低；提取時(shí)間為30min和 60min時(shí)，測得的檸檬烯的含量差異不大，而故將提取時(shí)間定為30min。
[0126] 2. 4. 5提取溶劑用量
[0127] 取同一批次無糖型氣滯胃痛顆粒2. 5g六份（批號：20140404)，精密稱定，置于 錐形瓶中，分別加甲醇10mL、25mL、50mL、100mL，稱重，分別超聲處理30min，放冷，再稱定重 量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，結(jié)果見表5。
[0128] 表5溶劑用量的影響
[0129]
[0131] 結(jié)果表明，溶劑用量為50mL時(shí)測得的檸檬烯的含量最大，故將提取溶劑用量定為 50mL〇
[0132] 綜上所述，無糖型氣滯胃痛顆粒中檸檬烯的最佳提取工藝為取無糖型氣滯胃痛顆 粒2. 5g，精密稱定，置于錐形瓶中，加甲醇50mL，稱重，超聲30min，放冷，再次稱重，用甲醇 補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。
[0133] 2. 5方法學(xué)驗(yàn)證
[0134] 2. 5.1 專屬性
[0135] 采用高效液相色譜儀分別檢測甲醇、對照品溶液及供試品溶液，進(jìn)樣量8yL，結(jié)果 分別見圖5、6和7。
[0136] 2. 5. 2標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0137] 精密吸取濃度為0. 1yL/mL的檸檬烯對照品溶液2、4、8、10、12、20yL，分別注入 液相色譜儀，測定各自峰面積，以對照品進(jìn)樣量X為橫坐標(biāo)，峰面積值Y為縱坐標(biāo)，求得回歸 方程：Y= 634439577. 9221X+2396. 2273,R= 0? 9998。
[0138] 表6檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)曲線
[0140] 結(jié)果見表6和圖8。這表明，檸檬烯在0.0002-0. 0020yL范圍內(nèi)與峰面積呈良好 的線性關(guān)系。
[0141] 2. 5. 3 精密度
[0142] 取同一對照品溶液8yL，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算各色譜峰峰面積的RSD(相對標(biāo)準(zhǔn)偏 差）（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差=標(biāo)準(zhǔn)偏差/計(jì)算結(jié)果的算術(shù)平均值X100% )，結(jié)果見表7。
[0143] 表7精密度試驗(yàn)結(jié)果
[0145] 由上表可知，色譜峰峰面積RSD值為0.83%，小于3%。這表明，本發(fā)明所構(gòu)建的 采用化學(xué)鍵合相色譜法檢測檸檬烯的含量的方法精密度良好。
[0146] 2. 5. 4 穩(wěn)定性
[0147] 取同一供試品溶液8yL(批號：20141111)，于0、2、4、6、8、10h測定檸檬烯含量，計(jì) 算含量RSD值，結(jié)果見表8。
[0148] 表8穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
[0150] 由上表可知，檸檬烯含量RSD值為1. 59%，小于3%。這表明，本發(fā)明通過化學(xué)鍵 合相色譜法檢測檸檬烯含量的方法穩(wěn)定性良好。
[0151] 2. 5. 5 重復(fù)性
[0152] 取同一批次無糖型氣滯胃痛顆粒六份（批號：20141111)，制成供試品溶液，檢測 其中檸檬烯的含量，計(jì)算含量RSD值，結(jié)果見表9。
[0153] 表9重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
[0155] 由上表可知，梓檬稀含量RSD值為0. 56%，小于3%。這表明，本發(fā)明通過化學(xué)鍵 合相色譜法檢測檸檬烯含量的方法重復(fù)性良好。
[0156] 2. 5. 6 回收率
[0157] 取同一批次無糖型氣滯胃痛顆粒六份（批號：20141111)，加2.5yL/mL檸檬烯對 照品溶液lmL，制成供試品溶液，測定樣品中檸檬烯的含量，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為 97. 13%，RSD為 0? 64%，見表 10。
[0158] 表10回收率試驗(yàn)結(jié)果
[0159]
[0160] 2. 6樣品含量測定
[0161] 取10批次無糖型氣滯胃痛顆粒2. 5g，精密稱定，制成供試品溶液，檢測檸檬烯含 量，檢測結(jié)果見表11。
[0162] 表11 10批次無糖型氣滯胃痛顆粒檸檬烯的含量測定結(jié)果
[0164] 2. 7樣品含量限度
[0165] 根據(jù)以上10批樣品中檸檬烯的含量測定結(jié)果，確定含量限度為：每lg無糖型氣滯 胃痛顆粒含檸檬烯量應(yīng)不低于0. 45yL。
[0166] 3對比實(shí)驗(yàn)
[0167] 分別按照對比例1和實(shí)施例2進(jìn)行對比實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表12所示。
[0168] 表12對比例1和實(shí)施例2的分離效果的比較
[0170] 由表12可知，采用對比例1的方法，分離度小于1. 5,色譜峰對稱性較差，且理論塔 板數(shù)較小，對氣滯胃痛顆粒中檸檬烯的分離效果較差，從而導(dǎo)致不能進(jìn)行含量測定。因此， 對比例1的方法并不適用于氣滯胃痛顆粒中檸檬烯的含量測定。
