一種消渴清顆粒的含量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物的有效成分測定方法，特別涉及一種消渴清顆粒中藥物有效 成分含量檢測方法
【背景技術(shù)】：
[0002] 消渴清顆粒為一種已經(jīng)上市的治療糖尿病的中成藥，其配方組成如下：知母、蒼 術(shù)、黃連、蒲黃、地錦草、以及適量輔料，其制備方法包括以下步驟：
[0003] (a)取知母、蒼術(shù)、黃連、蒲黃、地錦草、備用；
[0004] (b)蒼術(shù)用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油5小時，將蒼術(shù)揮發(fā)油用環(huán)糊精包合，蒼 術(shù)油與環(huán)糊精按1 : 6投料，在50°C干燥，制得環(huán)糊精包合物備用，提取液濾過，得 濾液1 ;
[0005] (c)知母、黃連、蒲黃、地錦草以及蒼術(shù)水提后的殘渣加8倍量水煎煮兩次，第一次 煎煮2小時，第二次煎煮1小時，合并兩次煎液，過濾得濾液2,合并濾液1與2,濃縮濾液成 比重為1. 10?1. 15的清膏，干燥得干浸膏；
[0006] ⑷：上述干浸膏及揮發(fā)油包合物，充分混合，即得藥物活性物質(zhì)，進一步和藥物可 接受的輔料混合制成顆粒等制劑形式。
[0007] 消渴清顆粒中，各味藥起著不同的功效，其中，蒼術(shù)辛苦溫，入脾胃二經(jīng)，氣味芳 香，善行而不守，既可燥濕健脾，又能行氣開郁，故朱丹溪謂其："蒼術(shù)為足陽明經(jīng)藥，氣味辛 烈，強胃健脾發(fā)谷之氣"，"能解諸郁"。知母甘寒，入肺、胃、腎經(jīng)，具有滋陰降火，清熱潤燥之 功，《本草綱目》認(rèn)為，"知母下則潤胃燥而滋陰，上則清肺金而瀉火。"，《本經(jīng)》謂"主消渴熱 中，除邪氣。"，二藥皆為君，二藥相互配伍，共行滋腎陰，健脾運，化郁之功；黃連氣味苦寒， 具有清熱燥濕，瀉火解毒，以之為臣，輔知母以護腎陰，助蒼術(shù)以化濕濁；生蒲黃性涼味甘 辛，入心、肝二經(jīng)，涼血化瘀，血行津布而燥熱可解，瘀去氣行，而陰津自生，且能改善糖尿病 合并心腦血管病變，以之為佐；地錦草乃民間天然降糖妙品，味微苦辛而性平，清熱解毒，活 血通脈不僅善降血糖，且對糖尿病并發(fā)癰疽瘡癤也有良效，以之為使，諸藥合用，則共奏滋 陰清火，健脾活血之功，諸癥可緩解而愈之。以上諸藥，按照中醫(yī)方劑學(xué)的基礎(chǔ)理論，巧妙配 伍，嚴(yán)密組合，共奏滋陰降火、清熱化濕、活血化瘀之功，從而達到向愈的目的。
[0008] 消渴清顆粒（XiaoKeQinggranules,XKQ)是由知母、蒼術(shù)、黃連、蒲黃及地錦草5 味藥組成。中國專利=200310107286, 200410048002. 4公開了有關(guān)的配方和制備。目前，消 渴清顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測定項下僅對知母水解產(chǎn)物中的菝葜皂苷元進行了含量測定，無法 全面表征中藥制劑的整體性和復(fù)雜性，由于消渴清顆粒由5種中藥材制備而成，其有效成 分復(fù)雜多樣，有必要尋找一種可以檢測其中多種成分的方法，以有效的控制生產(chǎn)過程中產(chǎn) 品的含量和質(zhì)量，為此發(fā)明人進行了多種檢測方法的實驗，最終獲得一種適合消渴清顆粒 的方法，并對其中含量較高的5個成分新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴馬汀和小檗堿進 行了含量測定。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0009] 本發(fā)明采用UPLC-PDA-ELSD色譜法對消渴清制劑中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷 BII、巴馬汀和小檗堿進行了含量測定，為消渴清的質(zhì)量提供了安全、有效、準(zhǔn)確的控制。
[0010] 本發(fā)明提供一種消渴清制劑的檢測方法，特別包括消渴清顆粒的檢測方法。
[0011] 所述方法包括以下步驟：
[0012] 供試品溶液制備：
[0013] 取消渴清制劑，加入提取溶劑甲醇或乙醇適量，超聲溶解，再加入溶劑調(diào)整溶液濃 度，微孔濾膜濾過，取濾液，既得。
[0014] 對照品儲備液的制備：
[0015] 取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴馬汀和小檗堿對照品，加甲醇溶解，得到對 照品儲備液。
[0016] 含量測定：
