本實(shí)用新型屬于體外檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片。
背景技術(shù)：
：急性冠脈綜合征(acutecoronarysyndrome，ACS)是20世紀(jì)80年代以來提出的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的診斷新概念。以冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性為基本病理、生理特點(diǎn)，以急性心肌缺血為共同特征的一組疾病群。ACS是人類最常見的心血管疾病。我國(guó)目前每年新增ACS患者約1百萬以上，ACS占總?cè)丝诩膊∷劳鲈虻?0％以上，ACS已經(jīng)成為危害人民健康的常見疾病。誤診或延誤診斷不但給患者精神和身體造成傷害，還給社會(huì)公共醫(yī)療資源造成極大的損失和浪費(fèi)。心肌缺血是引發(fā)ACS疾病群的病理機(jī)制。Morrow等指出：理想的心肌缺血標(biāo)志物應(yīng)該具備以下特點(diǎn)：(1)靈敏度及特異性均高，必須能檢測(cè)心肌缺血，但在健康個(gè)體、炎癥及其他器官損傷期間均不增加；(2)心肌缺血期間應(yīng)該能夠早期檢測(cè)，且與心肌受累的范圍成正比；(3)在循環(huán)中穩(wěn)定性好，可持續(xù)檢測(cè)以保持一個(gè)足夠的期間；(4)24小時(shí)內(nèi)血中濃度恢復(fù)到基礎(chǔ)水平，以便檢測(cè)復(fù)發(fā)性缺血等特性。研究發(fā)現(xiàn)，缺血修飾白蛋白(Ischemiamodifiedalbumin，IMA)是反映早期心肌缺血的標(biāo)志物。作為心肌早期缺血的特異指標(biāo)，IMA在臨床實(shí)踐中表現(xiàn)了良好指導(dǎo)作用，其檢測(cè)方法--白蛋白鈷結(jié)合試驗(yàn)(albumin-cobaltbinding,ACB)是美國(guó)FDA近20年來唯一批準(zhǔn)的用來評(píng)價(jià)心肌缺血損傷的試驗(yàn)。IMA的形成與組織缺氧有關(guān)。人血清白蛋白(humanserumalbumin,HSA)其氨基末端N-天冬氨酸-丙氨酸-組氨酸-賴氨酸為人類所特有,在正常生理情況下是鈷(Co++)、銅(Cu++)、鎳(Ni++)等過渡金屬離子的主要結(jié)合位點(diǎn)，但容易受生化因素,如pH等的影響而被降解，使HAS失去與Co++等離子的結(jié)合能力，形成IMA。Bar-Or等通過研究發(fā)現(xiàn)IMA在組織缺血后數(shù)分鐘后迅速升高，其變化在心肌其它指標(biāo)(CK-MB，Mb，cTnI)等增高之前6-24小時(shí)即顯著增高。作為目前臨床唯一指定的心肌缺血的生化指標(biāo)，IMA具有：(1)早期并靈敏反映心肌缺血狀況。IMA在心肌缺血發(fā)生后數(shù)分鐘即升高，明顯優(yōu)于其它生化指標(biāo)(一般4-6小時(shí)以后發(fā)生心肌壞死后方可升高)(2)顯著的陰性預(yù)測(cè)效果，有助于臨床工作者對(duì)急診患者進(jìn)行危險(xiǎn)分層，排除低?；颊逜CS可能。(3)IMA濃度可以作為心肌缺血的嚴(yán)重程度以及預(yù)后的判斷指標(biāo)。因此，IMA對(duì)于急性心肌缺血的早期診斷，ACS排除診斷及ACS危險(xiǎn)性分層評(píng)價(jià)，均具有重要意義。在臨床實(shí)踐中，對(duì)于疑似ACS患者迅速進(jìn)行IMA檢測(cè)，可以幫助臨床醫(yī)務(wù)工作者對(duì)患者做出及時(shí)、準(zhǔn)確的診斷并施行積極有效的治療方案。已經(jīng)報(bào)道檢測(cè)IMA的方法有比色法、液相色譜法，質(zhì)譜測(cè)定法以及核磁共振檢測(cè)法等。除比色法之外，其余均不適合臨床常規(guī)分析。目前，比色法檢測(cè)IMA試驗(yàn)已經(jīng)被美國(guó)FDA納入臨床常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，其常用的技術(shù)手段為：1)儀器檢測(cè)，即大型的生化分析儀器，如羅氏公司的日立，康巴斯公司的CobasMIRAPLUS等多種自動(dòng)分析儀上進(jìn)行檢測(cè)；2)比色法套裝試劑盒通過分光光度儀或酶標(biāo)儀檢測(cè)分析。無論是傳統(tǒng)的比色法或者目前先進(jìn)的自動(dòng)分析儀器檢測(cè)或者試劑盒檢測(cè)，全部需要在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣品分離/儀器分析檢測(cè)，均不能夠滿足臨床急診或基層醫(yī)療單位對(duì)心肌缺血及時(shí)準(zhǔn)確判斷的需求。