[0171] 綜上所述，本發(fā)明一種無糖型氣滯胃痛顆粒中揮發(fā)性指標(biāo)成分檸檬烯的質(zhì)量控制 方法，通過單因素考察，得到了無糖型氣滯胃痛顆粒中檸檬烯的最佳提取工藝，經(jīng)方法學(xué)驗(yàn) 證了此方法的科學(xué)性及合理性，并對10批次的無糖型氣滯胃痛顆粒中的檸檬烯含量進(jìn)行 了檢測，得到了其含量限度，完善了無糖型氣滯胃痛顆粒的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。該檢測方法快 速、全面、針對性強(qiáng)，聯(lián)合現(xiàn)有的TLC鑒別和HPLC法測定芍藥苷的含量，有利于對該藥物的 質(zhì)量進(jìn)行有效控制，有助于提高該藥物使用的安全性和穩(wěn)定性。
[0172] 實(shí)施例1無糖顆粒劑的制備
[0173] 【處方】柴胡36重量份、甘草20重量份、香附40重量份、延胡索40重量份、白芍48 重量份、枳殼40重量份。
[0174] 【制備方法】(1)取選定重量份的枳殼和香附，提取，得提取液A和揮發(fā)油A;所述揮 發(fā)油A中加入0 -環(huán)糊精和水，包合0. 5~4小時(shí)，得包合物A;
[0175] (2)取選定重量份的柴胡、甘草、延胡索和白芍，加水提取2次，第一次提取0.5~ 4小時(shí)，第二次提取0. 5~3小時(shí)，合并2次提取所得的提取液，得提取液B;
[0176] (3)合并上述提取液A和提取液B，濃縮至相對密度為1. 10~1. 30 (50°C測）的稠 膏，加入包合物A，混勻，加入常規(guī)輔料、按照常規(guī)工藝制成無糖型顆粒劑。
[0177] 實(shí)施例2化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量
[0178] 本實(shí)施例化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量包括以下步驟：
[0179] (1)取待測藥物制劑2. 5g，加100%甲醇50mL，稱重，超聲30min，放冷，再次稱重， 用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取濾液，作為供試品溶液；
[0180] (2)取檸檬烯對照品適量，加入100%甲醇，制成每lmL甲醇含檸檬烯0. 1yL的溶 液，作為對照品溶液；
[0181] (3)色譜條件：以 250X4. 6mm，5ym的WelchUltimateLP-C18 為色譜柱，以三個(gè) 硅羥基鍵與一個(gè)鍵合相C18鍵合的十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以乙腈：水=70:30為 流動(dòng)相，時(shí)間：30min，柱溫：10-30°C，檢測波長：210nm，流速為1.OmL/min;
[0182] (4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液8yL，注入高效液相色譜儀，測定。
[0183] 實(shí)施例3化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量
[0184] 本實(shí)施例化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量包括以下步驟：
[0185] (1)取待測藥物制劑2.Og，加30%甲醇100mL，稱重，超聲或加熱回流60min，放冷， 再次稱重，用30%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取濾液，作為供試品溶液；
[0186] (2)取檸檬烯對照品適量，加入30%甲醇，制成每lmL甲醇含檸檬烯0. 05yL的溶 液，作為對照品溶液；
[0187] (3)色譜條件：以150X4. 6mm，5ym的AngilentTC-C18為色譜柱，以乙腈：水 體積比為60 :40的混合溶液為流動(dòng)相，時(shí)間：20min，柱溫：10°C，檢測波長：210nm，流速為 0. 5mL/min；
[0188] (4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液6yL，注入高效液相色譜儀，測定。
[0189] 實(shí)施例4化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量
[0190] 本實(shí)施例化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量包括以下步驟：
[0191] (1)取待測藥物制劑3. 0g，加100%甲醇10mL，稱重，超聲或加熱回流lOmin，放冷， 再次稱重，用100%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，取濾液，作為供試品溶液；
[0192] (2)取檸檬烯對照品適量，加入100%甲醇，制成每lmL甲醇含檸檬烯0. 15yL的 溶液，作為對照品溶液；
[0193] (3)色譜條件：以250X4. 6mm，5ym的AngilentTC-C18為色譜柱，以乙腈：水 體積比為80 :20的混合溶液為流動(dòng)相，時(shí)間：40min，柱溫：30°C，檢測波長：210nm，流速為 1. 5mL/min；
[0194] (4)分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液10yL，注入高效液相色譜儀，測定。
[0195] 實(shí)施例5化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量
[0196] 本實(shí)施例化學(xué)鍵合相色譜法測定檸檬烯的含量包括以下步驟：
[0197]