中藥復(fù)方中組分的抗氧化活性貢獻(xiàn)程度的確定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥復(fù)方質(zhì)量控制領(lǐng)域，特別涉及中藥復(fù)方中組分的抗氧化活性貢獻(xiàn) 程度的確定方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，活血化瘀類中藥復(fù)方具有順暢血行、消散瘀血、活血通絡(luò)的功 效；現(xiàn)代藥理研究表明，活血化瘀類中藥復(fù)方具有很強(qiáng)的抗氧化、抗血小板聚集、血管內(nèi)皮 保護(hù)、及改善血流變等作用。其中，抗氧化是活血化瘀類中藥能夠發(fā)揮疾病治療作用的重要 機(jī)制之一。
[0003] 中藥復(fù)方抗氧化能力的大小一般通過其抗氧化活性來體現(xiàn)。目前，對(duì)活血化瘀類 中藥復(fù)方抗氧化活性的研究對(duì)象主要是單一成分，通過試驗(yàn)篩選出具有抗氧化活性的單一 成分，并以此單體化合物的抗氧化活性的高低來確定其在活血化瘀類中藥復(fù)方中的抗氧化 活性貢獻(xiàn)程度。
[0004] 然而，活血化瘀類中藥復(fù)方是通過多成分協(xié)同作用發(fā)揮藥效，任何單一成分都無 法全面表征中藥復(fù)方的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，其抗氧化活性強(qiáng)弱也無法代表其對(duì)活血化瘀類中藥 復(fù)方的抗氧化活性貢獻(xiàn)程度。抗氧化活性貢獻(xiàn)程度確定不僅與抗氧化活性大小有關(guān)，還與 濃度、固含物重量等參數(shù)有關(guān)，因此，只是依據(jù)抗氧化活性大小來確定抗氧化活性貢獻(xiàn)程度 是不合理的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決上述問題，本發(fā)明實(shí)施例公開了中藥復(fù)方中組分的抗氧化活性貢獻(xiàn)程度的 確定方法。技術(shù)方案如下：
[0006] 中藥復(fù)方中組分的抗氧化活性貢獻(xiàn)程度的確定方法，包括：
[0007] 通過制備液相色譜獲得目標(biāo)中藥復(fù)方的各組分，并將各組分制備成干粉；
[0008] 通過預(yù)先設(shè)定的自由基清除活性實(shí)驗(yàn)，確定各組分在指定濃度下的自由基清除活 性RSA的值a;
[0009] 根據(jù)所述預(yù)先設(shè)定的自由基清除活性實(shí)驗(yàn)，確定各組分中每一組分的n個(gè)指定濃 度Q、C2、C3……k、Cn分別對(duì)應(yīng)的自由基清除活性RSAi、RSA2、RSA3……RSAn_i、RSAn，計(jì)算 得到各組分中每一組分的自由基清除活性-濃度曲線下面積AUC;通過將所得到各組分中 每一組分的自由基清除活性-濃度曲線下面積除以其中的最大值進(jìn)行歸一化處理，得到各 組分的自由基清除活性-濃度曲線下面積的歸一化結(jié)果b;
[0010] 其中，各組分中每一組分的自由基清除活性-濃度曲線下面積AUC的計(jì)算方法 為：
[0011] AUC= (RSAi+RSA2)X(CfC) /2+ (RSA2+RSA3)X(c3-c2) /2+......+(RSAn^+RSAn)X(Cn
[0012] 精密稱定所制備的各組分干粉重量，得到各組分固含物重量，通過將所得到各組 分固含物重量除以其中的最大值進(jìn)行歸一化處理，得到各組分固含物重量的歸一化結(jié)果 C；
[0013] 根據(jù)已確定的各組分的自由基清除活性RSA的值a、各組分自由基清除活性-濃度 曲線下面積的歸一化結(jié)果b及各組分固含物重量的歸一化結(jié)果c，得到各組分的三元網(wǎng)絡(luò) 回歸面積A，所述三元網(wǎng)絡(luò)回歸面積A的計(jì)算公式為：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 中藥復(fù)方中組分的抗氧化活性貢獻(xiàn)程度的確定方法，其特征在于，包括： 通過制備液相色譜獲得目標(biāo)中藥復(fù)方的各組分，并將各組分制備成干粉； 通過預(yù)先設(shè)定的自由基清除活性實(shí)驗(yàn)，確定各組分在指定濃度下的自由基清除活性RSA的值a; 根據(jù)所述預(yù)先設(shè)定的自由基清除活性實(shí)驗(yàn)，確定各組分中每一組分的n個(gè)指定濃度Cp C2、C3……Cm、Cn分別對(duì)應(yīng)的自由基清除活性RSA^RSA2、RSA3……RSAn_i、RSAn，計(jì)算得到各 組分中每一組分的自由基清除活性-濃度曲線下面積AUC;通過將所得到各組分中每一組 分的自由基清除活性-濃度曲線下面積除以其中的最大值進(jìn)行歸一化處理，得到各組分的 自由基清除活性-濃度曲線下面積的歸一化結(jié)果b; 其中，各組分中每一組分的自由基清除活性-濃度曲線下面積AUC的計(jì)算方法為： AUC=(RSAJRSAJX(Q-Ci)/2+(RSA2+RSA3)X(C3-C2)/2+......+ (RSAn_1+RSAn)X(Cn- D/2 ; 精密稱定所制備的各組分干粉重量，得到各組分固含物重量，通過將所得到各組分固 含物重量除以其中的最大值進(jìn)行歸一化處理，得到各組分固含物重量的歸一化結(jié)果c; 根據(jù)已確定的各組分的自由基清除活性RSA的值a、各組分自由基清除活性-濃度曲線 下面積的歸一化結(jié)果b及各組分固含物重量的歸一化結(jié)果c，得到各組分的三元網(wǎng)絡(luò)回歸 面和A，所沭=元網(wǎng)絡(luò)冋歸而和A的計(jì)筧公式為
