食品中蘇丹紅染料殘留的快速提取凈化及檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種食品中有毒有害化學(xué)組分殘留的測(cè)定方法，尤其涉及雞蛋和辣椒 等食品中蘇丹紅染料殘留的快速提取凈化及檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 蘇丹紅是一類人工合成的偶氮苯基萘酚工業(yè)染料，主要包括I、II、III和IV四種 類型，被大量用于機(jī)油、汽油蠟和鞋油等工業(yè)品中，還可以用于焰火禮花的著色。在食品的 加工過(guò)程中，為求制品色彩的艷麗或保持原有的色澤，借以改善食品的感官性狀，增加人們 的食欲，常常會(huì)添加一些食用色素。1995年歐盟禁止將蘇丹紅（尤其是蘇丹紅I號(hào)）作為 食用色素添加到食品當(dāng)中，對(duì)此我國(guó)也明文禁止。然而，近年來(lái)食品中頻頻檢測(cè)出蘇丹紅， 如，2005年3月4日，亨氏辣椒醬在北京首次被檢出含有蘇丹紅I號(hào)；不到1個(gè)月，在包括 肯德基等多家餐飲與食品公司的產(chǎn)品中相繼檢出含有蘇丹紅I號(hào)；蘇丹紅事件由此席卷全 中國(guó)，國(guó)家質(zhì)檢總局于2005年4月對(duì)全國(guó)可能含有蘇丹紅的食品進(jìn)行專項(xiàng)檢查后發(fā)現(xiàn)，共 有36家企業(yè)生產(chǎn)的88種食品及添加劑含有蘇丹紅；2007年1月，國(guó)家質(zhì)檢總局再次發(fā)布 蘇丹紅預(yù)警，25%辣椒制品因含有蘇丹紅而抽檢不合格。上述種種事件給整個(gè)社會(huì)造成了 極其惡劣的影響，甚至造成了社會(huì)大眾對(duì)食品安全的恐慌。因此，快速、準(zhǔn)確、靈敏、簡(jiǎn)便的 測(cè)定食品中蘇丹紅的分析方法迫在眉睫。
[0003] 在蘇丹紅的檢測(cè)中，由于食品樣品基質(zhì)復(fù)雜，需要選擇合適的提取溶劑才能取得 滿意的提取效果，尤其是雞蛋、辣椒及其制品等食品。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19681-2005推薦使用 正己烷作為提取溶劑，但實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)提取效果不甚理想，尤其是蘇丹紅III和IV回收率較低 (〈70%)。申請(qǐng)?zhí)枮?01310031730. 3(公開(kāi)號(hào)為CN103091423A)的中國(guó)發(fā)明專利《蘇丹紅 檢測(cè)方法》提供了一種以乙腈為提取溶劑，經(jīng)C18固相萃取小柱凈化后采用液相色譜分析食 品中蘇丹紅染料的方法；該方法步驟簡(jiǎn)單、成本低廉，但由于液相色譜-紫外檢測(cè)法的局限 性，其對(duì)食品中蘇丹紅殘留分析存在靈敏度低、假陽(yáng)性率高等不足，且該方法采用乙腈作為 提取溶劑，適用的食品類別少，尤其對(duì)于含大量油脂的辣椒油無(wú)法較好的進(jìn)行提取。又如： 申請(qǐng)?zhí)枮?01210533392. 9 (公開(kāi)號(hào)為CN102944639A)選擇了甲醇、乙腈與異丙醇混合溶 液對(duì)紅辣椒粉樣品和番茄汁樣品進(jìn)行提取，然后采樣用高效液相色譜-紫外檢測(cè)儀進(jìn)行測(cè) 定。同樣地，該方法所采用的高效液相色譜-紫外檢測(cè)儀具有靈敏度低、假陽(yáng)性率高等缺 陷，同時(shí)樣品基質(zhì)單一，對(duì)公眾關(guān)注的雞蛋樣品和辣椒油樣品均未涉及，且該方法未經(jīng)凈化 直接測(cè)定，基質(zhì)干擾大。
[0004] 因此，現(xiàn)有的應(yīng)用于食品樣品中蘇丹紅殘留檢測(cè)的方法存在許多不足，有待改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)而提供一種檢測(cè)靈敏度高、準(zhǔn)確性高 的食品中蘇丹紅染料殘留的快速提取凈化及檢測(cè)方法，該方法尤其適用于雞蛋、辣椒以及 辣椒油等食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)。
