專利名稱：攜帶肽的納米顆粒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及特別用于在醫(yī)學(xué)中使用的攜帶肽的納米顆粒，并且包括用于治療病癥例如血糖調(diào)節(jié)的方法。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及包括用于治療哺乳動(dòng)物且特別是人的組合物和產(chǎn)品，以及制備且施用此類組合物和產(chǎn)品的方法。生物活性試劑例如肽通常具有弱穩(wěn)定性，特別是熱穩(wěn)定性，這可能限制在制備、加工、貯存和/或遞送過程中可以對(duì)所述試劑實(shí)施的條件。例如，胰島素廣泛用于例如I型和2型糖尿病的控制和治療中。用于人使用的胰島素的醫(yī)學(xué)制劑一般用一種或多種防腐劑和 /或穩(wěn)定劑配制。此外，有限的胃腸道穩(wěn)定性一般呈現(xiàn)對(duì)于生物活性肽例如胰島素的有效經(jīng)口施用的障礙。仍存在對(duì)于能夠攜帶和/或穩(wěn)定化生物活性肽包括胰島素的組合物和用于將此類活性肽遞送給受試者的方法的未滿足的需要。發(fā)明概述本發(fā)明通過提供用于穩(wěn)定化和遞送活性試劑例如肽的合適活性劑攜帶組分，即與活性劑連接、結(jié)合、締合或以其他方式偶聯(lián)的組分來解決上述困難。本發(fā)明提供了納米顆粒，其如本文所述包含金屬核、配體的冠(corona)和與一個(gè)或多個(gè)配體結(jié)合的活性劑。以這種方式，本發(fā)明的納米顆粒提供了用于生物活性肽例如胰島素的載體或遞送組分，所述肽從而可以得到穩(wěn)定化。在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了包含下述的納米顆粒(i)包括金屬的核；和(ii)包括共價(jià)連接至核的多個(gè)配體的冠，其中所述配體中的至少一種包括碳水化合物部分；和(iii)其中至少一種肽與冠非共價(jià)結(jié)合。在一些情況下，肽可以與冠可逆和/或非共價(jià)結(jié)合。肽可以這樣與冠結(jié)合，從而使得在使納米顆粒與生理溶液例如鹽水溶液接觸后，至少部分或更多的結(jié)合肽從納米顆粒中釋放。例如通過允許肽與其受體相互作用，釋放可以促進(jìn)活性肽的生物學(xué)效應(yīng)。一般地，肽將是生物活性肽，即能夠刺激哺乳動(dòng)物受試者中的生理學(xué)應(yīng)答。在依照本發(fā)明的一些情況下，肽可以選自胰島素、GLP-1、IGFU IGF2、松弛素、INSL5、INSL6、INSL7、胰腺多肽(PP)、肽酪氨酸酪氨酸(PTT)、神經(jīng)肽Y、催產(chǎn)素、加壓素、GnRH、TRH、CRH、GHRH/ 生長抑素、FSH、LH、TSH、CGA、催乳素、C1IP、ACTH、MSH、內(nèi)啡肽、促脂解素、GH、降鈣素、PTH、抑制素、松弛素、hCG、HPL、胰高血糖素、胰島素、生長抑素、褪黑激素、胸腺素、thmulin、胃泌素、胃生長素(ghrelin)、促胸腺生成素、CCK> GIP分泌素、桑黃素(motin)VIP、腸高血糖素、IGF-U IGF-2、瘦蛋白、脂連蛋白、抵抗素骨鈣素、腎素、EPO^K三醇、ANP、BNP、趨化因子、細(xì)胞因子、脂肪因子及其所有生物學(xué)活性類似物。因此，在特定情況下，肽可以能夠刺激哺乳動(dòng)物受試者中血糖水平的減少。例如，肽可以包含單體和/或二聚體人胰島素或由單體和/或二聚體人胰島素組成。此外，肽可以包含GLP-1或其類似物或由GLP-1或其類似物組成。此外，至少一種肽可以包含上文指定的兩種或更多種肽的組合，例如膜島素和GLP-1、或膜島素和GLP-1類似物。
在依照本發(fā)明的一些情況下，所述碳水化合物部分可以包含單糖和/或二糖。碳水化合物部分可以如本文進(jìn)一步定義的，包括碳水化合物模擬物。碳水化合物部分可以經(jīng)由選自下述的接頭共價(jià)連接至核含硫接頭、含氨基接頭、含磷酸酯接頭和含氧接頭。在一些情況下，接頭包含至少兩個(gè)碳的烷基鏈。依照本發(fā)明，包含碳水化合物部分的所述至少一種配體在一些情況下可以選自2' _疏乙基_ ct _D_卩比喃半乳糖昔、2' _疏乙基-β-D-卩比喃匍萄糖昔、2' _疏乙基-2-乙酰胺-2-脫氧-β -D-吡喃葡萄糖苷、5'-巰戊基-2-脫氧-2-咪唑乙酰胺-α，β -D-吡喃葡萄糖苷和2’ -巰乙基-a -D-吡喃葡萄糖苷，其中包含碳水化合物部分的所述至少一種配體經(jīng)由其硫原子共價(jià)連接至核。本文特別考慮共價(jià)連接至核的所述多個(gè)配體可以包含至少第一配體和第二配體，其中所述第一個(gè)和第二配體是不同的。例如，第一個(gè)和第二配體可以如下(a)所述第一配體包含2，-巰乙基- a -D-吡喃半乳糖苷，并且所述第二配體包含1_氨基-17-疏基-3，6, 9, 12, 15,-五氧雜-十七燒醇；(b)所述第一配體包含2 '-巰乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷或2'-巰乙基-a -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含5 '-巰戊基-2-脫氧-2-咪唑乙酰胺-α，β -D-吡喃葡萄糖苷；(C)所述第一配體包含2 '-巰乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷或2'-巰乙基-a -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇；或(d)所述第一配體包含2'-巰乙基-2-乙酰胺-2-脫氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇，并且其中所述第一個(gè)和第二配體經(jīng)由其各自的硫原子共價(jià)連接至核。在一些情況下，第一配體可以包含碳水化合物部分，并且所述第二配體是非碳水化合物配體。配體中的一個(gè)或多個(gè)可以包含氨基。特別地，第二配體可以包含經(jīng)由其硫原子共價(jià)連接至核的1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇。如本文進(jìn)一步描述的，當(dāng)不同配體存在于納米顆粒上時(shí)，它們可以以例如特定限定的比例或比例范圍存在。例如，第一配體和所述第二配體可以以范圍為1:40-40:1、1:10-10:1或甚至1:2-2:1的比例存在于納米顆粒上。已發(fā)現(xiàn)依照本發(fā)明的納米顆?？梢蕴峁┮栽S多種形成冠的配體。例如，在一些情況下，冠包含至少5個(gè)配體/核,例如約10 -約1000個(gè)配體/核或44-106個(gè)配體/核。結(jié)合的肽分子數(shù)目/核并無特別限制。對(duì)于特定應(yīng)用，可能希望采用少至1、2、3或4種肽/核，而在其他情況下，本發(fā)明的納米顆?？梢园辽?種或更多種結(jié)合的肽分
