內(nèi)分泌干擾物的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于萃取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種內(nèi)分泌干擾物的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 近半個(gè)世紀(jì)以來(lái)，關(guān)于人類(lèi)生殖健康質(zhì)量下降和野生動(dòng)物繁殖異常的報(bào)道逐年增 加：男性精子數(shù)量下降和活力降低，女性乳腺癌發(fā)病率增高；生活在英國(guó)污水處理廠下游 的野生蟑螂雌雄同體率增加；美國(guó)佛羅里達(dá)州的鱷魚(yú)性腺發(fā)育和性激素水平異常；受污染 河流中雄魚(yú)雌性化、雌雄同體現(xiàn)象增加等等。人們逐漸意識(shí)到環(huán)境中存在一些能模擬激素 效應(yīng)，調(diào)節(jié)或干擾生物內(nèi)分泌系統(tǒng)功能的化合物，即內(nèi)分泌干擾物（EDCs)，其定義為"能干 擾體內(nèi)對(duì)維持生物穩(wěn)態(tài)、繁殖、和/或行為起作用的自然激素的生成、釋放、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝、結(jié) 合、作用和消除的一種外源因子"。
[0003] 環(huán)境中通常是各種化合物以低濃度共存，這些具有作用終點(diǎn)效應(yīng)相似或拮抗的化 合物會(huì)對(duì)所在水體水生生物產(chǎn)生復(fù)雜的混合激素效應(yīng)。因此為了深入了解以及準(zhǔn)確評(píng)價(jià)環(huán) 境介質(zhì)和所涉及的水產(chǎn)品中EDCs的污染狀況，需要建立準(zhǔn)確、可靠的分析方法。
[0004] 目前水體中EDCs的檢測(cè)方法一般采用比較成熟的方法如固相萃?。⊿PE)、固相微 萃取（SPME)等進(jìn)行檢測(cè)。但是EDCs的固體樣品因其成分更加復(fù)雜，不僅需要較高的萃取 效率，也需要更有效地去除雜質(zhì)，因此該SPE、SPME等方法萃取效率低，除雜質(zhì)功能差，導(dǎo)致 萃取效果比較差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種內(nèi)分泌干擾物的提取方 法，旨在解決現(xiàn)有萃取內(nèi)分泌干擾物方法存在的萃取效率低，除雜質(zhì)功能差，導(dǎo)致萃取效果 比較差等技術(shù)問(wèn)題。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案如下：
[0007] -種內(nèi)分泌干擾物的提取方法，包括將待測(cè)樣品先經(jīng)亞臨界水萃取處理，然后經(jīng) 分散液液微萃取處理的步驟。
[0008] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明內(nèi)分泌干擾物的提取方法將亞臨界水萃取與分散液液微 萃取技術(shù)進(jìn)行聯(lián)用，使得本發(fā)明內(nèi)分泌干擾物的提取方法對(duì)內(nèi)分泌干擾物萃取效率高，且 能有效去除雜質(zhì)影響，從而實(shí)現(xiàn)能對(duì)痕量?jī)?nèi)分泌干擾物進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的定性定量分析。
【具體實(shí)施方式】
[0009] 為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明 進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于 限定本發(fā)明。
[0010] 本發(fā)明實(shí)例提供了一種能有效除去雜質(zhì)，且萃取效率高的內(nèi)分泌干擾物的提取方 法。該內(nèi)分泌干擾物的提取方法是將亞臨界水萃取和分散液液微萃取相結(jié)合的提取方法， 具體地，該內(nèi)分泌干擾物的提取方法包括將待測(cè)樣品先經(jīng)亞臨界水萃取處理，然后經(jīng)分散 液液微萃取處理的步驟。
[0011] 由于亞臨界水萃取可以提供高溫高壓條件，且采用亞臨界水（高溫高壓下的水， 介于水相與氣相之間）作為萃取溶劑。又由于內(nèi)分泌干擾物（EDCs)屬于半揮發(fā)性有機(jī)污 染物，極性相對(duì)較大，較易溶于水。因此，利用亞臨界水萃取的優(yōu)勢(shì)，采用亞臨界水作為萃取 溶劑，可以提高萃取溶劑的選擇性，減少使用傳統(tǒng)有機(jī)溶劑萃取時(shí)同時(shí)萃取出的干擾物質(zhì)， 以提高后續(xù)對(duì)EDCs分析方法的靈敏度。
[0012] 再利用分散液液微萃取（DLLME)傳質(zhì)界面面積大、樣品基質(zhì)效應(yīng)弱和簡(jiǎn)單、快速、 選擇性高等優(yōu)點(diǎn)，將經(jīng)亞臨界水萃取后的萃出液采用DLLME處理，對(duì)目標(biāo)化合物EDCs進(jìn)一 步純化，以實(shí)現(xiàn)提高EDCs富集倍數(shù)和檢測(cè)靈敏度。
