-GC-MS/MS法測定12種特征物質(zhì)
[0067] A、樣品制備：將成品卷煙A除去濾嘴，剝除接裝紙，按照《YC/T 31煙草及煙草制品 試樣的制備和水分測定烘箱法》進行水分測定；
[0068] 將成品卷煙A除去濾嘴，剝除接裝紙，使用分析天平稱取1.0 OOg煙絲（精確至 0.1 mg)于20mL頂空瓶中，加入ImL內(nèi)標(biāo)溶液，迅速壓緊瓶蓋，適當(dāng)振搖使煙絲均勻而松散的 平鋪于瓶底。
[0069] B、靜態(tài)頂空條件為：頂空瓶容量：20mL，樣品環(huán)容量：3mL，樣品平衡溫度：100°C， 樣品環(huán)溫度：120°C，傳輸線溫度：160°C，樣品平衡時間：45min，GC循環(huán)時間：70min，樣品瓶 加壓壓力：138KPa，加壓時間：0. 20min，充氣時間：0. 20min，樣品環(huán)平衡時間：0. 05min，進 樣時間：0.50min;可以根據(jù)所選擇的程序升溫條件，適當(dāng)調(diào)整GC循環(huán)時間；
[0070] C、在GC-MS/MS測定時，采用的色譜條件具體如下：
[0071] a)色譜柱：DB-5MS彈性石英毛細管色譜柱（30mX0. 25mmX0. 25μπι，美國Agilent 公司）；或其他等效色譜柱，如HP-5MS彈性石英毛細管色譜柱（30mX0. 25mmX0. 25 μπι)、 Rxi -5Sil MS(30mX0. 25mmX0. 25 μ m)等；
[0072] b)進樣 口溫度：250°C ;
[0073] c)程序升溫條件：初始溫度50°C，保持2min，以5°C /min的速率升溫至200°C，保 持lOmin，最后再以10°C /min的速率升溫至250°C，保持20min ;可以根據(jù)樣品的具體情況， 選擇其他合適的程序升溫條件；
[0074] d)載氣：He (純度彡99. 99% ) ;Q2碰撞氣：氬氣（純度99. 999% )。
[0075] e)電離方式：EI源；電離能70ev ;燈絲電流：80μΑ ;離子源溫度：170°C;傳輸線溫 度：250°C ;
[0076] f)掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM模式，CID氣體壓力為I. 5mtorr ;對每個離子的檢測 時間為150ms。
[0077] D、測定結(jié)果的計算：用HS-GC-MS/MS法測定一系列特征物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液，用特征物 質(zhì)與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值作為縱坐標(biāo)，特征物質(zhì)的濃度與內(nèi)標(biāo)濃度的比值作為橫坐標(biāo)，分別 建立12種特征物質(zhì)的校正曲線，曲線強制歸零。對校正數(shù)據(jù)進行線性回歸，線性相關(guān)系數(shù) R 2須大于0. 999。
[0078] 測定樣品，根據(jù)樣品中的峰面積計算12種特征物質(zhì)的含量，計算其中某一種特征 物質(zhì)的含量：
[0079]
[0080] 其中，(^表示檢測分析得到的特征物質(zhì)的含量，單位為ug/g ;
[0081 ] A1為試樣中特征物質(zhì)的峰面積，單位為U (積分單位）；
[0082] As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積，單位為U (積分單位）；
[0083] ms為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量，單位為Ug ;
[0084] m為稱取煙絲質(zhì)量，單位為g ;
[0085] w為待測煙絲水分含量，單位為％ ;
[0086] 1^為各特征物質(zhì)工作曲線斜率。
[0087] E、測定結(jié)果：
[0088] (1)某品牌煙絲樣品A按照所述的方法進行樣品制備，用HS-GC-MS/MS法測定其 12種特征物質(zhì)含量。結(jié)果見表4:
[0089] 表4 HS-GC-MS/MS法測定A品牌卷煙中12種特征物質(zhì)（ug/g)的結(jié)果
[0090] υ?Ν 丄 丄 λ j < t / zf y<
[0091] (2) A品牌卷煙果香香韻指數(shù)（Ga)的計算：
[0092] 基于上述測定結(jié)果，帶入下面的公式：
[0093] 卷煙果香香韻指數(shù)
