自由組合多項(xiàng)聯(lián)檢過敏原特異性IgE抗體試劑盒及方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種自由組合多項(xiàng)聯(lián)檢過敏原特異性IgE抗體試劑盒及方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 2011~2012年世界變態(tài)反應(yīng)組織（WAO)關(guān)于變態(tài)反應(yīng)(也稱過敏反應(yīng)，Allergy) 的白皮書中指出："過敏性疾病的流行在發(fā)達(dá)國家和發(fā)展中國家全世界范圍內(nèi)正戲劇性地 上升。過敏性疾病包括過敏性哮喘、過敏性鼻炎、嚴(yán)重過敏反應(yīng)，藥物、食物及昆蟲過敏反 應(yīng)，濕疹、蕁麻疹(枯草熱)和血管性水腫。過去二十年尤其是兒童患過敏性疾病人數(shù)的增加 有暴發(fā)的趨勢。"僅食物引發(fā)的過敏性疾病的流行率就達(dá)3%~6%。過敏性疾病是患者吸入 或攝食入含有致敏成分的物質(zhì)(稱為過敏原或變應(yīng)原，Allergen)后觸發(fā)機(jī)體的B細(xì)胞產(chǎn)生 過量的免疫球蛋白E (Immunoglobulin E，IgE)，當(dāng)IgE抗體在體內(nèi)再次接觸過敏原時(shí)就與 過敏原交聯(lián)結(jié)合到肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞表面上的高親和受體Fc ε Rl上，導(dǎo)致Fc ε Rl 受體的聚集，使肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞活化。肥大細(xì)胞在活化過程中脫顆粒并釋放儲存 在細(xì)胞漿顆粒里的炎性介質(zhì)：組胺，與通過花生四烯酸途徑合成的白三烯、免疫反應(yīng)性前列 腺素和IL4、IL5等細(xì)胞因子及趨化因子，引發(fā)過敏反應(yīng)的疾病癥狀。過敏性疾病的發(fā)生， IgE抗體起關(guān)鍵作用，稱為IgE介導(dǎo)的過敏反應(yīng)（即GelI-Coombs I型超敏反應(yīng)，或稱IgE介 導(dǎo)的速發(fā)性超敏反應(yīng))。IgE介導(dǎo)的過敏性疾病的特征是患者體內(nèi)循環(huán)血液中的過敏原特異 性IgE( slgE)抗體濃度較正常狀況下高，且病癥越嚴(yán)重，SlgE抗體濃度越高。過敏性疾病的 臨床診斷在美國臨床醫(yī)師實(shí)用指南中指出，根據(jù)患者病史結(jié)合點(diǎn)刺或血液檢測過敏原特異 性IgE(slgE)抗體濃度，篩查致病過敏原。目前，檢測血液中過敏原特異性IgE(slgE)抗體 濃度，篩查致病過敏原的方法有酶免疫法（EIA)、免疫印跡法（ImmunobIotting Assay )、膠 體金側(cè)流層析法（LFA)、蛋白芯片法（Proteins microarray)等，發(fā)展趨勢并符合市場要求 的是：自動化、快速、準(zhǔn)確、樣品用量少，一次篩查幾十種過敏原。市場上產(chǎn)品不少，其中，瑞 典Pharmacia公司產(chǎn)品ImmunoCAP250系統(tǒng)是酶免疫法的代表，ImmunoCAP Rapid是膠體金 側(cè)流層析法的代表，ImmunoCAP ISAC是蛋白芯片法的代表，開創(chuàng)了過敏原分子診斷；而德 國 Mediwiss-analytic 公司的 AllergyScreen 則是免疫印跡法的代表（Immunoblot for analysing specific IgE in human serum)。由于個體差異造成不同患者對不同物質(zhì)過敏， 為滿足不同患者的需求，需要一種可以根據(jù)不同患者自由選擇過敏原檢測項(xiàng)、快速、準(zhǔn)確、 樣品用量少、一次篩查所需的幾十種過敏原特異性抗體IgE的試劑盒及方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種自由組合多項(xiàng)聯(lián)檢過敏原特異性IgE抗 體試劑盒及方法，是一種根據(jù)患者需要，可自由組合過敏原檢測項(xiàng)目的方法，能高效地篩査 或檢測人血清或血漿中的多個過敏原特異性IgE抗體的水平。
[0004] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的一個技術(shù)方案是：提供一種自由組合多項(xiàng)聯(lián) 檢過敏原特異性IgE抗體試劑盒，包括過敏原卡片、質(zhì)控卡片、抗人IgE抗體偶聯(lián)多聚酶和 與所述抗人IgE抗體偶聯(lián)多聚酶相配的底物顯色劑，所述過敏原卡片上固化有特異性過敏 原，所述質(zhì)控卡片上固化有人IgE。
[0005] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述抗人I gE抗體為羊抗人I gE抗體、兔抗人I gE抗 體或鼠抗人IgE抗體，所述多聚酶為多聚堿性磷酸酶或多聚辣根過氧化物酶。
[0006] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述過敏原卡片上包括固化有特異性過敏原的纖維 材料膜和識別碼標(biāo)簽，所述識別碼包括但不限于條形碼、二維碼或由黑白點(diǎn)組成的識別碼。