子/核。依照本發(fā)明，納米顆粒核在一些情況下可以包含選自下述的金屬Au、Ag、Cu、Pt、Pd、Fe、Co、Cd、Gd、Zn或其任何組合。特定金屬組合和特定核組成在本文中進(jìn)一步描述。依照本發(fā)明的納米顆粒核在一些情況下可以具有在約O. 5nm-約50nm,例如約Inm-約IOnm或約1. 5nm-約2nm的范圍中的直徑。依照本發(fā)明，所述至少一種肽可以包含至少兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或更多個(gè)不同種類的肽。特別地，納米顆?？梢园c相同納米顆粒的冠結(jié)合的胰島素和GLP-1。與單個(gè)種類的肽的結(jié)合相比較，與納米顆粒結(jié)合的超過一個(gè)種類的肽的存在在特定情況(例如特定臨床情況)中可以是優(yōu)選的。特別地，肽的組合可以這樣在納米顆粒上攜帶，從而使得肽執(zhí)行互相有利或互補(bǔ)的功能和/或協(xié)作例如以協(xié)同方式作用。超過一個(gè)種類的存在可以用于治療一種或多種病狀和用于一種或多種治療適應(yīng)癥的目的。依照本發(fā)明，本發(fā)明的納米顆?？梢园哂卸r(jià)狀態(tài)的組分，例如具有二價(jià)狀態(tài)的金屬或化合物，或其氧化物或鹽。例如，具有以二價(jià)狀態(tài)存在的能力的金屬或金屬絡(luò)合物是特別有用的。此類組分可以在加入時(shí)處于二價(jià)狀態(tài)，或可以在加入后轉(zhuǎn)化成二價(jià)狀態(tài)。二價(jià)組分的氧化物和鹽也是有用的且可以直接加入或在加入后原位形成。在二價(jià)組分的有用的鹽中包括鹵鹽，例如氯化物、碘化物、溴化物和氟化物。此類二價(jià)組分可以包括例如鋅、鎂、銅、鎳、鈷、鎘或鈣，及其氧化物和鹽。組分希望地以足以產(chǎn)生穩(wěn)定化效應(yīng)的量和/或這 樣的量存在，其足以增強(qiáng)肽與冠的結(jié)合至大于在不存在具有二價(jià)狀態(tài)的組分的情況下肽與冠的結(jié)合水平的水平。在一些情況下，具有二價(jià)狀態(tài)的組分希望地以對(duì)于核金屬(例如金)約O. 5-2. O當(dāng)量，或任選對(duì)于核金屬(例如金)約O. 75-1. 5當(dāng)量的量存在。在本發(fā)明的背景中，“當(dāng)量”可以是摩爾當(dāng)量，例如1. O當(dāng)量的鋅可以視為意指與納米顆粒的核中的金原子數(shù)目相同數(shù)目的鋅原子或Zn2+陽離子。二價(jià)組分在一些情況下可以存在于納米顆粒的冠中。本文特別考慮由于在納米顆粒合成的過程中包括二價(jià)組分，二價(jià)組分可以包括在納米顆粒中，包括在納米顆粒的冠中。另外地或備選地，二價(jià)組分可以在納米顆粒合成后加入。在依照本發(fā)明的一些情況下，二價(jià)組分例如鋅可以選自=Zn2+和ZnO。例如，鋅可以以ZnCl2的形式。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的多個(gè)納米顆粒。例如，多個(gè)可以是100、1000,100000個(gè)或更多個(gè)。多個(gè)可以作為結(jié)合形式，懸液或一起包含在單個(gè)包裝、容器或載體中。在特定情況下，多個(gè)可以采取一個(gè)或多個(gè)劑量(例如限定數(shù)量的肽或肽活性單位)的形式，例如以治療劑量或限定數(shù)目的劑量的形式。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了包含下述的納米顆粒(i)包括金屬的核；(ii)包含共價(jià)連接至核的多個(gè)配體的冠，其中所述多個(gè)配體包含至少第一配體和第二配體，其中(a)所述第一配體包含2，-巰乙基-a -D-吡喃半乳糖苷，并且所述第二配體包含1_氨基-17-疏基-3，6, 9, 12, 15,-五氧雜-十七燒醇；(b)所述第一配體包含2 '-巰乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷或2 '-巰乙基-a -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含5 '-巰戊基-2-脫氧-2-咪唑乙酰胺-α，β -D-吡喃葡萄糖苷；(C)所述第一配體包含2 '-巰乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷或2'-巰乙基-a -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇；或(d)所述第一配體包含2'-巰乙基-2-乙酰胺-2-脫氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇，并且其中所述第一個(gè)和第二配體經(jīng)由其各自的硫原子共價(jià)連接至核。依照本發(fā)明的這個(gè)方面的納米顆?？梢园r(jià)組分，例如金屬或金屬絡(luò)合物。一種特別有用的組分是鋅。二價(jià)組分在一些情況下可以存在于納米顆粒的冠中。本文特別考慮由于在納米顆粒合成的過程中包括二價(jià)組分，二價(jià)組分可以包括在納米顆粒中，包括在納米顆粒的冠中。另外地或備選地，二價(jià)組分可以在納米顆粒合成后加入。在依照本發(fā)明的一些情況下，二價(jià)組分例如鋅可以選自Zn2+和ZnO。例如，鋅可以以ZnCl2的形式。其他二價(jià)材料、其鹽和氧化物可以如本文公開的使用。組分希望地以足以產(chǎn)生穩(wěn)定化效應(yīng)的量和/或這樣的量存在，其足以增強(qiáng)肽與冠的結(jié)合至大于在不存在具有二價(jià)狀態(tài)的組分的情況下肽與冠的結(jié)合水平的水平。在一些情況下，具有二價(jià)狀態(tài)的組分希望地以對(duì)于核金屬(例如金)約0. 5-2. 0當(dāng)量，或任選對(duì)于核金屬(例如金)約0. 75-1. 5當(dāng)量的量存在。在本發(fā)明的背景中，“當(dāng)量”可以是摩爾當(dāng)量，例如1.0當(dāng)量的鋅可以視為意指與納米顆粒的核中的金原子數(shù)目相同數(shù)目的鋅原子或Zn2+陽離子。
在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的多個(gè)納米顆粒和一種或多種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑的藥物組合物。在一些情況下，藥物組合物可以配制用于通過靜脈內(nèi)(1.v.)、肌內(nèi)(1.m.)、皮內(nèi)(1.d.)或皮下(s.c)途徑施用于哺乳動(dòng)物受試者。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了穩(wěn)定化至少一種肽的方法，其包括在允許至少一種肽與納米顆粒的冠結(jié)合的條件下，使至少一種肽與如本文定義的本發(fā)明的納米顆粒接觸。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了降低有此需要的哺乳動(dòng)物受試者中的血糖的方法，其包括施用治療有效量的本發(fā)明的納米顆粒，例如具有與冠結(jié)合的胰島素和/或GLP-1的納米顆粒。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了治療有此需要的哺乳動(dòng)物受試者中的糖尿病的方法，其包括施用治療有效量的本發(fā)明的納米顆粒，例如具有與冠結(jié)合的胰島素和/或GLP-1的納米顆粒。本發(fā)明的納米顆?