[0006] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為：一種食品中蘇丹紅染料殘留的快 速提取凈化及檢測(cè)方法，所述食品為雞蛋、辣椒以及辣椒油中的一種，其特征在于包括以下 步驟：
[0007] 1?5g雞蛋樣品或辣椒樣品干燥與粉碎后置于容器中，然后加入5?15mL體積比 為1:0. 5?10的乙腈-二氯甲燒混合液，超聲提取1?lOmin，尚心取上清液，重復(fù)提取兩 次，合并提取液，旋蒸濃縮至近干得提取物；用2?10mL正已烷將提取物復(fù)溶，通過(guò)固相萃 取小柱凈化，收集洗脫液，氮吹至干，然后加入1?2mL叔丁基甲醚體積分?jǐn)?shù)為10 %?60% 的叔丁基甲醚-甲醇混合溶液復(fù)溶，過(guò)〇. 22ym濾膜后制得凈化液待測(cè)；
[0008] 或者，稱取0. 5?1. 0g辣椒油樣品，加入5?10mL二氯甲烷體積分?jǐn)?shù)為1 %?5 % 的二氯甲烷-正己烷混合溶液，渦旋混合均勻，加入固相萃取小柱進(jìn)行凈化，收集洗脫液， 氮吹至干，然后加入lmL叔丁基甲醚體積分?jǐn)?shù)為10%?40%的叔丁基甲醚-甲醇混合溶液 復(fù)溶，過(guò)0. 22ym濾膜后用超快速液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UFLC-MS/MS)檢測(cè)。
[0009] 上述UFLC-MS/MS檢測(cè)的檢測(cè)條件如下：
[0010] 色譜柱：AgilentEclipsePlus018柱（lOOmmX2.lmm, 1. 8ym);
[0011] 流動(dòng)相：〇. 1 %?1 %甲酸水溶液A，0. 1 %?1 %甲酸乙腈溶液B;
[0012] 柱溫：40.0°C;
[0013] 流速：0? 45mL/min；
[0014] 進(jìn)樣量：5.0yL;
[0015] 梯度洗脫程序：0 ?2.Omin，10 % ?95 %B;2. 00 ?4. 50min，95 %B;4. 50 ? 4. 51min, 95%?10%B;4. 51 ?6. 50min，10%B;
[0016] 離子源：電噴霧離子源；
[0017] 掃描方式：正離子掃描方式（ESI+);
[0018] 定量檢測(cè)方式：多反應(yīng)檢測(cè)模式（MRM);
[0019] 電噴霧電壓：4500V;
[0020] 霧化器壓力：344. 8kPa(5〇psi);
[0021] 氣簾氣壓力：275. 9kPa(40.Opsi);
[0022] 碰撞氣壓力：41. 4kPa(6.Opsi);
[0023] 離子源溫度：500°C;
[0024] 掃描時(shí)間：50ms;
[0025] 碰撞室出口電壓：10. 0V;
[0026] 碰撞室入口電壓：10. 0V。
[0027] 作為優(yōu)選，上述檢測(cè)方法中，乙腈_二氯甲烷混合液的體積比為1: 1，能有效提取 雞蛋和辣椒樣品中的四種蘇丹紅染料（I、II、III和IV四種類型），尤其是蘇丹紅III和蘇 丹紅IV，同時(shí)解決以二氯甲烷為提取液時(shí)雞蛋樣品容易松散、不易實(shí)現(xiàn)有效地固液分離等 問(wèn)題。
[0028] 作為優(yōu)選，所述步驟（1)中的叔丁基甲醚-甲醇混合溶液中叔丁基甲醚的體積分 數(shù)均為40%，能有效溶解目標(biāo)分析物，降低基質(zhì)效應(yīng)。
[0029] 作為優(yōu)選，所述固相萃取小柱為中性氧化鋁柱、C18固相萃取柱和強(qiáng)陽(yáng)離子固相萃 取柱中的一種，進(jìn)一步，所述固相萃取小柱為強(qiáng)陽(yáng)離子固相萃取柱，這樣能有效凈化樣品基 質(zhì)。
[0030] 作為優(yōu)選，所述二氯甲烷-正已烷混合溶液中二氯甲烷的體積分?jǐn)?shù)為5%，能有效 溶解辣椒油中殘留的蘇丹紅染料。
[0031] 作為優(yōu)選，所述雞蛋樣品為去殼后的生雞蛋或熟雞蛋中的一種，所述辣椒樣品為 鮮辣椒、干辣椒、辣椒粉或辣椒醬中的一種。<