉及一種用于檢測人白蛋白的試劑盒。
背景技術(shù)：
：人血清白蛋白是衡量肝臟功能和機(jī)體營養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)。目前，用于檢測白蛋白的方法主要有溴甲酚紫(BCP)法、蛋白電泳法和溴甲酚綠(BCG)法，其中BCP與BCG法需利用全自動(dòng)生化分析儀，其操作簡便、快速，但全自動(dòng)生化分析儀價(jià)格昂貴，一次性投資大，且靈敏度不高，對(duì)于極微量白蛋白的檢測準(zhǔn)確度不高；蛋白電泳法操作繁瑣，且因白蛋白與麗春紅S染料結(jié)合力偏低，常導(dǎo)致結(jié)果偏低，目前已經(jīng)不常被釆用。因此，有必要選用一種經(jīng)濟(jì)、靈敏度和準(zhǔn)確度高的方法來進(jìn)行白蛋白，特別是極微量白蛋白的檢測。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)是將抗原、抗體免疫反應(yīng)的特異性和酶的高效催化作用原理有機(jī)地結(jié)合起來的一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法，可敏感地檢測體液中微量的特異性蛋白。
實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒，其搡作簡便，成本低，穩(wěn)定性好，適合于血液及尿液中白蛋白檢測，特別是尿液中極微量白蛋白檢測。為解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型的技術(shù)方案是一種用于ELISA法檢測人白蛋白的試劑盒，包括盒蓋、盒體和酶標(biāo)板，其中酶標(biāo)板又包括固相載體和包被層，固相載體為設(shè)置有多個(gè)微孔的微孔板，包被層附著在固相載體的微孔表面，包被層是由小鼠抗人白蛋白單克隆抗體和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的。優(yōu)選的，所述固相載體為96孔聚苯乙烯試劑板(PS)。優(yōu)選的，所述固相載體為48孔聚苯乙烯試劑板(PS)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明，使用本實(shí)用新型在檢測人血清及尿液標(biāo)本時(shí)其最低檢測限為0.15ng/ml,而傳統(tǒng)的全自動(dòng)生化BCP或BCG法則為lug/ml,極大地提高了靈敏度；同時(shí)其回收率為87±15%,重復(fù)性亦佳，因此特別適用于尿液微量白蛋白檢測，對(duì)于肝、腎損傷及代謝性疾病的發(fā)生、發(fā)展的監(jiān)控具有重要的臨床價(jià)值；另外，本實(shí)用新型不需投資大型自動(dòng)生化分析儀，操作方法簡單，經(jīng)濟(jì)、快捷、成本低。圖l為本實(shí)用新型試劑盒結(jié)構(gòu)示意圖2為本實(shí)用新型酶標(biāo)板結(jié)構(gòu)示意圖；圖3為本實(shí)用新型酶標(biāo)板剖視圖。盒蓋4,酶標(biāo)板5，盒體6,固相載體l,固相載體1上的微孔2，包被層3。具體實(shí)施方式如圖l所示，本實(shí)用新型試劑盒由盒蓋4，酶標(biāo)板5和盒體6組成。如圖2和圖3所示，酶標(biāo)板5由固相載體1和包被層3組成，固相載體l上有微孔2,包被層3附著在微孔2上。本實(shí)用新型的制備方法可以是釆用96孔聚苯乙烯試劑板(PS)作為固相載體，先將其置于紫外光下輻照2小時(shí)，使PS板活化。在試劑板微孔條上先包被一定濃度的小鼠抗人白蛋白單克隆抗體，4。C過夜，經(jīng)洗板及牛血清白蛋白封閉處理后制成包被好的酶標(biāo)板，以備標(biāo)本檢測。本實(shí)用新型的使用方法是依次以生物素化兔抗人白蛋白多克隆抗體，親和素化辣根過氧化物酶(HRP)作為檢測試劑A及B，以3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)及硫酸分別作為底物及終止液，完成用于ELISA法檢測人白蛋白的試劑盒的使用。實(shí)施例1:應(yīng)用人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒以及大型自動(dòng)生化分析儀分別定量檢測人定值(35.5ng/ml)尿液標(biāo)本。1、人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒方法操作①試劑盒平衡至室溫。