[0094] 式中：(^為i種特征物質(zhì)的含量；t i種特征物質(zhì)的香氣閾值；0 i種特征物 質(zhì)的OAV值，即f ^ η為特征物質(zhì)的數(shù)目；為便于和感官評價結(jié)果比較，將各個特征物質(zhì)的 OAV值乘以一個系數(shù)，仁為各物質(zhì)的OAV修正系數(shù)。12種特征物質(zhì)的氣味活度值如表5所 不。
[0095] 表5 A品牌卷煙煙絲中12種特征物質(zhì)的氣味活度值（O1)
[0096]
[0097] A品牌卷煙果香香韻指數(shù)（Ga) = 3. 93。
[0098] 6&表明該品牌卷煙果香香氣風(fēng)格較強。
[0099] 實施例2 :
[0100] 重復(fù)實施例1的過程，選擇另一品牌卷煙Β，用HS-GC-MS/MS法測定其12種特征物 質(zhì)含量，測定值如表6所示，12種特征物質(zhì)的氣味活度值如表7所示。
[0101] 表6 HS-GC-MS/MS法測定B品牌卷煙中12種特征物質(zhì)（ug/g)的結(jié)果
[0102]
CN 105136947 A 說明書 8/9 頁
[0103] 表7 B品牌卷煙煙絲中12種特征物質(zhì)的氣味活度值（O1)
[0104]
[0106] B品牌卷煙果香香韻指數(shù)（Gb) = 3. 87
[0107] Gb表明該品牌卷煙卷煙果香香氣風(fēng)格較強，但比A品牌卷煙果香香氣風(fēng)格較弱。
[0108] 實施例3 :
[0109] 組織14名具有全國卷煙感官評吸資格證書的技術(shù)人員對A、B兩品牌卷煙樣品的 香氣風(fēng)格指標(biāo)（烤煙煙香、晾曬煙煙香、清香、果香、辛香、木香、青滋香、花香、藥草香等）進 行評價，得到果香指標(biāo)評判分值。結(jié)果如表8所示。
[0110] 表8 A和B兩個品牌卷煙的果香香韻指數(shù)和感官評價值
[0111] UiN 丄 丄 Λ J I < ?/ ?
[0112] 從表8可知，實施例1-2所得出的果香香韻指數(shù)與果香指標(biāo)感官評價分值沒有顯 著差異，證明了本發(fā)明所提出的表征和評價卷煙香氣中果香特征的方法的準(zhǔn)確可行性。而 且在實施過程中，可以避免常規(guī)感官評價方法的主觀性，能更客觀的對卷煙果香香氣風(fēng)格 進行表征和評判。
【主權(quán)項】
1. 一種準(zhǔn)確表征和評價卷煙香氣中果香特征的方法，包括以下步驟： (1) 以甲酸乙酯、乙酸戊酯、乙酸異丁酯、異丁酸乙酯、戊酸乙酯、T-十一內(nèi)酯（桃醛）、 二氫獼猴桃內(nèi)酯、異戊酸異戊酯、二氫大馬酮、香葉基丙酮、突厥烯酮和苯甲醛作為顯著影 響卷煙果香香氣風(fēng)格的12種特征物質(zhì)； (2) 特征物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的建立： ①標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別準(zhǔn)確稱取10.Omg的特征物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，置于同一個IOOmL容量瓶 中，用無水乙醇溶解并稀釋定容，配制成質(zhì)量濃度為100yg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，貯存在 4 °C冰箱中備用； ③內(nèi)標(biāo)物萘溶于無水乙醇，濃度為100yg/mL; ③ 分別移?、僦袃湟憨?lmL、0. 5mL、lmL、5mL、10mL，分別置于5個IOOmL容量瓶中， 分別加入ImL內(nèi)標(biāo)溶液，用無水乙醇稀釋得到濃度依次為0.Iyg/mL、0. 5yg/mL、Iyg/mL、 5 yg/mL、10yg/mL的化合物溶液，其中內(nèi)標(biāo)萘濃度為Iyg/mL，作為工作標(biāo)準(zhǔn)溶液備用； ④ 分別用12個特征物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)樣品及內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)值比值與其濃度比值進行線性回 歸，得到每一種特征物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，曲線強制歸零，線性相關(guān)系數(shù)R2須大于0. 999 ; (3) 待測樣品的前處理： a、 取待測樣品的煙絲，按照《YC/T31煙草及煙草制品試樣的制備和水分測定烘箱法》 進行水分測定； b、 稱取I.OOOg待測樣品的煙絲，置于20mL頂空瓶中，加入ImL內(nèi)標(biāo)溶液，迅速壓緊瓶 蓋，振搖使煙絲均勻而松散地平鋪于瓶底； (4) 用HS-GC-MS/MS法對待測樣品進行分析與測定，儀器分析條件如下： ① 頂空儀分析條件： 頂空瓶容量：20mL，樣品環(huán)容量：3mL，樣品平衡溫度：100°C，樣品環(huán)溫度：120°C，傳輸 線溫度：160°C，樣品平衡時間：45min，GC循環(huán)時間：70min，樣品瓶加壓壓力：138KPa，加壓 時間：0. 