[0017] 將上述供試品溶液和對照品儲備液分別注入UPLC-PDA-ELSD色譜儀，得到色譜 圖，根據(jù)色譜圖，用峰面積法計算供試品溶液中新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴馬汀和 小檗堿的含量，并得到消渴清制劑中這些成分的含量。
[0018] 其中，所述UPLC-PDA-ELSD色譜儀，其色譜條件如下：
[0019] 色譜柱：選自：UPLCC18或T3柱；
[0020] 流動相：選自：溶劑A(醋酸鹽緩沖溶液(含0. 3-0. 5%乙酸及0. 05-0. 1%三乙胺)）-溶劑B(乙腈）;溶劑A(0.1%甲酸水溶液）-溶劑B(乙腈）;溶劑A(0.1%醋酸水溶液）-溶劑B(乙腈）中的一種。
[0021] 本發(fā)明采用梯度洗脫進行洗脫，所述梯度洗脫：選自以下四個不同的洗脫方案中 的一種：
[0022] ① 0 ?4min，5%_ 10%B，4 ?10min，10%_ 15%B，10 ?13min，15%-22%B，13 ? 15min,22% - 30%B,15 ?18min,30%B,18 ?20min,30% - 80%B,20 ?23min,80% - 5%B;
[0023]② 0 ?4min, 5%B, 4 ?5min, 5% - 10%B, 5 ?8min, 10%B, 8 ?lOmin, 10_15%B，10 ? llmin,15-12%B,11 ?13min,12% - 22%B,13 ?15min,22% - 30%B,15 ?18min,30%B,18 ? 20min,30% - 80%B,20 ?23min,80% - 5%B;
[0024]③0?4min, 5%B, 4?5min, 5%-10%B, 5?8min, 10%B, 8?lOmin, 10_15%B，10? llmin，15-12%B，11 ?13min，12% - 20%B，13 ?14min，20% - 25%B，14 ?18min，25 - 30%B， 20 ?23min,80%_ 5%B;
[0025]④0?4min, 5%B, 4?5min, 5%-10%B, 5?8min, 10%B, 8?lOmin, 10_20%B，10? 13min, 20%B, 13 ?14min, 20% - 25%B, 14 ?18min, 25 - 30%B, 20 ?22min, 80% - 5%B;
[0026]柱溫：25-35°C
[0027]流速：0? 15-0. 25ml/min
[0028]ELSD空氣流速：2. 0-3.OL?mirT1;
[0029]漂移管溫度：100-110°C;
[0030]進樣量為 2_4iiL。
[0031]檢測波長：240-340nm
[0032] 優(yōu)選的，本發(fā)明的供試品溶液制備方法如下：
[0033]取消渴清制劑l_7g，用50-80%乙醇或25-80%甲醇超聲提取，超聲時間為 2〇-40min；
[0034] 更優(yōu)選的，本發(fā)明的供試品溶液制備方法如下：提取溶劑為75%的乙醇，或70-80% 的甲醇。
[0035] 最優(yōu)選的本發(fā)明的供試品溶液制備方法如下：
[0036] 取消渴清制劑(優(yōu)選消渴清顆粒）6g，精密稱定，置25ml量瓶中，加75%甲醇適量， 超聲(功率500w) 30min，放置至室溫，加75%甲醇定容至刻度，0. 22iim微孔濾膜濾過，取續(xù) 濾液，既得。
[0037] 優(yōu)選的，本發(fā)明的對照品儲備液的制備制備方法如下：
[0038]取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴馬汀和小檗堿對照品，加70-80%的甲醇。溶 解，得到對照品儲備液。
[0039] 更優(yōu)選的，本發(fā)明的對照品儲備液的制備制備方法如下：
[0040] 取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴馬汀和小檗堿對照品，加75%的甲醇。
[0041] 溶解，得到對照品儲備液。
[0042] 最優(yōu)選的，本發(fā)明的對照品儲備液的制備制備方法如下：
[0043] 取新芒果苷、芒果苷、知母皂苷BII、巴馬汀和小檗堿對照品適量，精密稱定，力口 75%甲醇溶解，得到質(zhì)量濃度分別為0. 244、0. 784、0. 772、0. 070和0. 224iig?iiL-1的對照 品儲備液。
[0044] 優(yōu)選的，本發(fā)明的色譜條件如下：
[0045]色譜柱：WatersAcquityUPLCHSSC18 (2. 1X100mm，1. 8um);
[0046] 流動相：溶劑A(醋酸鹽緩沖溶液(含0. 5%乙酸及0. 1%三乙胺)