；虬{米顆粒的藥物組合物可以通過任何合適的施用途徑施用于受試者。在特定情況下，本發(fā)明的納米顆?；虬黾{米顆粒的藥物組合物可以靜脈內(nèi)(1. V.)、肌內(nèi)(1. m.)、皮內(nèi)(1. d.)或皮下(s. c)施用。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了用于在醫(yī)學(xué)治療的方法中使用的本發(fā)明的納米顆粒。例如通過將本發(fā)明的一個(gè)或一個(gè)多種納米顆粒與一種或多種藥學(xué)可接受的賦形劑或載體組合，納米顆?？梢耘渲朴糜谒帉W(xué)用途。本發(fā)明的納米顆粒或包含所述納米顆粒的藥物組合物可以配制用于通過用于遞送給受試者的任何合適途徑施用。特別地，本發(fā)明的納米顆?；虬黾{米顆粒的藥物組合物可以配制用于靜脈內(nèi)(1. V.)、肌內(nèi)(1.m.)、皮內(nèi)(1.d.)或皮下(s. c)施用。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了用于在降低有此需要的哺乳動(dòng)物受試者中的血糖和/或治療有此需要的哺乳動(dòng)物受試者中的糖尿病的方法中使用的本發(fā)明的納米顆粒(例如具有與冠結(jié)合的胰島素和/或GLP-1的納米顆粒)。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的納米顆粒(例如具有與冠結(jié)合的胰島素和/或GLP-1的納米顆粒)在制備用于在降低有此需要的哺乳動(dòng)物受試者中的血糖和/或治療糖尿病的方法中使用的藥物中的用途。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了包含下述的制品
本發(fā)明的至少一種納米顆粒；用于容納至少一種納米顆粒的容器；和插頁和/或標(biāo)簽。在進(jìn)一步方面,本發(fā)明提供了用于形成中觀(mesoscopic)多肽或蛋白質(zhì)簇的方法，所述簇具有本發(fā)明的一種或多種納米顆粒包埋在其中，所述方法包括在環(huán)境溫度使所述多肽或蛋白質(zhì)與所述一種或多種納米顆粒接觸。在一些情況下，環(huán)境溫度可以是15。。-30°C，例如 200C -250C o在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了用于解離一個(gè)或多個(gè)簇的方法，所述一個(gè)或多個(gè)簇·包含具有本發(fā)明的一種或多種納米顆粒包埋在其中的中觀肽或蛋白質(zhì)簇，所述方法包括對(duì)所述簇實(shí)施35°C-肽或蛋白質(zhì)的解鏈溫度(Tm)的溫度，從而促使所述一個(gè)或多個(gè)簇解離成個(gè)別納米顆粒-肽絮凝劑。在進(jìn)一步方面，本發(fā)明提供了用于從溶液中的一種或多種納米顆粒-肽絮凝劑中釋放單體肽的方法，所述方法包括增加溶劑的離子強(qiáng)度，其中所述納米顆粒-肽絮凝劑包含本發(fā)明的一種或多種納米顆粒。在一些情況下，該方法包括所述一種或多種納米顆粒-肽絮凝劑在生物學(xué)流體例如血漿、間質(zhì)液或唾液中的溶解。本發(fā)明包括所述方面和優(yōu)選特征的組合，除了其中此類組合明顯不允許或陳述為特別避免之外。本發(fā)明的這些和進(jìn)一步方面和實(shí)施方案在下文且就伴隨實(shí)施例和附圖而言進(jìn)一步詳細(xì)描述。附圖簡述

圖1 顯示了具有以 9:1 比例的 GlcC2:GlcNAc “NP_GlcC2 (9)GlcNAc (I)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖2 顯示了具有以 4:1 比例的 GlcC2:GlcNAc “NP_GlcC2 (4)GlcNAc (I)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖3 顯示了具有以 1:1 比例的 GlcC2:GlcNAc “NP_GlcC2 (I)GlcNAc (I)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖4 顯示了具有以 1:9 比例的 GlcC2:GlcNAc “NP_GlcC2 (I)GlcNAc (9)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖5 顯示了具有以 1:1 比例的 GlcC2: a-Gal “NP_GlcC2 (I) a-Gal (I)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖6 顯示了具有以 1:1 比例的 @GlcC2:EG6NH2 “NP-@ GlcC2 (I) EG6NH2 (I)” 的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖7 顯示了具有以 1:1 比例的 GlcNHAc :EG6NH2 “NP-GlcNHAc (I )EG6NH2 (I)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖8 顯示了具有以 1:1 比例的 a -Glc:EG6NH2 “NP-a-Glc (I )EG6NH2 (I)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖9顯示了具有a -Glc “NP-a-Glc”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖10 顯示了具有以 1:1 比例的 GlcC2:GlcNH_IAA “NP_GlcC2 (I )GlcNH_IAA (I)”的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示；圖11 顯示 7 具有以1:1 比例的 a -Gal: EG6NH2 “NP- a -Gal (I) EG6NH2 (I) ” 的多個(gè)配體的納米顆粒的圖示。在特定例子中，NP-a-Gal (DEG6NH2 (I)納米顆粒在本文中稱為分批NPlO ；圖12顯示了對(duì)于11種不同的納米顆粒冠組合物，結(jié)合的人胰島素(以納摩爾表示)/金量(以納摩爾表示)的胰島素結(jié)合曲線；圖13顯示了 NP- a -Gal (DEG6NH2 (I)納米顆粒{分批#ΝΡ10}的透射電子顯微鏡檢查(TEM)圖像；圖14顯示了通過Α)數(shù)目和B)體積，通過對(duì)于ΜΙ-ΝΡ-10胺-gal (即NP-a-Gal(DEG6NH2 (I)納米顆粒)的動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測(cè)定的粒度分布曲線圖；圖15顯示了通過A)數(shù)目和B)體積，通過對(duì)于胰島素結(jié)合的M1-NP-10胺_gal(SPNP- a -Gal (1)EG6NH2 (I)納米顆粒的動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測(cè)定的粒度分布曲線圖； 圖16顯示了對(duì)于具有所示溫度峰的α-半乳糖-EG-胺-Au納米顆粒{分批■Ρ10}的實(shí)驗(yàn)熱重量分析(TGA)數(shù)據(jù)；圖17顯示了與金納米顆粒結(jié)合的胰島素的曲線圖，其中菱形指示在不存在鋅的情況下的納米顆粒，三角形指示在1. 