： 并根據(jù)所述三元網(wǎng)絡(luò)回歸面積A的大小來確定各組分在目標(biāo)中藥復(fù)方中的抗氧化活 性貢獻(xiàn)程度，即組分的三元網(wǎng)絡(luò)回歸面積A越大，其在目標(biāo)中藥復(fù)方中的抗氧化活性貢獻(xiàn) 程度越大。
2. 如權(quán)利要求1所示的方法，其特征在于，通過制備液相色譜獲得目標(biāo)中藥復(fù)方的各 組分，并將各組分制備成干粉，包括： 將Vi體積的目標(biāo)中藥復(fù)方的提取液置于乂2體積的容量瓶中，加入體積分?jǐn)?shù)為0? 100%甲醇稀釋并定容至刻度，超聲混勻，離心后得到供試品溶液； 在預(yù)設(shè)的制備液相色譜條件下，取v3體積的供試品溶液注入制備液相色譜中，采用自 動(dòng)收集裝置，每t分鐘收集一次組分，收集N個(gè)組分，反復(fù)進(jìn)樣M次，收集合并相同組分，濃 縮、干燥優(yōu)選凍干，得到各組分干粉，其中，M> 1。
3. 如權(quán)利要求2所示的方法，其特征在于，所述預(yù)設(shè)的制備液相色譜條件還包括： 色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠的固定相； 流動(dòng)相：〇. 01?1%的甲酸水溶液-甲醇，優(yōu)選〇. 05?0. 5%的甲酸水溶液-甲醇，更 優(yōu)選0. 1 %的甲酸水溶液-甲醇； 流速：5?20mL/分鐘； 柱溫:室溫； 進(jìn)樣量：1?5mL; 檢測(cè)波長(zhǎng)：254和286nm。
4. 如權(quán)利要求1所示的方法，其特征在于，所述預(yù)先設(shè)定的自由基清除活性實(shí)驗(yàn)為 DPPH自由基清除活性實(shí)驗(yàn)。
5. 如權(quán)利要求4所示的方法，其特征在于，根據(jù)DPPH自由基清除活性實(shí)驗(yàn)確定各組分 自由基清除活性的方法，包括： 用指定溶劑分別制備已知濃度為C#s的各組分樣品溶液； 向體積為V4的各組分樣品溶液中分別加入體積為V5濃度為C_的DPPH溶液，并設(shè)置 空白對(duì)照組及DPPH對(duì)照組，所述空白對(duì)照組包含V4體積的供試品溶液及V5體積的指定溶 齊IJ;所述DPPH對(duì)照組包括V4體積的指定溶劑及V5體積CDPPH濃度的DPPH溶液； 記錄每個(gè)組分樣品溶液的吸光度值、空白對(duì)照組的吸光度值0DS自及DPPH對(duì)照組 的吸光度值〇Ddpph，并根據(jù)公式： DPPH自由基清除活性=1-(0D樣品-0D空白）/0D_ 確定各組分在濃度為C#s的情況下的自由基清除活性。
6. 如權(quán)利要求5所示的方法，其特征在于，采用多功能讀板機(jī)在預(yù)設(shè)條件下記錄每個(gè) 組分樣品溶液的吸光度值、空白對(duì)照組的吸光度值0DS自及DPPH對(duì)照組的吸光度值 〇Ddpph;K述預(yù)設(shè)條件包括：試驗(yàn)溫度：20?50°C，優(yōu)選的30?40°C，更優(yōu)選37°C;讀板速 度：45s/次；采集時(shí)間：45min;檢測(cè)波長(zhǎng)：517nm。
7. 如權(quán)利要求1所示的方法，其特征在于，所述目標(biāo)中藥復(fù)方為丹紅注射液。
【專利摘要】本發(fā)明實(shí)施例公開了中藥復(fù)方中組分的抗氧化活性貢獻(xiàn)程度的確定方法，包括：通過制備液相色譜獲得目標(biāo)中藥復(fù)方的各組分，并將各組分制備成干粉；確定各組分的自由基清除活性RSA的值a、各組分自由基清除活性-濃度曲線下面積的歸一化結(jié)果b及各組分固含物重量的歸一化結(jié)果c，進(jìn)而得到各組分的三元網(wǎng)絡(luò)回歸面積A；并根據(jù)所述三元網(wǎng)絡(luò)回歸面積A的大小來確定各組分在目標(biāo)中藥復(fù)方中的抗氧化活性貢獻(xiàn)程度。
【IPC分類】G01N30-88, G01N5-00
【公開號(hào)】CN104614481
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510079136
【發(fā)明人】楊靜, 江振作, 朱彥, 王琰, 王躍飛, 張蕾, 柴欣
【申請(qǐng)人】天津中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2015年2月13日