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題在于針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片。該芯片是基于白蛋白鈷結(jié)合試驗(yàn)原理，采用微全分析系統(tǒng)技術(shù)，將樣品分離以及檢測(cè)分析過程整合到一個(gè)器件中，使得IMA檢測(cè)更便捷；該芯片檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、結(jié)果易于判斷，適合在基層醫(yī)院、急診等醫(yī)療單位，或住院患者床頭使用，使醫(yī)務(wù)工作者可以對(duì)患者危險(xiǎn)分層進(jìn)行迅速判斷，節(jié)約醫(yī)療資源和保健成本。為解決上述技術(shù)問題，本實(shí)用新型采用的技術(shù)方案是：一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，包括不吸水的底板和不吸水的蓋板，所述底板上依次設(shè)置有樣品池、混合池和檢測(cè)池，所述樣品池與混合池之間以及混合池與檢測(cè)池之間均設(shè)置有微管道，所述樣品池內(nèi)填充有樣品墊，所述樣品墊上包被有鈷標(biāo)準(zhǔn)品，所述檢測(cè)池內(nèi)填充有檢測(cè)墊，所述檢測(cè)墊上包被有鈷指示劑，所述蓋板固定設(shè)置于底板上方，所述蓋板上且位于樣品池的上方開設(shè)有加樣孔。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述蓋板上開設(shè)有排氣孔。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述排氣孔的數(shù)量為多個(gè)，多個(gè)所述排氣孔分別設(shè)置于樣品池上方、混合池上方和檢測(cè)池上方。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述底板上設(shè)置有與樣品池相連通的樣品池排氣槽，與混合池相連通的混合池排氣槽，和與檢測(cè)池相連通的檢測(cè)池排氣槽。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述排氣孔的數(shù)量為多個(gè)，多個(gè)所述排氣孔分別設(shè)置于樣品池排氣槽上方、混合池排氣槽上方和檢測(cè)池排氣槽上方。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述樣品池排氣槽位于樣品池上靠近混合池的一端。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述鈷標(biāo)準(zhǔn)品為氯化鈷或硫酸鈷，所述鈷指示劑為1-硝酸亞萘酸、二硫蘇糖醇或二硫赤蘚糖醇。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述鈷標(biāo)準(zhǔn)品的包被量為1μL～100μL，包被濃度為0.1mmol/L～15mmol/L。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述鈷指示劑的包被量為1μL～100μL，包被濃度為0.1mmol/L～15mmol/L。上述的一種快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，其特征在于，所述樣品墊和檢測(cè)墊的材質(zhì)均為纖維。本實(shí)用新型與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：1、本實(shí)用新型的芯片是基于白蛋白鈷結(jié)合試驗(yàn)原理，采用微全分析系統(tǒng)技術(shù)，將樣品分離以及檢測(cè)分析過程整合到一個(gè)器件中。2、本實(shí)用新型按照白蛋白鈷結(jié)合試驗(yàn)的原理，通過設(shè)置樣品池、混合池、檢測(cè)池和微管道系統(tǒng)，使得白蛋白鈷結(jié)合試驗(yàn)中各步驟反應(yīng)可以按順序依次發(fā)生。3、本實(shí)用新型芯片的混合池位于樣品池與檢測(cè)池之間，給檢測(cè)樣品與鈷離子結(jié)合提供更多緩沖混勻空間，使得通過微管道流入檢測(cè)池中樣品的理化性質(zhì)更均一，減少技術(shù)誤差。4、本實(shí)用新型優(yōu)選在蓋板上設(shè)置排氣孔，能夠使待檢測(cè)樣品和檢測(cè)試劑流動(dòng)順利，并調(diào)節(jié)各步驟反應(yīng)時(shí)間。