②加樣分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品(Alb)或定值樣品lOOul,覆膜，37。C放置120分鐘。標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別為40ng/ml,20ng/ml，10ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml，1.25ng/ml，0.625ng/ml。③棄去液體，甩干，每孔加檢測試劑A工作液lOOul，覆膜，37'C放置60分鐘。④棄去孔內(nèi)液體，洗板3次，甩干，溫育60分鐘。每孔加檢測液試劑B工作液100ul，覆膜，37i:放置60分鐘。⑥棄去孔內(nèi)液體，洗板5次，甩干。⑦每孔加TMB溶液90ul，37。C避光顯色30分鐘。⑧依序每孔加終止溶液50ul，用酶聯(lián)儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD值)。2、大型自動(dòng)生化分析儀檢測同一上述尿液標(biāo)本按照儀器要求，上樣，運(yùn)行儀器，儀器自動(dòng)打出結(jié)果。3、結(jié)果見表1表l.不同實(shí)驗(yàn)方法檢測結(jié)果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>實(shí)施例2:應(yīng)用人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒以及大型自動(dòng)生化分析儀分別定量檢測人定值(4.86ug/ml)尿液標(biāo)本。方法及操作同實(shí)施例1,但用ELISA方法進(jìn)行檢測時(shí)需對(duì)標(biāo)本進(jìn)行200倍稀釋。結(jié)果見表2<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從表1及表2的數(shù)據(jù)可以看出應(yīng)用本實(shí)用新型ELISA法檢測尿中白蛋白含量，其準(zhǔn)確性高。當(dāng)標(biāo)本中白蛋白含量較高時(shí)與大型自動(dòng)生化分析儀比較沒有顯著性差異，但是當(dāng)標(biāo)本中白蛋白含量極微小時(shí)，生化儀法已經(jīng)無法測出，但是本實(shí)用新型所用ELISA法卻可以檢測出極微量的白蛋白，極大地提高了白蛋白檢測的靈敏度，對(duì)于提示相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展及用藥監(jiān)控有著重要的臨床意義。權(quán)利要求1.一種人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒，包括盒蓋、盒體和酶標(biāo)板，其中酶標(biāo)板又包括固相載體和包被層，其特征在于所述固相載體為設(shè)置有多個(gè)微孔的微孔板，所述包被層附著在所述固相載體的微孔表面，所述包被層是由小鼠抗人白蛋白單克隆抗體和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的。2.如權(quán)利要求1所述的人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒，其特征在于所述固相載體為96孔聚苯乙烯試劑板。3.如權(quán)利要求1所述的人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒，其特征在于所述固相載體為48孔聚苯乙烯試劑板。專利摘要本實(shí)用新型提供了一種人極微量白蛋白ELISA檢測試劑盒，包括盒蓋、盒體和酶標(biāo)板，其中酶標(biāo)板又包括固相載體和包被層，固相載體為設(shè)置有多個(gè)微孔的微孔板，包被層附著在固相載體的微孔表面，包被層是由小鼠抗人白蛋白單克隆抗體和牛血清白蛋白依次涂布在微孔上形成的。使用本實(shí)用新型在檢測人血清及尿液標(biāo)本時(shí)能極大地提高靈敏度；同時(shí)其回收率高，因而重復(fù)性亦佳；且成本低。文檔編號(hào)G01N33/577GK201408194SQ20092015204公開日2010年2月17日申請(qǐng)日期2009年4月23日優(yōu)先權(quán)日2009年4月23日發(fā)明者何峰容,李華淵申請(qǐng)人:武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司