33當(dāng)量的鋅的存在下合成的納米顆粒，并且圓形指示在不存在鋅的情況下合成的納米顆粒，在合成后已向其中加入1. 33當(dāng)量的鋅；圖18顯示了在不同量的金納米顆粒下，GLP-1與金納米顆粒的結(jié)合；圖19顯示了顯示來自包含GLP-1和胰島素的納米顆粒制劑的GLP-1和胰島素的MALDI蹤跡；圖20顯示了顯示來自包含GLP-1和胰島素的納米顆粒制劑的GLP-1和胰島素的HPLC蹤跡。發(fā)明詳述在描述本發(fā)明中，將采用下述術(shù)語并且意于如下所示定義。如本文使用的，“納米顆?！敝妇哂屑{米級(jí)別的顆粒，并且不意于傳達(dá)任何特別形狀限制。特別地，“納米顆?！卑{米球、納米管、納米盒、納米簇、納米棒等。在特定實(shí)施方案中，本文考慮的納米顆粒和/或納米顆粒核一般具有多面體或球體幾何學(xué)。包含多個(gè)含碳水化合物配體的納米顆粒已在例如W02002/032404、W02004/108165, W02005/116226, W02006/037979, W02007/015105, W02007/122388,W02005/091704 (其各自的完整內(nèi)容特別通過引用合并入本文)中描述，并且此類納米顆?？梢砸勒毡景l(fā)明使用。此外，包含由有機(jī)化合物官能化(例如經(jīng)由硫醇-金鍵)的氧化鐵鐵氧體(具有式XFe2O4,其中X=Fe、Μη或Co)的磁核的金涂布納米顆粒在于2009年9月25日提交的未公開的歐洲專利申請(qǐng)?zhí)枽ウ?9382185. 8 (其完整內(nèi)容特別通過引用合并入本文)中描述，并且特別考慮用于作為依照本發(fā)明的納米顆粒/納米顆粒核使用。如本文使用的，“冠”指層或涂層，其可以部分或完全覆蓋納米顆粒核的暴露表面。冠包括多個(gè)配體，其包括至少一個(gè)碳水化合物部分。因此，冠可以視為圍繞或部分圍繞金屬性核的有機(jī)層。在特定實(shí)施方案中，冠提供和/或參與納米顆粒核的鈍化。因此，在一些情況下，冠可以包括基本上穩(wěn)定化含金屬核的足夠完全的涂布層。然而，本文特別考慮具有核的特定納米顆粒，例如包括由貴金屬涂布的含金屬氧化物的內(nèi)核，可以包括僅部分涂布核表面的冠。如本文使用的，“肽”意于包含氨基酸的任何序列，且特別包括肽、多肽、蛋白質(zhì)(包括具有二級(jí)、三級(jí)和/或四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì))及其片段。表達(dá)“與……結(jié)合的肽”特別意于包含肽的部分(但可以包括整個(gè))氨基酸序列，其與納米顆粒的多個(gè)配體中的一個(gè)或多個(gè)的一個(gè)或多個(gè)部分(例如化學(xué)基團(tuán)或部分)形成鍵合相互作用。在特定實(shí)施方案中，肽可以具有 <500kDa、<IOOkDa, <50kDa，例如高達(dá) 20kDa 的分子量。相應(yīng)地，在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含下述的納米顆粒(i)包括金屬的核；(ii)包括共價(jià)連接至核的多個(gè)配體的冠，其中所述配體中的至少一種包括碳水化合物部分；和(iii)與冠結(jié)合的至少一種肽。
術(shù)語“結(jié)合的”意于包括在兩個(gè)組分之間的物理和/或化學(xué)結(jié)合。該術(shù)語包括任何形式的化學(xué)連接，例如共價(jià)、離子、氫鍵合或分子間力，例如范德華力或靜電力。該術(shù)語包括物理偶聯(lián)或連接。這個(gè)物理和或化學(xué)結(jié)合可以意于是可逆的，即組分可以是彼此分離或解離的，例如以從載體組分中釋放活性組分。肽可以與冠可逆結(jié)合。特別地，特別考慮肽可以與納米顆粒的部分非共價(jià)結(jié)合。不希望受任何理論束縛，目前認(rèn)為肽可以參與與一個(gè)或多個(gè)配體的一種或多種可逆結(jié)合相互作用，所述一個(gè)或多個(gè)配體提供納米顆粒的冠。特別地，氨基酸序列的部分可以參與與一個(gè)或多個(gè)配體的氫鍵合、范德華力和/或靜電作用(例如與暴露配體的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)相互作用)。肽結(jié)合可以涉及與納米顆粒的一個(gè)或多個(gè)配體的吸附、吸收或其他直接或間接相互作用。如本文就本發(fā)明的特定實(shí)施方案而言描述的，肽可以這樣結(jié)合，從而使得在使納米顆粒與生理溶液接觸后，結(jié)合肽的至少一部分或部分從納米顆粒中釋放。如本文描述的，肽可以以這樣的方式與納米顆粒結(jié)合，從而使得肽在結(jié)合的同時(shí)是穩(wěn)定化的(例如熱穩(wěn)定化的)，但可以以生物學(xué)活性的形式釋放且獲得(例如，可釋放的，從而使得肽可通過ELISA檢測(cè)和/或能夠在體外或體內(nèi)系統(tǒng)中發(fā)揮至少一種生物作用，其為游離肽的特征)。特別地，當(dāng)肽包括(人)胰島素時(shí)，肽可以這樣與納米顆粒結(jié)合，從而使得胰島素結(jié)合的納米顆粒的懸液在用于(人)胰島素的ELISA中給出陽性結(jié)果和/或在對(duì)其施用后對(duì)哺乳動(dòng)物受試者中的血糖水平發(fā)揮作用。考慮多種釋放動(dòng)力學(xué)用于從納米顆粒中解離結(jié)合肽分子，包括二或多相釋放(例如起始快速釋放隨后為更緩慢的后續(xù)釋放相)。例如，釋放可以包括在數(shù)秒或數(shù)分鐘內(nèi)結(jié)合肽分子從納米顆粒中快速溶解，隨后為經(jīng)過至少2、4、6、8或更多小時(shí)的時(shí)期的進(jìn)一步持續(xù)釋放。與例如游離肽的注射相比較，此類釋放動(dòng)力學(xué)在特定情況下可以是有利的，例如當(dāng)需要持續(xù)作用時(shí)。肽(包括但不限于多肽、蛋白質(zhì)或其片段)可以選自胰島素、GLP_1、IGF1、IGF2、松弛素、INSL5、INSL6、INSL7、胰腺多肽(PP)、肽酪氨酸酪氨酸(PTT)、神經(jīng)肽Y、催產(chǎn)素、加壓素、GnRH、TRH、CRH、GHRH/ 生長抑素、FSH、LH、TSH、CGA、催乳素、C1IP、ACTH、MSH、內(nèi)啡肽、促脂解素、GH、降鈣素、PTH、抑制素、松弛素、hCG、HPL、胰高血糖素、生長抑素、褪黑激素、胸腺素、thmulin、胃泌素、胃生長素、促胸腺生成素、CCK> GIP分泌素、桑黃素VIP、腸高血糖素、瘦蛋白、脂連蛋白、抵抗素骨鈣素、腎素、EP0、骨化三醇、ANP、BNP、趨化因子、細(xì)胞因子、脂肪因子及其生物學(xué)活性類似物。在特定實(shí)施方案中，肽能夠刺激哺乳動(dòng)物受試者中血糖水平的減少。因此，在依照本發(fā)明的一些情況下，肽可以包括單體和/或二聚體人胰島素。在依照本發(fā)明的特定情況下，平均起來可以存在至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少10個(gè)或更多個(gè)結(jié)合的肽分子/核。可以存在單個(gè)類型的肽或兩種或更多種不同的肽。