5、本實(shí)用新型的芯片檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、結(jié)果易于判斷，適合在基層醫(yī)院、急診等醫(yī)療單位，或住院患者床頭使用，使醫(yī)務(wù)工作者可以對(duì)患者危險(xiǎn)分層進(jìn)行迅速判斷，節(jié)約醫(yī)療資源和保健成本。6、本實(shí)用新型的芯片使用方便，成本低廉，容易普及到基層醫(yī)療單位使用，滿足市場(chǎng)需求，能夠填補(bǔ)國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)空白。下面結(jié)合附圖和實(shí)施例，對(duì)本實(shí)用新型的技術(shù)方案作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。附圖說明圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例1的底板的結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本實(shí)用新型實(shí)施例1的底板去除樣品墊和檢測(cè)墊的結(jié)構(gòu)示意圖。圖3為本實(shí)用新型實(shí)施例1的蓋板的結(jié)構(gòu)示意圖。圖4為本實(shí)用新型實(shí)施例2的底板的結(jié)構(gòu)示意圖。圖5為本實(shí)用新型實(shí)施例2的底板去除樣品墊和檢測(cè)墊的結(jié)構(gòu)示意圖。圖6為本實(shí)用新型實(shí)施例2的蓋板的結(jié)構(gòu)示意圖。附圖標(biāo)記說明：1—底板；2—蓋板；3—樣品池；4—混合池；5—檢測(cè)池；6—樣品墊；7—檢測(cè)墊；8—加樣孔；9—微管道；10—排氣孔；11—樣品池排氣槽；12—混合池排氣槽；13—檢測(cè)池排氣槽。具體實(shí)施方式實(shí)施例1如圖1、圖2和圖3所示，本實(shí)施例的快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，包括不吸水的底板1和不吸水的蓋板2，所述底板1上依次設(shè)置有樣品池3、混合池4和檢測(cè)池5，所述樣品池3與混合池4之間以及混合池4與檢測(cè)池5之間均設(shè)置有微管道9，所述樣品池3內(nèi)填充有樣品墊6，所述樣品墊6上包被有鈷標(biāo)準(zhǔn)品，所述檢測(cè)池5內(nèi)填充有檢測(cè)墊7，所述檢測(cè)墊7上包被有鈷指示劑，所述蓋板2固定設(shè)置于底板1上方，所述蓋板2上且位于樣品池3的上方開設(shè)有加樣孔8。所述底板和蓋板可采用透明的玻璃、石英、塑料或硅膠等材質(zhì)，底片和蓋片可通過熱壓粘合或化學(xué)溶蝕等方式固定在一起。本實(shí)施例中，所述蓋板2上開設(shè)有排氣孔10。本實(shí)施例中，所述底板1上設(shè)置有與樣品池3相連通的樣品池排氣槽11，與混合池4相連通的混合池排氣槽12，和與檢測(cè)池5相連通的檢測(cè)池排氣槽13。本實(shí)施例中，所述排氣孔10的數(shù)量為多個(gè)(優(yōu)選3～7個(gè))，多個(gè)所述排氣孔10分別設(shè)置于樣品池排氣槽11上方、混合池排氣槽12上方和檢測(cè)池排氣槽13上方。本實(shí)施例中，所述樣品池排氣槽11位于樣品池3上靠近混合池4的一端。本實(shí)施例中，所述鈷標(biāo)準(zhǔn)品為氯化鈷或硫酸鈷，所述鈷指示劑為1-硝酸亞萘酸、二硫蘇糖醇或二硫赤蘚糖醇。本實(shí)施例中，所述鈷標(biāo)準(zhǔn)品的包被量為1μL～100μL，包被濃度為0.1mmol/L～15mmol/L。本實(shí)施例中，所述鈷指示劑的包被量為1μL～100μL，包被濃度為0.1mmol/L～15mmol/L。本實(shí)施例中，所述樣品墊6和檢測(cè)墊7的材質(zhì)均為纖維，可采用天然纖維或合成纖維。本實(shí)施例中，鈷標(biāo)準(zhǔn)品和鈷指示劑的優(yōu)選的包被量和包被濃度均見下表。表1實(shí)施例1的鈷標(biāo)準(zhǔn)品和鈷指示劑優(yōu)選的包被量和包被濃度實(shí)施例2如圖4、圖5和圖6所示，本實(shí)施例的快速檢測(cè)血液中缺血修飾白蛋白的芯片，包括不吸水的底板1和不吸水的蓋板2，所述底板1上依次設(shè)置有樣品池3、混合池4和檢測(cè)池5，所述樣品池3與混合池4之間以及混合池4與檢測(cè)池5之間均設(shè)置有微管道9，所述樣品池3內(nèi)填充有樣品墊6，所述樣品墊6上包被有鈷標(biāo)準(zhǔn)品，所述檢測(cè)池5內(nèi)填充有檢測(cè)墊7，所述檢測(cè)墊7上包被有鈷指示劑，所述蓋板2固定設(shè)置于底板1上方，所述蓋板2上且位于樣品池3的上方開設(shè)有加樣孔8。