[0013] 為了將EDCs有效萃取，在一實(shí)施例中，該亞臨界水萃取處理方法如下：
[0014] 將稱(chēng)取的待測(cè)樣品與硅藻土進(jìn)行混料處理后于含有修飾劑的水中進(jìn)行亞臨界水 萃取處理。
[0015] 其中，亞臨界水萃取處理的溫度控制在100-120°C之間。在一具體實(shí)施例中，該溫 度控制為l〇〇°C。該萃取的溫度能更有利于EDCs溶解于水中被萃取。
[0016] 在一實(shí)施例中，該亞臨界水萃取處理的壓強(qiáng)控制在1500±100psi(即壓強(qiáng)控制在 1400/145MPa-1600/145MPa)。對(duì)壓強(qiáng)的控制也是為了提高利于EDCs溶解于水中被萃取。 為了進(jìn)一步提高EDCs的萃取率，在進(jìn)一步實(shí)施例中，該亞臨界水萃取處理的壓強(qiáng)控制在 1500±100psi(即壓強(qiáng)控制在 1400/145MPa-1600/145MPa)，溫度控制在 100-120°C。
[0017] 在一實(shí)施例中，該亞臨界水萃取所用的所述萃取溶劑為含10-20%修飾劑的水，其 pH控制為10-12。在一具體實(shí)施例中，該萃取溶劑為含20%修飾劑的水，其pH控制為12。 修飾劑能有效降低亞臨界水的極性，更容易萃取偏非極性的有機(jī)物。
[0018] 在一具體實(shí)施例中，該萃取溶劑為含20%修飾劑的水，其pH控制為12,且亞臨界 水萃取處理的溫度l〇〇°C。在另一具體實(shí)施例中，所述修飾劑選用丙酮、乙醇、乙腈、甲醇中 的至少一種。
[0019] 上述亞臨界水萃取中的硅藻土的存在，一方面能有效起到填充劑的作用，由于其 填充作用有效填充萃取池剩余空間，減少最終的萃取溶劑用量，以便后續(xù)處理；另一方面能 增大萃取的接觸面積，有效將待測(cè)樣品分散在亞臨界水萃取萃取溶劑中，從而提高待測(cè)樣 品的萃取率和萃取效率。在一實(shí)施例中，該待測(cè)樣品與硅藻土的質(zhì)量比為5:2。當(dāng)然，該待 測(cè)樣品與硅藻土的質(zhì)量比僅僅是舉例，兩者還可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行任意調(diào)整，只要使得 待測(cè)樣品與硅藻土均沒(méi)入萃取溶劑中即可。
[0020] 在進(jìn)一步實(shí)施例中，在所述亞臨界水萃取處理過(guò)程中，在含有修飾劑的水還添加 有純化劑，該純化劑能有效除去待測(cè)樣品中的雜質(zhì)，以進(jìn)一步降低亞臨界水萃取處理后溶 劑中待測(cè)樣品雜質(zhì)的含量。其中，在一實(shí)施例中，該純化劑可以是選用中性氧化鋁、酸性氧 化鋁、活性炭中的至少一種。另外，該純化劑的加入量可以與硅藻土的用量相同或不同，可 以根據(jù)具體待測(cè)樣品進(jìn)行控制其加入量，當(dāng)然，不管純化劑加入的量如何控制，必須沒(méi)入在 萃取溶劑液面之下。
[0021] 另外，上述各實(shí)施例中，該待測(cè)樣品與硅藻土或進(jìn)一步與純化劑之間進(jìn)行的混料 處理可以是本領(lǐng)域常規(guī)的混料方式進(jìn)行處理，只要是使得兩者混合均勻即可。該待測(cè)樣品 如果是固體，在萃取之前，應(yīng)該先對(duì)固體進(jìn)行粉粹處理，以降低其顆粒粒徑。
[0022] 在上述各實(shí)施例的基礎(chǔ)上，在將所述待測(cè)樣品進(jìn)行亞臨界水萃取處理之前，還包 括向所述待測(cè)樣品中加入同位素指示物與所述待測(cè)樣品進(jìn)行混料處理的步驟；加同位素指 示物是對(duì)為了指示整個(gè)萃取過(guò)程中的損失，加入的量沒(méi)有具體要求，根據(jù)儀器的檢測(cè)范圍 選擇即可。在一些具體實(shí)施例中，該同位素指示物選用氘標(biāo)記的雌酮（E1)、炔雌醇（EE2)、 壬基酚（NP)中的至少一種。
[0023] 上述DLLME處理是根據(jù)相似相溶原理，將經(jīng)亞臨界水萃取處理后的萃出液中含有 EDCs從水中萃取出來(lái)，使得EDCs溶入萃取溶劑中，實(shí)現(xiàn)對(duì)EDCs進(jìn)一步的純化，實(shí)現(xiàn)提高 EDCs富集倍數(shù)和檢測(cè)靈敏度。因此，
[0024] 在一實(shí)施例中，所述DLLME處理方法如下：
[0025] 將經(jīng)所述亞臨界水萃取處理的萃出液與萃取溶劑混合處理，靜置，收集萃取溶劑。
[0026] 其中，為了 DLLME萃取EDCs效果更好，在一實(shí)施例中，根據(jù)EDCs的特性，所述萃取 溶劑選用氯苯、氯仿、四氯化碳中的任一種。
[0027] 在另一實(shí)施例中，將亞臨界水萃取處理的萃出液與所述萃取溶劑混合處理是將兩 者混合物于l〇〇〇-2500rpm渦旋5-30秒后6000-7000rpm離心5-10min。在一具體實(shí)施例 中，該兩者混合物于2000rpm的速率潤(rùn)旋處理30秒后7000rpm離心5min。通過(guò)該混合處 理，使得萃取溶劑與亞臨界水萃取處理的萃出液充分混合，