當(dāng)兩種不同肽的組合與納米顆粒結(jié)合時(shí)，不同的肽在一些情況下可以以1:10-10:1例如1:2-2:1的比存在。因此，特別考慮了有利地共施用的肽的互補(bǔ)組合。如本文使用的，術(shù)語“碳水化合物”意于包括通式Cn (H2O)m的化合物，其中n=m，并且η大于3。此外，在碳水化合物的定義內(nèi)包括的是碳水化合物類似物/模擬物，其不包括在通式Cn(H2O)m中。碳水化合物類似物/模擬物包括但不限于假糖(碳環(huán)糖)、氨基糖、亞氨基糖和肌醇。氨基糖包括多羥基化哌啶、吡咯烷、吡咯雙烷和吲哚里西啶(indolizidines)。如本文使用的，依照本發(fā)明的納米顆粒包括共價(jià)連 接至含金屬核的多個(gè)配體。配體可以是相同或不同的。在特定實(shí)施方案中，多個(gè)配體可以包括包含至少一個(gè)碳水化合物部分的第一類配體和非碳水化合物配體的第二類。如本文使用的，包括碳水化合物部分的至少一種配體一般包括一個(gè)或多個(gè)糖基團(tuán)，例如單糖、二糖和/或多糖和/或一個(gè)或多個(gè)假糖基團(tuán)(例如選自下述的假糖碳環(huán)糖、氨基糖、亞氨基糖、肌醇、多羥基化哌啶、吡咯烷、吡咯雙烷和吲哚里西啶)。配體共價(jià)連接至納米顆粒的核。因此，術(shù)語“碳水化合物部分”應(yīng)理解為包括碳水化合物的化學(xué)衍生物，例如糖苷，其中配體包括附著至非糖原子或分子的糖基團(tuán)或假糖基團(tuán)(例如選自下述的假糖碳環(huán)糖、氨基糖、亞氨基糖、肌醇、多羥基化哌啶、吡咯烷、吡咯雙烷和吲哚里西啶)。在特定情況下，依照本發(fā)明包括碳水化合物部分的配體可以包括半乳糖、葡萄糖、葡糖胺、N-乙酰葡糖胺、甘露糖、巖藻糖和/或乳糖的糖苷，例如碳水化合物部分可以包括吡喃半乳糖苷和/或吡喃葡萄糖苷。含碳水化合物配體可以經(jīng)由選自下述的接頭共價(jià)連接至核含硫接頭、含氨基接頭和含磷酸酯接頭。還可以使用核的接頭組合。接頭在一些情況下可以包括至少兩個(gè)碳的烷基鏈。連接至核的配體包括一個(gè)或多個(gè)碳水化合物(糖)基團(tuán)，例如包括多糖、寡糖或單個(gè)糖基團(tuán)。配體還可以是糖綴合物，例如糖脂或糖蛋白。除了碳水化合物基團(tuán)外，配體可以另外包括肽基團(tuán)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域、核酸分子(例如DNA/RNA區(qū)段)和/或熒光探針中的一種或多種。在特定情況下，顆粒可以具有在其上固定的超過一個(gè)種類的配體，例如2、3、4、5、10、20或100種不同配體。備選地或另外地，多個(gè)不同類型的顆?？梢砸黄鸩捎谩Ｔ谔囟ㄇ闆r下，連接至顆粒的個(gè)別金屬性核的配體的平均數(shù)目是至少5、至少10或至少20個(gè)配體。數(shù)目可以在范圍10-10,000中，例如10-1，000，更特別地20-500或44-106個(gè)配體/核。優(yōu)選地，基本上所有配體都共價(jià)附著至顆粒的核。用于執(zhí)行這點(diǎn)的方案是本領(lǐng)域已知的(參見例如，W02002/032404、W02004/108165、W02005/116226、W02006/037979、W02007/015105、W02007/122388、W02005/091704)。這可以通過在還原條件下使配體與具有貴金屬例如金的還原末端基團(tuán)反應(yīng)執(zhí)行。產(chǎn)生顆粒的示例性方法采用硫醇衍生的碳水化合物部分，以將配體偶聯(lián)至顆粒。因此，配體衍生為受保護(hù)的二硫化物。方便地，溶于甲醇中的二硫化物保護(hù)的配體可以加入四氯金酸的水溶液中。優(yōu)選的還原劑是硼氫化鈉。在特定實(shí)施方案中，納米顆粒在有機(jī)溶劑中以及在水和生理溶液中是可溶的。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)如本文描述的納米顆粒適合于治療應(yīng)用，并且可以是無毒、可溶和/或在尿中排泄的。
在依照本發(fā)明的特定情況下，包含碳水化合物部分的至少一種配體選自2'-巰乙基-a -D-卩比喃半乳糖昔、2 ' _疏乙基_ P -D-卩比喃匍萄糖昔、2 ' _疏乙基-2-乙酸胺-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷、5'-巰戊基-2-脫氧-2-咪唑乙酰胺- a，^ -D-吡喃葡萄糖苷和2’ -巰乙基-a -D-吡喃葡萄糖苷，并且其中包含碳水化合物部分的所述至少一種配體經(jīng)由硫醇硫共價(jià)連接至核。另外地或備選地，多個(gè)配體可以包括氨基。因此，包含碳水化合物基團(tuán)的配體可以包括氨基(例如作為碳水化合物的部分，例如葡糖胺，和/或作為配體的非碳水化合物部分的組成成分基團(tuán)。此外，當(dāng)多個(gè)配體包括至少一種非碳水化合物配體時(shí)，非碳水化合物基團(tuán)可以包括氨基。至少一種非碳水化合物配體可以包括經(jīng)由硫醇硫共價(jià)連接至核的1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇。依照本發(fā)明的特定實(shí)施方案，多個(gè)配體可以包括包含碳水化合物部分的所述至少一種配體和所述至少一種非碳水化合物配體，其中所述配體是不同的且以1:40-40:1的比例，例如1:10-10:1的比例，更特別1:2-2:1的比例存在于納米顆粒上。納米顆?！昂恕卑ń饘佟：线m的核在例如W02002/032404、W02004/108165、TO2005/116226、TO2006/037979、TO2007/015105、TO2007/122388、W02005/091704 (其各自的完整內(nèi)容特別通過引用合并入本文)中描述，并且此類納米顆粒核可以依照本發(fā)明使用。此外，包括氧化鐵鐵氧體(具有式XFe2O4,其中X=Fe、Mn或Co)的磁核的金涂布的納米顆粒在于2009年9月25日提交的未公開的歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P09382185. 8(其完整內(nèi)容特別通過引用合并入本文)中描述，并且可以依照本發(fā)明使用。在依照本發(fā)明的一些情況下,納米顆粒核包括選自下述的金屬Au、Ag、Cu、Pt、Pd、Fe、Co、Gd、Zn或其任何組合。核可以包括選自下述的鈍態(tài)金屬Au、Ag、Pt、Pd和Cu或其任何組合。在特定實(shí)施方案中，可以采用金屬的特定組合，例如選自下述的金屬組合Au/Fe、Au/Ag、Au/Cu、Au/Ag/Cu、Au/Pt、Au/Pd、Au/Ag/Cu/Pd、Au/Gd、Au/Fe/Cu、Au/Fe/Gd、Au/Fe/Cu/Gd。在依照本發(fā)明的一些情況下，納米顆粒核可以是磁性的。核可以包括NMR活化原子，例如選自下述的金屬M(fèi)n2+、Gd3+、Eu2+、Cu2+、V2+、Co2+、Ni2+、Fe2+、Fe3+ 和鑭系兀素 3+。在依照本發(fā)明的一些情況下，納米顆粒核可以包括半導(dǎo)體，例如選自下述的那種硒化鎘、硫化鎘、締化鎘和硫化鋅。在依照本發(fā)明的一些情況下，納米顆粒核可以包括由選自下述的金屬涂布的金屬氧化物Au、Ag、Cu、Pt、Pd和Zn或其任何組合。金屬氧化物可以有利地具有式XFe2O4，其中X是選自下述的金屬Fe、Mn和Co。在依照本發(fā)明的一些情況下，納米顆粒核可以具有在約0. 5nm-約50nm、例如約Inm-約10nm、更特別地約1. 5nm-約2nm的范圍中的平均直徑。下文作為例子呈現(xiàn)且不應(yīng)解釋為對(duì)于權(quán)利要求的范圍的限制。