所述底板和蓋板可采用透明的玻璃、石英、塑料或硅膠等材質(zhì)，底片和蓋片可通過熱壓粘合或化學(xué)溶蝕等方式固定在一起。本實(shí)施例中，所述蓋板2上開設(shè)有排氣孔10。本實(shí)施例中，所述排氣孔10的數(shù)量為多個(gè)(優(yōu)選3～7個(gè))，多個(gè)所述排氣孔10分別設(shè)置于樣品池3上方、混合池4上方和檢測(cè)池5上方。本實(shí)施例中，所述鈷標(biāo)準(zhǔn)品為氯化鈷或硫酸鈷，所述鈷指示劑為1-硝酸亞萘酸、二硫蘇糖醇或二硫赤蘚糖醇。本實(shí)施例中，所述鈷標(biāo)準(zhǔn)品的包被量為1μL～100μL，包被濃度為0.1mmol/L～15mmol/L。本實(shí)施例中，所述鈷指示劑的包被量為1μL～100μL，包被濃度為0.1mmol/L～15mmol/L。本實(shí)施例中，所述樣品墊6和檢測(cè)墊7的材質(zhì)均為纖維，可采用天然纖維或合成纖維。本實(shí)施例中，鈷標(biāo)準(zhǔn)品和鈷指示劑的優(yōu)選的包被量和包被濃度均見下表。表2實(shí)施例2的鈷標(biāo)準(zhǔn)品和鈷指示劑優(yōu)選的包被量和包被濃度本實(shí)用新型的芯片的設(shè)計(jì)思路是不借助任何儀器的幫助獨(dú)立完成IMA的檢測(cè)，其原理是通過評(píng)估檢測(cè)樣品與鈷標(biāo)準(zhǔn)品中鈷離子結(jié)合能力的變化從而判斷檢測(cè)樣品中IMA是否升高。本實(shí)用新型芯片的使用方法如下：通過樣品孔8向樣品墊6中加入25μL無抗凝劑的血清樣品或40μL無抗凝劑的全血樣品，然后向樣品墊6中加入30μL檢測(cè)試劑，靜置5分鐘；再向樣品墊6中逐滴加入50μL檢測(cè)試劑，靜置5分鐘；最后于1分鐘內(nèi)向樣品墊6中逐滴加入100μL檢測(cè)試劑，靜置10分鐘后觀察檢測(cè)墊7的顏色變化，并與標(biāo)準(zhǔn)比色板比較，判斷測(cè)試樣品中的IMA濃度。所述檢測(cè)試劑為pH值7.8的Tris-HCl。標(biāo)準(zhǔn)比色板由以下方法制備：以本實(shí)用新型實(shí)施例1的芯片為例，分別制備含有不同鈷標(biāo)準(zhǔn)品和鈷指示劑的芯片，檢測(cè)鈷標(biāo)準(zhǔn)品中鈷的質(zhì)量與待檢測(cè)樣品的體積之間的關(guān)系，得出待檢測(cè)樣品的體積(單位為μL)與鈷標(biāo)準(zhǔn)品中鈷的質(zhì)量(單位為ng)的較佳比例為1:(1～5)；應(yīng)用40μL全血或25μL血清樣品進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)鈷指示劑的濃度為1μM～2000μM時(shí)，鈷標(biāo)準(zhǔn)品中鈷離子濃度為0～2000μM時(shí)，鈷指示劑顏色變化的強(qiáng)度與鈷離子的濃度成正比并且容易辨識(shí)；制備鈷離子濃度為0～1000μM的五個(gè)濃度梯度的鈷標(biāo)準(zhǔn)品，選擇等量不同濃度的鈷標(biāo)準(zhǔn)品包被芯片的樣品墊，按照鈷標(biāo)準(zhǔn)品濃度由小到大依次標(biāo)注為SD1、SD2、SD3、SD4和SD5，以25μL血清為待檢測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，所得的結(jié)果依次記錄為–、+、++、+++和++++，根據(jù)檢測(cè)墊顯示的顏色制備標(biāo)準(zhǔn)比色板。結(jié)果驗(yàn)證：1、采用180U/mL的IMA標(biāo)準(zhǔn)品為原料，生理鹽水為稀釋劑，制備濃度分別為180U/mL、145U/mL、120U/mL、90U/mL、60U/mL、45U/mL和0U/mL的IMA試樣。按照上述本實(shí)用新型芯片的使用方法對(duì)制備的不同濃度的IMA試樣進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與上述方法制備的標(biāo)準(zhǔn)比色板進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如下表。表3不同濃度IMA試樣的檢測(cè)結(jié)果2、采用180U/mL的IMA標(biāo)準(zhǔn)品(HSD)為原料，使用健康混合血清(HS)為稀釋劑對(duì)IMA標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行系列稀釋，按照上述本實(shí)用新型芯片的使用方法對(duì)健康混合血清稀釋的IMA試樣進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果與上述方法制備的標(biāo)準(zhǔn)比色板進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果如下表。