應激誘導的磷酸化蛋白1在制備篩查肝細胞癌產(chǎn)品中的應用
【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)學領域中應激誘導的磷酸化蛋白1在制備篩查肝細胞癌產(chǎn)品 中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝細胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC)是世界范圍內(nèi)的惡性腫瘤之一，有較 高的發(fā)病率和死亡率，每年約650000人死于HCC，且其發(fā)病率有增高的趨勢。該病多發(fā)于東 南亞和非洲，其中約有50%以上發(fā)生于中國，位居我國癌癥死亡率的第二位。肝細胞癌的 發(fā)生情況是一個多因素，多階段，復雜的過程，乙型肝炎病毒（h印atitis B virus，HBV)慢 性感染是重要的高危因素。腫瘤抑制、肝臟切除和移植是現(xiàn)階段肝癌的主要治療方法，但約 60%以上的患者會術(shù)后復發(fā)。因此，在高危人群特別是肝硬化（liver cirrhosis, LC)患者 中篩查早期肝癌患者，及時采取治療措施，可提高繼發(fā)于乙型肝炎病毒感染的肝細胞癌患 者的生存率。
[0003] 但HCC早期診斷較難，病情進展快，預后水平低。目前肝炎、肝硬化等HCC高 危人群的篩查和HCC臨床診斷與病情監(jiān)測等仍主要依賴于B超等影像學檢查聯(lián)合血 清標志物甲胎蛋白（alpha-f etoprotein，AFP)水平的檢測。而AFP作為目前HCC診 斷和病情監(jiān)測一個最主要的生物標志物，其靈敏度和特異度仍不理想。Des-ga_a carboxy-prothrombin (DCP)和 lectin-bound AFP (AFP-L3)也被認為是很有潛力的 HCC 診 斷標志物，有研究結(jié)果表明，AFP對于HCC早期診斷的效果要優(yōu)于DCP和AFP-L3 (Marrero, J. A. et al.Alpha-fetoprotein, des-gamma carboxyprothrombin, and lectin-bound alpha-fetoprotein in early hepatocellular carcinoma. Gastroenterology. 2009)〇
[0004] 所以，尋找敏感的肝細胞癌生物標記物，對于早期發(fā)現(xiàn)和診斷肝細胞癌非常重要。 針對肝臟細胞癌發(fā)生過程中具有標志性變化的血清蛋白建立一種檢測方法，有助于腫瘤的 臨床診斷。
[0005] 應激誘導的憐酸化蛋白 I (Stress-induced-phosphoproteinl, STIP1)起到輔陪 伴分子的作用，能夠可逆地連接分子伴侶Hsp70和Hsp90。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何篩查或輔助診斷肝細胞癌。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了下述用途：
[0008] I、檢測應激誘導的磷酸化蛋白1含量的物質(zhì)在制備篩查或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn) 品中的應用；
[0009] II、檢測應激誘導的磷酸化蛋白1含量的物質(zhì)和檢測甲胎蛋白含量的物質(zhì)在制備 篩查或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn)品中的應用；
[0010] III、以應激誘導的磷酸化蛋白1作為肝細胞癌腫瘤標志物的篩查或輔助診斷肝細 胞癌方法中所用的物質(zhì)在制備篩查或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn)品中的應用；
[0011] IV、C和D在制備篩查或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn)品中的應用；所述C為以應激誘導的 磷酸化蛋白1作為肝細胞癌腫瘤標志物的篩查或輔助診斷肝細胞癌方法中所用的物質(zhì)；所 述D為以甲胎蛋白作為肝細胞癌腫瘤標志物的篩查或輔助診斷肝細胞癌方法中所用的物 質(zhì)；
[0012] V、Al)-A4)中任一種制備應激誘導的磷酸化蛋白1抗體所需的生物材料在制備 篩查或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn)品中的應用：
[0013] Al)應激誘導的磷酸化蛋白1單克隆抗體的免疫原；
[0014] A2)所述應激誘導的磷酸化蛋白1多克隆抗體的免疫原；
[0015] A3)產(chǎn)生所述應激誘導的磷酸化蛋白1單克隆抗體的細胞系；
[0016] A4)產(chǎn)生所述應激誘導的磷酸化蛋白1多克隆抗體的細胞系；
[0017] VI、B1)-B16)中任一種制備應激誘導的磷酸化蛋白1所需的生物材料在制備篩查 或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn)品中的應用：
[0018] BI)編碼應激誘導的磷酸化蛋白1的核酸分子；
[0019] B2)含有BI)所述核酸分子的表達盒；
[0020] B3)含有BI)所述核酸分子的重組載體；
[0021] B4)含有B2)所述表達盒的重組載體；
[0022] B5)含有BI)所述核酸分子的重組微生物；
[0023] B6)含有B2)所述表達盒的重組微生物；