20min，充氣時間：0. 20min，樣品環(huán)平衡時間：0. 05min，進樣時間：0. 50min; ② 色譜分析條件： DB-5MS毛細管柱；進樣口溫度：250°C;恒流模式，柱流量lmL/min;分流比：20:1 ;升溫 程序：初始溫度50°C，保持2min，以5°C/min的速率升溫至200°C，保持lOmin，最后再以 10°C/min的速率升溫至250°C，保持20min; ③ 質(zhì)譜分析條件： EI電離模式，電離能70ev;燈絲電流：80yA;離子源溫度：170°C;傳輸線溫度：250°C;Q2碰撞氣：氬氣純度99. 999%，CID氣體壓力為I. 5mtorr;掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測MRM模式， 對每個離子的檢測時間為150ms; 有關(guān)定性離子對、定量離子對以及優(yōu)化后的碰撞能量（CE)值如表1所示： 表1 :(5)讀取待測煙絲樣品中各特征物質(zhì)的響應(yīng)值，用步驟（2)所建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線對待測 樣品中各特征物質(zhì)初始數(shù)據(jù)進行校正，即得到待測樣品中某一種特征物質(zhì)的含量C1:其中，C1表示待測樣品中某一種特征物質(zhì)的含量，單位為ug/g; A1為待測樣品中某一種特征物質(zhì)的峰面積，單位為U(積分單位）； As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積，單位為U(積分單位）； ms為加入內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的量，單位為ug;m為稱取煙絲質(zhì)量，單位為g; w為待測煙絲水分含量，單位為％ ; 1為各特征物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線斜率； (6) 卷煙果香香韻指數(shù)G的計算： 12種特征物質(zhì)對卷煙煙氣果香均有貢獻，通過氣味活度值OAV來評價某一特征物質(zhì)對 卷煙果香的貢獻程度，卷煙果香香韻指數(shù)模型是12種特征物質(zhì)氣味活度值的加和：式中：(^為i種特征物質(zhì)的含量；ti種特征物質(zhì)的香氣閾值；0 i種特征物質(zhì)的感官評價結(jié)果比較，將各個特征物質(zhì)的OAV值乘以一個系數(shù)，&為各個物質(zhì)的修正系 數(shù)，具體如表2所示； 表2(7) 卷煙果香香氣風(fēng)格特征評判： 按照表3的評分標(biāo)準(zhǔn)對卷煙香氣進行評判； 表3卷煙果香香氣風(fēng)格評判標(biāo)準(zhǔn)卷煙香氣中的果香特征與卷煙果香香韻指數(shù)G呈正相關(guān)關(guān)系，即卷煙果香香韻指數(shù)G值越高，則表明該卷煙的果香香氣風(fēng)格越顯著。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種準(zhǔn)確表征和評價卷煙香氣中果香特征的方法。通過HS-GC-MS/MS檢測方法來獲取致香物質(zhì)定量數(shù)據(jù)，并通過相應(yīng)致香物質(zhì)的閾值來計算并構(gòu)建得到卷煙果香香韻指數(shù)G。本發(fā)明操作簡便、不易受雜質(zhì)干擾、檢測結(jié)果準(zhǔn)確。GC-MS/MS的選擇性和靈敏度比GC-MS高，避免了GC-MS靈敏度低、分辨率不足、選擇性差、易產(chǎn)生假陽性結(jié)果、且不能給出足夠的定性/定量信息等問題。本發(fā)明從物質(zhì)基礎(chǔ)的角度對卷煙果香特征進行了相應(yīng)描述和表達，避免了感官評吸的主觀性，客觀綜合表征及評價卷煙產(chǎn)品的果香香氣風(fēng)格。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN105136947
【申請?zhí)枴緾N201510404096
【發(fā)明人】許 永, 張承明, 吳億勤, 李超, 蔣薇, 蔣茨清, 鄒楠, 秦云華, 楊光宇, 繆明明, 陳章玉, 張建華, 李勁竹, 魯媛
【申請人】云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年7月10日