表4不同稀釋比例的IMA試樣的檢測(cè)結(jié)果HSD:HS(體積比)1:02:11:11:50:1檢測(cè)結(jié)果+++++++++～++++++由以上兩個(gè)實(shí)驗(yàn)可以看出，本實(shí)用新型的芯片檢測(cè)的結(jié)果與待檢測(cè)樣品中的IMA濃度有關(guān)。對(duì)比檢測(cè)：選購(gòu)市售IMA檢測(cè)試劑盒(上海微銀生物技術(shù)有限公司)，按照說明書隨機(jī)檢測(cè)20例急診疑似ACS患者的IMA水平，同時(shí)采取末梢血按照上述本實(shí)用新型芯片的使用方法用本實(shí)用新型的芯片檢測(cè)患者IMA水平。結(jié)果如下：表5市售IMA檢測(cè)試劑盒與本實(shí)用新型芯片的檢測(cè)結(jié)果(市售IMA檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)商建議的cut-off值為67U/mL)由以上對(duì)比試驗(yàn)可以看出，本實(shí)用新型芯片可以檢測(cè)出不同樣品中IMA的濃度變化，檢測(cè)結(jié)果與市面已有的產(chǎn)品結(jié)果一致。影響因素：對(duì)不同影響因素對(duì)本實(shí)用新型芯片檢測(cè)結(jié)果的影響進(jìn)行分析。1、血清白蛋白濃度缺血修飾白蛋白的檢測(cè)結(jié)果直接受血清白蛋白濃度影響。根據(jù)已有的報(bào)道，在缺血修飾白蛋白的檢測(cè)過程中，當(dāng)血清白蛋白濃度在20g/L～55g/L時(shí)，血清白蛋白濃度對(duì)IMA檢測(cè)結(jié)果的影響可以忽略不計(jì)。本實(shí)用新型通過系列稀釋人血清白蛋白溶液，得到濃度為20g/L、30g/L、40g/L和50g/L的白蛋白溶液，使用上述本實(shí)用新型芯片的使用方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示白蛋白稀釋樣本檢測(cè)結(jié)果無差別。2、血紅蛋白/溶血樣品將IMA高值樣品(180U/mL)用生理鹽水稀釋成120U/mL、60U/mL樣品，并分別加入系列稀釋的血紅蛋白，使血紅蛋白濃度為0～160g/L，應(yīng)用本實(shí)用新型芯片檢測(cè)并觀察檢測(cè)結(jié)果。血紅蛋白濃度在0～160g/L濃度范圍內(nèi)對(duì)本實(shí)用新型芯片IMA檢測(cè)結(jié)果無影響。3、甘油三酯(TG)向IMA高值樣品(120U/mL)與低值樣品(60U/mL)中分別加入不同量的甘油三酯，使甘油三酯濃度在0～800mmol/L之間。應(yīng)用本實(shí)用新型芯片檢測(cè)并觀察檢測(cè)結(jié)果變化。甘油三酯濃度在≤800mmol/L時(shí)，對(duì)本實(shí)用新型芯片檢測(cè)結(jié)果無影響。穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：將本實(shí)用新型芯片干燥密封后，置于37℃恒溫箱14天，然后取出，平衡至室溫；同一生產(chǎn)批號(hào)的芯片干燥密封后，2℃～8℃保存，于試驗(yàn)前取出，平衡至室溫；然后比較不同保存方法的芯片的檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果顯示37℃儲(chǔ)存14天對(duì)本實(shí)用新型芯片檢測(cè)結(jié)果無影響。本實(shí)用新型的芯片不僅可采用目測(cè)比較檢測(cè)樣品中IMA濃度的高低，還可采用手機(jī)拍照傳送數(shù)據(jù)到數(shù)據(jù)中心進(jìn)行結(jié)果分析比較。另外，還可設(shè)計(jì)芯片讀取機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出IMA數(shù)值，使得本實(shí)用新型芯片的檢測(cè)結(jié)果具體數(shù)字化。以上所述，僅是本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例，并非對(duì)本實(shí)用新型做任何限制，凡是根據(jù)實(shí)用新型技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、變更以及等效結(jié)構(gòu)變化，均仍屬于本實(shí)用新型技術(shù)方案的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3