實(shí)施例實(shí)施例1-配體的制備2-巰乙基-a-D-半乳糖苷(a-半乳糖C2SH)的制備
權(quán)利要求
1.一種納米顆粒，其包含(i)包括金屬的核；(ii)包括共價(jià)連接至所述核的多個(gè)配體的冠，其中所述配體中的至少一種包括碳水化合物部分；和(iii)與所述冠結(jié)合的至少一種肽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的納米顆粒，其中所述肽與所述冠可逆和/或非共價(jià)結(jié)合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的納米顆粒，其中所述肽這樣與所述冠結(jié)合，從而使得在使所述納米顆粒與生理溶液接觸后，至少部分的結(jié)合肽從所述納米顆粒中釋放。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述肽能夠刺激哺乳動(dòng)物受試者中的生理學(xué)應(yīng)答。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述肽選自胰島素、GLP-1、IGFU IGF2、松弛素、INSL5、INSL6、INSL7、胰腺多肽(PP)、肽酪氨酸酪氨酸(PTT)、神經(jīng)肽Y、催產(chǎn)素、加壓素、GnRH, TRH、CRH、GHRH/ 生長抑素、FSH、LH、TSH、CGA、催乳素、C1IP、ACTH、MSH、 內(nèi)啡肽、促脂解素、GH、降鈣素、PTH、抑制素、松弛素、hCG、HPL、胰高血糖素、胰島素、生長抑素、褪黑激素、胸腺素、thmulin、胃泌素、胃生長素、促胸腺生成素、CCK> GIP分泌素、桑黃素VIP、腸高血糖素、IGF-U IGF-2、瘦蛋白、脂連蛋白、抵抗素骨鈣素、腎素、ΕΡ0、骨化三醇、 ANP、BNP、趨化因子、細(xì)胞因子、脂肪因子及其生物學(xué)活性類似物。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或權(quán)利要求5的納米顆粒，其中所述肽能夠刺激哺乳動(dòng)物受試者中血糖水平的減少。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或權(quán)利要求6的納米顆粒，其中所述肽是單體和/或二聚體人胰島素。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述碳水化合物部分包含單糖和/或二糖。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的納米顆粒，其中所述碳水化合物部分包含半乳糖、葡萄糖、葡糖胺、N-乙酰葡糖胺、甘露糖、巖藻糖和/或乳糖的糖苷。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的納米顆粒，其中所述碳水化合物部分包含吡喃半乳糖苷和/或吡喃葡萄糖苷。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述碳水化合物部分經(jīng)由選自下述的接頭共價(jià)連接至所述核含硫接頭、含氨基接頭、含磷酸酯接頭和含氧接頭。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的納米顆粒，其中所述接頭包含至少兩個(gè)碳的烷基鏈。
13.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中包含碳水化合物部分的所述至少一種配體選自2'-巰乙基-α-D-吡喃半乳糖苷、2'-巰乙基_β-D-吡喃葡萄糖苷、 2'-巰乙基-2-乙酰胺-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷、5'-巰戊基-2-脫氧-2-咪唑乙酰胺-a，β -D-吡喃葡萄糖苷和2’ -巰乙基-a -D-吡喃葡萄糖苷，并且其中包含碳水化合物部分的所述至少一種配體經(jīng)由其硫原子共價(jià)連接至所述核。
14.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中共價(jià)連接至所述核的所述多個(gè)配體可以包含至少第一配體和第二配體，其中所述第一個(gè)和第二配體是不同的。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的納米顆粒，其中Ca)所述第一配體包含2’ -巰乙基-a -D-吡喃半乳糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-疏基-3，6, 9, 12, 15,-五氧雜-十七燒醇；(b)所述第一配體包含2'-巰乙基-D-卩比喃葡萄糖苷或2'-巰乙基-a-D-卩比喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含5'-巰戊基-2-脫氧-2-咪唑乙酰胺-α，β-D-吡喃葡萄糖苷；(c)所述第一配體包含2'-巰乙基_β-D-吡喃葡萄糖苷或2'-巰乙基-a-D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇；或Cd)所述第一配體包含2'-巰乙基-2-乙酰胺-2-脫氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇，并且其中所述第一個(gè)和第二配體經(jīng)由其各自的硫原子共價(jià)連接至所述核。
16.根據(jù)權(quán)利要求14的納米顆粒，其中所述第一配體包含碳水化合物部分，并且所述 第二配體是非碳水化合物配體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的納米顆粒，其中所述第二配體包含氨基。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的納米顆粒，其中所述第二配體包含經(jīng)由其硫原子共價(jià)連接至所述核的1_氨基-17-疏基-3，6, 9, 12, 15,-五氧雜-十七燒醇。
19.其中權(quán)利要求14- 18中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述第一配體和所述第二配體以1:40-40:1的比例存在于所述納米顆粒上。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的納米顆粒，其中所述比例是1:10-10:1。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的納米顆粒，其中所述比例是1:2-2:1。
22.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述冠包含至少5個(gè)配體/核。