[0007] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述質(zhì)控卡片上包括固化有人IgE的纖維材料膜和 識別碼標(biāo)簽，所述識別碼包括但不限于條形碼、二維碼或由黑白點(diǎn)組成的識別碼。
[0008] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述試劑盒還包括結(jié)果記錄單，所述結(jié)果記錄單為 綠色、黑色或透明背景，所述結(jié)果記錄單上涂有不限于膠水或者貼有雙面膠的粘性材料。
[0009] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述過敏原卡片的制作過程為：先將過敏原透析，再 稀釋，劃于硝酸纖維素膜上，干燥得到，再將劃好后的膜條與識別碼標(biāo)簽組裝；所述質(zhì)控卡 片的制作過程為：將人IgE稀釋，劃于硝酸纖維素膜上，干燥得到，再將劃好后的膜條與識 別碼標(biāo)簽組裝。
[0010] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，所述干燥時(shí)的溫度為15-35 °C、濕度為10%~40%，干 燥時(shí)間為12-16小時(shí)，采用BIODOT AD1500芯片點(diǎn)樣儀進(jìn)行劃膜，劃膜的參數(shù)為：噴量為 lul/ml，劃線長度為30cm。
[0011] 提供一種自由組合多項(xiàng)聯(lián)檢過敏原特異性IgE抗體的檢測方法，包括步驟為：（1) 樣品緩沖液加入置有過敏原卡片和質(zhì)控卡片的孵育槽中，再將所述樣品緩沖液吸掉；（2) 稀釋后的血清樣品加入孵育槽中孵育后吸掉，再加入清洗緩沖液進(jìn)行洗滌；（3)吸去所述 孵育槽中液體，加入酶結(jié)合物孵育；（4)再加入稀釋后的血清樣品孵育后吸掉；（5)加入底 物液孵育并吸掉后再加入水洗滌；（6)取出過敏原卡片和質(zhì)控卡片進(jìn)行檢測。
[0012] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，步驟（1)中加入所述樣品緩沖液晃動5分鐘后吸掉； 步驟（2)中加入血清樣品晃動孵育30分鐘后吸掉；步驟（2)中加入所述清洗緩沖液晃動5 分鐘后吸掉，重復(fù)洗滌2次；步驟（3)中加入稀釋后的酶結(jié)合物晃動孵育30分鐘；步驟（4) 中加入血清樣品晃動孵育30分鐘后吸掉；步驟（5)中加入底物液晃動孵育10分鐘；步驟 (5)中所述水為蒸餾水或純化水，加入水晃動1分鐘，重復(fù)洗滌2次；步驟（6)中將所述過敏 原卡片和質(zhì)控卡片貼在結(jié)果記錄單上并干燥，用Reader讀值并記錄測試結(jié)果。
[0013] 在本發(fā)明一個較佳實(shí)施例中，在所述過敏原卡片和質(zhì)控卡片置于孵育槽的過程中 要防止所述過敏原卡片和質(zhì)控卡片干燥；用夾具夾取所述過敏原卡片和質(zhì)控卡片；在檢測 過程中防止交叉污染。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的自由組合多項(xiàng)聯(lián)檢過敏原特異性IgE抗體試劑盒 及方法，能夠根據(jù)不同過敏患者自由選擇組裝不同的過敏原膜條，具有快速、準(zhǔn)確、樣品用 量少的優(yōu)點(diǎn)，一次能篩查所需的幾十種過敏原特異性IgE抗體，減少患者費(fèi)用。
【附圖說明】
[0015] 為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例描述中所需要使 用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于 本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它 的附圖，其中： 圖1是本發(fā)明的過敏原卡片一較佳實(shí)施例的結(jié)構(gòu)示意圖； 圖2是本發(fā)明實(shí)施例二中檢測方法的結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面將對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施 例僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通 技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范 圍。
[0017] 實(shí)施例一： 提供一種自由組合多項(xiàng)聯(lián)檢過敏原特異性IgE抗體試劑盒，包括過敏原卡片、質(zhì)控卡 片、結(jié)果記錄單、抗人IgE抗體偶聯(lián)多聚酶和與所述抗人IgE抗體偶聯(lián)多聚酶相配的底物顯 色劑。請參閱圖1，所述過敏原卡片上包括固化有特異性過敏原的纖維材料膜和識別碼標(biāo) 簽，所述識別碼包括但不限于條形碼、二維碼或由黑白點(diǎn)組成的識別碼，在本實(shí)施例中所述 識別碼為連續(xù)10個直徑為〇. 5_的黑白實(shí)心圓。所述質(zhì)控卡片上包括固化有100~1000倍 稀釋的商業(yè)化的人IgE的纖維材料膜和識別碼標(biāo)簽，所述識別碼包括但不限于條形碼、二 維碼或由黑白點(diǎn)組成的識別碼。所述結(jié)果記錄單可以選用綠色背景，且涂有一層膠水。所 述抗人IgE抗體為羊抗人IgE抗體、兔抗人IgE抗體或鼠抗人IgE抗體，所述多聚酶為多聚 堿性磷酸酶或多聚辣根過氧化物酶。所述底物顯色劑可市購獲得，也可自行配制。上述為 試劑盒的主要成分，不包含