亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑及其制備方法和用圖

文檔序號:8379478閱讀:857來源:國知局
保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑及其制備方法和用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫分析測定用試劑技術領域,尤其涉及保護異硫氰酸熒光素與抗原 抗體偶聯物的穩(wěn)定劑及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002] 在免疫分析測定中,采用異硫氰酸熒光素(FITC)抗體偶聯固相載體,FITC偶聯特 異性抗體或抗原的級聯放大技術能夠大大提高分析試劑的靈敏度和線性范圍,并且可以實 現固相載體通用化,便于生產、降低成本。但FITC與抗原或抗體的偶聯物稀釋為濃度較低 的工作液后穩(wěn)定性大幅降低,容易水解失活,若受到光照則更會加速其失活。為防止FITC 與抗原或抗體的偶聯物活性降低,影響分析測定準確度,現有技術中,一般使用含有動物血 清、牛血清白蛋白、酪蛋白等成分的稀釋液保護FITC與抗原或抗體的偶聯物的穩(wěn)定性,雖 然起到一定的穩(wěn)定作用,但作用有限,通常保存一年(保存溫度2~8°C )后活性剩余60~ 80 %,不能很好的滿足免疫分析測定應用。
[0003] 因此,亟需開發(fā)一種穩(wěn)定劑,有效保護異硫氰酸熒光素與抗原或抗體偶聯物的穩(wěn) 定性,避免由于其穩(wěn)定性不好導致試劑盒的有效期過短、空白限等性能參數逐漸下降,從而 滿足免疫分析測定的要求,保障分析測定的效果。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是,針對現有技術存在的問題,提供保護異硫氰酸熒光素與抗原抗 體偶聯物的穩(wěn)定劑及其制備方法和用途,有效保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn) 定性,從而為相關分析測試提供保障。
[0005] 本發(fā)明解決問題的技術方案是:保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定 劑,所述穩(wěn)定劑的原料組分包括三羥甲基氨基甲烷(Tris)、0 _乳球蛋白、N,N二甲基二吖 啶硝酸鹽、魚皮凝膠、多聚賴氨酸和水。
[0006] 在本發(fā)明保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑中,優(yōu)選地,每1L所述 穩(wěn)定劑中含有的原料組分如下:三輕甲基氨基甲燒〇. Olmol、|3 -乳球蛋白lg~5g、N,N二 甲基二吖啶硝酸鹽lmg~3mg、魚皮凝膠lg~3g、多聚賴氨酸0. lg~lg、余量為水。
[0007] 在本發(fā)明保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑中,優(yōu)選地,所述穩(wěn)定 劑的pH為7~9。
[0008] 在本發(fā)明保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑中,優(yōu)選地,所述穩(wěn)定 劑的pH為8。
[0009] 上述保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑的制備方法,將上述保護異 硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑的各原料三羥甲基氨基甲烷、乳球蛋白、N, N二甲基二吖啶硝酸鹽、魚皮凝膠和多聚賴氨酸在水中充分攪拌至完全溶解并混合均勻,即 得到保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑。
[0010] 優(yōu)選地,在室溫下,將所述穩(wěn)定劑的各原料即三羥甲基氨基甲烷、乳球蛋白、N, N二甲基二吖啶硝酸鹽、魚皮凝膠和多聚賴氨酸在水中充分攪拌至完全溶解并混合均勻后, 用4mol/L鹽酸調pH至7~9,制備完成后置于2~8°C下保存。
[0011] 本發(fā)明還提供了上述保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑的用途,將 其用于免疫分析測定;優(yōu)選地,在免疫分析測定中,將異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物用 所述保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑稀釋。
[0012] 與現有技術相比,本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明能夠有效的保護FITC與抗原抗體 偶聯物的穩(wěn)定性,能夠使FITC與抗原抗體偶聯物工作液保存一年(2~8°C)后活性剩余達 到95%以上,相較于現有常規(guī)用試劑,使FITC與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定性得到大幅提高, 顯著延長了相關試劑盒的有效期,并使得試劑盒能夠長期保持良好的性能參數;且制備方 法簡單,經濟成本低,適于在相關免疫分析測定領域推廣應用。
【附圖說明】
[0013] 圖1為現有技術試劑1'號4°C保存6天的空白限評價中A、B點連點擬合曲線及 其對應的一次方程;
[0014] 圖2為現有技術試劑1'號37°C保存6天的空白限評價中A、B點連點擬合曲線及 其對應的一次方程;
[0015] 圖3為由實施例1所得穩(wěn)定劑稀釋制備的試劑1號4°C保存6天的空白限評價中 A、B點連點擬合曲線及其對應的一次方程;
[0016] 圖4為由實施例1所得穩(wěn)定劑稀釋制備的試劑1號37°C保存6天的空白限評價中 A、B點連點擬合曲線及其對應的一次方程;