23.根據(jù)權(quán)利要求22的納米顆粒，其中所述冠包含約10-約1000個(gè)配體/核。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的納米顆粒，其中所述冠包含44-106個(gè)配體/核。
25.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中每個(gè)核結(jié)合至少5個(gè)或更多個(gè)肽分子。
26.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核包含選自下述的金屬Au、Ag、Cu、Pt、Pd、Fe、Co、Gd、Zn 或其任何組合。
27.根據(jù)權(quán)利要求26的納米顆粒,其中所述核包含選自下述的鈍態(tài)金屬Au、Ag、Pt、Pd和Cu或其任何組合。
28.根據(jù)權(quán)利要求26的納米顆粒,其中所述核包含選自下述的金屬組合Au/Fe、Au/Ag、Au/Cu、Au/Ag/Cu、Au/Pt、Au/Pd、Au/Ag/Cu/Pd、Au/Gd、Au/Fe/Cu、Au/Fe/Gd、Au/Fe/Cu/Gd。
29.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核是磁性的。
30.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核進(jìn)一步包含選自下述的NMR活化原子Mn2+、Gd3+、Eu2+、Cu2+、V2+、Co2+、Ni2+、Fe2+、Fe3+ 和鑭系元素 3+。
31.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核進(jìn)一步包含半導(dǎo)體。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的納米顆粒，其中所述半導(dǎo)體選自硒化鎘、硫化鎘、碲化鎘和硫化鋅。
33.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核包含由選自下述的金屬涂布的金屬氧化物Au、Ag、Cu、Pt、Pd和Zn或其任何組合。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的納米顆粒，其中所述金屬氧化物具有式XFe2O4，其中X是選自下述的金屬:Fe、Mn和Co。
35.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒,其中所述納米顆粒核具有在約O.5nm-約 50nm的范圍中的直徑。
36.根據(jù)權(quán)利要求35的納米顆粒,其中所述直徑在約Inm-約IOnm的范圍中,任選在約1.5nm-約2nm的范圍中。
37.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述納米顆粒包含二價(jià)組分。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分存在于所述納米顆粒的所述冠中。
39.根據(jù)權(quán)利要求37或38的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分選自二價(jià)金屬、二價(jià)金屬化合物或具有二價(jià)狀態(tài)的其他組分。
40.根據(jù)權(quán)利要求37- 39中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分選自鋅、鎂、銅、鎳、 鈷、鎘或鈣，及其氧化物和鹽。
41.根據(jù)權(quán)利要求37- 40中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分以足以產(chǎn)生穩(wěn)定化效應(yīng)的量和/或這樣的量存在，相對(duì)于在不存在所述二價(jià)組分的情況下所述肽與所述冠的結(jié)合水平，其足以增強(qiáng)所述肽與所述冠的結(jié)合。
42.根據(jù)權(quán)利要求41的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分以對(duì)于所述核中的所述金屬約.0.5-約2. O當(dāng)量的量存在。
43.根據(jù)權(quán)利要求41的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分以對(duì)于所述核中的所述金屬約.O.75-約1.5當(dāng)量的量存在。
44.根據(jù)權(quán)利要求40的納米顆粒，其中所述鋅選自Zn2+和ZnO。
45.根據(jù)權(quán)利要求44的納米顆粒，其中所述鋅包含ZnCl2。
46.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述至少一種肽包含GLP-1。
47.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述納米顆粒包含與所述冠結(jié)合的至少兩個(gè)不同種類的肽。
48.根據(jù)權(quán)利要求47的納米顆粒，其中所述至少兩個(gè)不同種類的肽包含胰島素和 GLP-1。
49.多種納米顆粒，其如權(quán)利要求1- 48中任一項(xiàng)中定義的。
50.根據(jù)權(quán)利要求49的多種納米顆粒,其中所述納米顆粒核具有在約O.5nm-約50nm 的范圍中的平均直徑。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的多種納米顆粒，其中所述平均直徑在約Inm-約IOnm的范圍中， 任選在約1. 5nm-約2nm的范圍中。
52.—種納米顆粒，其包含(i)包括金屬的核；(ii)包含共價(jià)連接至所述核的多個(gè)配體的冠，所述多個(gè)配體包含至少第一配體和第二配體，其中Ca)所述第一配體包含2，-巰乙基-a -D-吡喃半乳糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-疏基-3，6, 9, 12, 15,-五氧雜-十七燒醇；(b)所述第一配體包含2'-巰乙基-D-吡喃葡萄糖苷或2'-巰乙基-a-D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含5'-巰戊基-2-脫氧-2-咪唑乙酰胺-α，β-D-吡喃葡萄糖苷；(c)所述第一配體包含2'-巰乙基_β-D-吡喃葡萄糖苷或2'-巰乙基-a-D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇；或Cd)所述第一配體包含2'-巰乙基-2-乙酰胺-2-脫氧-β -D-吡喃葡萄糖苷，并且所述第二配體包含1-氨基-17-巰基-3，6，9，12，15，-五氧雜-十七烷醇，并且其中所述第一個(gè)和第二配體經(jīng)由其各自的硫原子共價(jià)連接至所述核。
53.根據(jù)權(quán)利要求52的納米顆粒，其中所述第一配體和所述第二配體以1:40-40:1的比例存在于所述納米顆粒上。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的納米顆粒，其中所述比例是1:10-10:1。
55.根據(jù)權(quán)利要求54的納米顆粒，其中所述比例是1:2-2:1。