[0024] B7)含有B3)所述重組載體的重組微生物；
[0025] B8)含有B4)所述重組載體的重組微生物；
[0026] B9)含有BI)所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因動物細胞系；
[0027] B10)含有B2)所述表達盒的轉(zhuǎn)基因動物細胞系；
[0028] BI 1)含有B3)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動物細胞系；
[0029] B12)含有M)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因動物細胞系；
[0030] B13)含有BI)所述核酸分子的轉(zhuǎn)基因植物細胞系；
[0031] B14)含有B2)所述表達盒的轉(zhuǎn)基因植物細胞系；
[0032] B15)含有B3)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物細胞系；
[0033] B16)含有M)所述重組載體的轉(zhuǎn)基因植物細胞系。
[0034] 上述用途中，所述檢測應激誘導的磷酸化蛋白I (Stress-induced-phosphoprotei nl，STIPl)含量的物質(zhì)可包括檢測應激誘導的磷酸化蛋白1含量的試劑和/或儀器，如通過 酶聯(lián)免疫反應檢測應激誘導的磷酸化蛋白1含量所需的試劑和儀器。具體來說，檢測應激 誘導的磷酸化蛋白1含量的物質(zhì)可包括應激誘導的磷酸化蛋白1、應激誘導的磷酸化蛋白 1抗體和進行酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA)所需要的其它試劑和儀器，當然，上述檢測應激誘 導的磷酸化蛋白1含量的物質(zhì)可只由應激誘導的磷酸化蛋白1和應激誘導的磷酸化蛋白1 抗體組成，也可只由應激誘導的磷酸化蛋白1組成，也可只由應激誘導的磷酸化蛋白1抗體 組成。所述應激誘導的磷酸化蛋白1、所述應激誘導的磷酸化蛋白1抗體和進行酶聯(lián)免疫吸 附實驗（ELISA)所需要的其它試劑均可獨立包裝。
[0035] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白1抗體為應激誘導的磷酸化蛋白1單克 隆抗體和/或應激誘導的磷酸化蛋白1多克隆抗體。
[0036] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白1可為標記物標記的應激誘導的磷酸化 蛋白1。
[0037] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白1蛋白具體可為人應激誘導的磷酸化蛋 白1。
[0038] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白1可為氨基酸序列是序列表中SEQ ID No. 1的蛋白質(zhì)。
[0039] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白1的C末端或N末端可融合有His、Flag、 GST、MBP、His-MBP、HA、eGFP、eCFP、eYFP、Myc、His-Myc、His-AviTag、Sumo、His-Sumo、 SNAP-Tag 或 Halo Tag 標簽。
[0040] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白I抗體可為用生物素標記的應激誘導的 磷酸化蛋白1抗體。
[0041] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白1抗體可識別氨基酸序列是序列表中 SEQ ID No. 1的蛋白質(zhì)。
[0042] 上述用途中，所述應激誘導的磷酸化蛋白1抗體的C末端或N末端可融合有His、 Flag、GST、MBP、His-MBP、HA、eGFP、eCFP、eYFP、Myc、His-Myc、His-AviTag、Sumo、His-Sumo、 SNAP-Tag 或 Halo Tag 標簽。
[0043] 上述用途中，所述檢測應激誘導的磷酸化蛋白1含量的物質(zhì)為所述應激誘導的磷 酸化蛋白1和/或所述應激誘導的磷酸化蛋白1抗體。
[0044] 上述用途中，所述檢測應激誘導的磷酸化蛋白1含量的物質(zhì)為通過酶聯(lián)免疫反應 檢測所述應激誘導的磷酸化蛋白1含量所需的試劑和儀器。
[0045] 上述用途中，所述檢測應激誘導的磷酸化蛋白1含量具體可為檢測人血清或血漿 中的應激誘導的磷酸化蛋白1濃度。
[0046] 上述用途中，所述肝細胞癌可為有乙型肝炎病毒（h印atitis B virus，HBV)慢性 感染背景的肝細胞癌。
[0047] 上述用途中，所述篩查或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn)品可為用于篩查或輔助診斷肝細胞 癌的各種試劑或試劑盒。
[0048] 在本發(fā)明中，所述篩查或輔助診斷肝細胞癌產(chǎn)品的篩查或診斷對象是肝硬化（LC) 患者或健康人。在本發(fā)明的一個實施例中，所述肝硬化（LC)患者具體為有HBV慢性感染的 肝硬化患者。
[0049] 上述用途中，當以無HBV慢性感染背景的肝硬化患者為篩查對象時，如果篩查對 象血清中應激誘導的磷酸化蛋白I(STIPl)蛋白的含量大于22. 86ng/mL，該篩查對象為疑 似肝細胞癌患者，如果篩查對象血清中應激誘導的磷酸化蛋