[0017] 圖5為由實施例2所得穩(wěn)定劑稀釋制備的試劑1號4°C保存6天的空白限評價中 A、B點連點擬合曲線及其對應的一次方程;
[0018] 圖6為由實施例2所得穩(wěn)定劑稀釋制備的試劑1號37°C保存6天的空白限評價中 A、B點連點擬合曲線及其對應的一次方程;
[0019] 圖7為由實施例3所得穩(wěn)定劑稀釋制備的試劑1號4°C保存6天的空白限評價中 A、B點連點擬合曲線及其對應的一次方程;
[0020] 圖8為由實施例3所得穩(wěn)定劑稀釋制備的試劑1號37°C保存6天的空白限評價中 A、B點連點擬合曲線及其對應的一次方程。
【具體實施方式】
[0021] 下面結合附圖以及具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明,但本發(fā)明的保護范圍并 不限于此。
[0022] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明,均為常規(guī)方法;所用百分數如無 特殊說明均指質量百分含量。
[0023] 下述實施例中所用的材料、試劑等,除特別說明外,均可從商業(yè)途徑得到。
[0024] 實施例1
[0025] 本發(fā)明的一種保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑,將原料三羥甲基 氨基甲烷、0 -乳球蛋白、N,N二甲基二吖啶硝酸鹽、魚皮凝膠和多聚賴氨酸在水中充分攪 拌至完全溶解并混合均勻制得,每1L所得穩(wěn)定劑中含有的原料組分如下:三羥甲基氨基甲 烷0.0 lmol、0 -乳球蛋白lg、N,N二甲基二吖啶硝酸鹽lmg、魚皮凝膠lg、多聚賴氨酸0. lg、 余量為水。
[0026] 在上述實施例中,為增強對異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的保護效果,優(yōu)選 地,在室溫下,將所述穩(wěn)定劑的各原料即三羥甲基氨基甲烷、乳球蛋白、N,N二甲基二吖 啶硝酸鹽、魚皮凝膠和多聚賴氨酸在水中充分攪拌至完全溶解并混合均勻后,用4mol/L鹽 酸調pH至7~9,較佳地,調pH至8,制備完成后置于2~8°C下保存。
[0027] 實施例2
[0028] 本發(fā)明的一種保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑基本制備方法同 實施例1,其中,每1L所得穩(wěn)定劑中含有的原料組分如下:三羥甲基氨基甲烷O.Olmol、 0-乳球蛋白3g、N,N二甲基二吖啶硝酸鹽3mg、魚皮凝膠3g、多聚賴氨酸0. 55g、余量為水。
[0029] 實施例3
[0030] 本發(fā)明的一種保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑基本制備方法同 實施例1,其中,每1L所得穩(wěn)定劑中含有的原料組分如下:三羥甲基氨基甲烷O.Olmol、 0- 乳球蛋白5g、N,N二甲基二吖啶硝酸鹽5mg、魚皮凝膠5g、多聚賴氨酸lg、余量為水。
[0031] 對上述實施例所制得的保護異硫氰酸熒光素與抗原抗體偶聯物的穩(wěn)定劑分別進 行應用測試,以前列腺特異性抗原磁微?;瘜W發(fā)光免疫分析試劑(PSA試劑)為例,測定 試劑1號的37°C的加速穩(wěn)定性,試劑1號中的FITC與PSA抗體偶聯物分別用上述實施例 1- 3制得的穩(wěn)定劑配制成工作液。具體地,所述的PSA試劑包括:含有FITC偶聯PSA抗體 的溶液,簡稱試劑1號;偶聯有FITC抗體的磁微粒的懸浮液,簡稱磁分離試劑;堿性磷酸酶 (ALP)標記的PSA抗體的溶液,簡稱試劑2號。所述PSA試劑制備方法如下:
[0032] 1、試劑1號的制備
[0033] (1)制備用材料與儀器:以Tris緩沖液保存的PSA抗體,純度超過99%,濃度為 5mg/mL ;異硫氰酸熒光素(FITC),碳酸氫鈉等試劑應達到化學純;G-25凝膠純化柱采購自 GE公司;
[0034] (2)制備步驟:
[0035] ①用0? 2m〇L/L pH為9. 0的碳酸鹽緩沖液配制0? 5mg/mL的FITC溶液;
[0036] ②按照PSA抗體與FITC分子比為1:10的比例在抗體溶液中加入步驟①所配制的 FITC溶液,混合均勻后,室溫下靜置反應12h小時,得到PSA抗體-FITC偶聯物;
[0037] ③將步驟②的反應液通過G-25凝膠柱進行分離,去除未反應的FITC,得到含有 PSA抗體-FITC偶聯物(即FITC標記的PSA抗體)的溶液;
[0038] ④用上述實施例1或實施例2或實施例3中所得的穩(wěn)定劑將步驟③所得含有PSA 抗體-FITC偶聯物的溶液稀釋為工作液,即制得試劑1號。
[0039] 2、試劑2號的制備
[0040] (1)材料與儀器:以Tris緩沖液保存的PSA單克隆抗體,純度超過98%,濃度為 4mg/mL,下稱PSA抗體溶液;以磷酸緩沖液保存的堿性磷酸酶(ALP溶液),ALP純度為99% 以上,ALP比活性為1200U/mg,ALP溶液濃度為17. 5mg/mL ;5mg/mL SMCC(4-(N-馬來酰亞 胺基甲基)環(huán)己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯)溶液、10mg/mL 2-IT(2-亞氨基硫烷鹽酸鹽) 溶液,其中,SMCC溶液采用固體粉末狀交聯劑SMCC用DMF (二甲基甲酰胺)溶解配制而成, 2-IT溶液采用固體粉末狀2-IT用DMF(二甲基甲酰胺)溶解配制而成,所用SMCC、2-IT均 購自Sigma公司;Tris等化學試劑應達到化學純;G-25凝膠純化柱、AKTA-PURE蛋白純化儀 和Supperdex200凝膠純化柱均為GE公司產品;
[0041] (2)制備步驟:
[0042] ①取
當前第1頁1 2 
網友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
1