56.根據(jù)權(quán)利要求52-55中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述冠包含至少5個(gè)配體/核。
57.根據(jù)權(quán)利要求56的納米顆粒，其中所述冠包含約10-約1000個(gè)配體/核。
58.根據(jù)權(quán)利要求57的納米顆粒，其中所述冠包含44-106個(gè)配體/核。
59.根據(jù)權(quán)利要求52-58中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核包含選自下述的金屬Au、Ag、Cu、Pt、Pd、Fe、Co、Gd、Zn 或其任何組合。
60.根據(jù)權(quán)利要求59的納米顆粒,其中所述核包含選自下述的鈍態(tài)金屬Au、Ag、Pt、Pd和Cu或其任何組合。
61.根據(jù)權(quán)利要求59的納米顆粒,其中所述核包含選自下述的金屬組合Au/Fe、Au/Ag、Au/Cu、Au/Ag/Cu、Au/Pt、Au/Pd、Au/Ag/Cu/Pd、Au/Gd、Au/Fe/Cu、Au/Fe/Gd、Au/Fe/Cu/Gd。
62.根據(jù)權(quán)利要求52-61中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核是磁性的。
63.根據(jù)權(quán)利要求52-62中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核進(jìn)一步包含選自下述的NMR活化原子Mn2+、Gd3+、Eu2+、Cu2+、V2+、Co2+、Ni2+、Fe2+、Fe3+ 和鑭系元素 3+。
64.根據(jù)權(quán)利要求52-63中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核進(jìn)一步包含半導(dǎo)體。
65.根據(jù)權(quán)利要求64的納米顆粒，其中所述半導(dǎo)體選自硒化鎘、硫化鎘、碲化鎘和硫化鋅。
66.根據(jù)權(quán)利要求52-65中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述核包含由選自下述的金屬涂布的金屬氧化物Au、Ag、Cu、Pt、Pd和Zn或其任何組合。
67.根據(jù)權(quán)利要求66的納米顆粒，其中所述金屬氧化物具有式XFe2O4，其中X是選自下述的金屬:Fe、Mn和Co。
68.根據(jù)權(quán)利要求52-67中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述納米顆粒核具有在約0.5nm-約50nm的范圍中的直徑。
69.根據(jù)權(quán)利要求68的納米顆粒，其中所述直徑在約Inm-約IOnm的范圍中，任選在約1.5nm-約2nm的范圍中。
70.根據(jù)權(quán)利要求52-69中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述納米顆粒核包含二價(jià)組分。
71.根據(jù)權(quán)利要求70的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分存在于所述納米顆粒的所述冠中。
72.根據(jù)權(quán)利要求70或權(quán)利要求71的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分選自二價(jià)金屬、二價(jià)金屬化合物或具有二價(jià)狀態(tài)的其他組分。
73.根據(jù)權(quán)利要求70- 72中任一項(xiàng)的納米顆粒，其中所述二價(jià)組分選自鋅、鎂、銅、鎳、鈷、鎘或鈣，及其氧化物和鹽。
74.根據(jù)權(quán)利要求73的納米顆粒，其中所述鋅選自Zn2+和ZnO。
75.根據(jù)權(quán)利要求74的納米顆粒，其中所述鋅包含ZnCl2。
76.多種納米顆粒，其如權(quán)利要求52- 75中任一項(xiàng)中定義的。
77.根據(jù)權(quán)利要求76的多種納米顆粒,其中所述納米顆粒核具有在約O.5nm-約50nm的范圍中的平均直徑。
78.根據(jù)權(quán)利要求77的多種納米顆粒，其中所述平均直徑在約Inm-約IOnm的范圍中，任選在約1. 5nm-約2nm的范圍中。
79.—種藥物組合物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1 - 78中任一項(xiàng)的多種納米顆粒和一種或多種藥學(xué)可接受的載體或賦形劑。
80.根據(jù)權(quán)利要求72的藥物組合物，其中所述組合物配制用于靜脈內(nèi)(1.V.)、肌內(nèi)(1.m.)、皮內(nèi)(1.d.)或皮下(s.c)途徑施用于哺乳動(dòng)物受試者。
81.一種穩(wěn)定化至少一種肽的方法，其包括在允許所述至少一種肽與所述納米顆粒的所述冠結(jié)合的條件下，使所述至少一種肽與如權(quán)利要求1 - 75中任一項(xiàng)中定義的納米顆粒接觸。
82.根據(jù)權(quán)利要求81的方法，其中所述至少一種肽選自胰島素、GLP-1、IGF1、IGF2、松弛素、INSL5、INSL6、INSL7、胰腺多肽(PP)、肽酪氨酸酪氨酸(PTT)、神經(jīng)肽Y、催產(chǎn)素、加壓素、GnRH、TRH、CRH、GHRH/ 生長抑素、FSH、LH、TSH、CGA、催乳素、C1IP、ACTH、MSH、內(nèi)啡肽、促脂解素、GH、降鈣素、PTH、抑制素、松弛素、hCG、HPL、胰高血糖素、胰島素、生長抑素、褪黑激素、胸腺素、thmulin、胃泌素、胃生長素、促胸腺生成素、CCK> GIP分泌素、桑黃素VIP、腸高血糖素、IGF-1、IGF-2、瘦蛋白、脂連蛋白、抵抗素骨鈣素、腎素、ΕΡ0、骨化三醇、ANP、BNP、趨化因子、細(xì)胞因子、脂肪因子及其生物學(xué)活性類似物。
83.根據(jù)權(quán)利要求82的方法，其中所述肽是單體和/或二聚體人胰島素。
84.根據(jù)權(quán)利要求82的方法，其中所述肽是GLP-1或其類似物。
85.根據(jù)權(quán)利要求81- 84中任一項(xiàng)的方法，其中所述至少一種肽是至少兩個(gè)不同種類的肽。
86.根據(jù)權(quán)利要求85的方法，其中所述至少兩個(gè)不同種類的肽包含胰島素和GLP-1。
87.一種降低有此需要的哺乳動(dòng)物受試者中的血糖的方法，其包括施用治療有效量的如權(quán)利要求1 - 48中任一項(xiàng)中定義的納米顆粒。
88.一種治療有此需要的哺乳動(dòng)物受試者中的糖尿病的方法，其包括施用治療有效量的如權(quán)利要求1 - 48中任一項(xiàng)中定義的納米顆粒。
89.根據(jù)權(quán)利要求87或權(quán)利要求88的方法，其中所述施用包含靜脈內(nèi)(1.V.)、肌內(nèi)(1. m.)、皮內(nèi)(1. d.)或皮下(s. c)施用。
90.一種如權(quán)利要求1 - 48中任一項(xiàng)中定義的納米顆粒，其用于在醫(yī)學(xué)治療的方法中使用。
91.用于在醫(yī)學(xué)治療的方法中使用的如權(quán)利要求1-48中任一項(xiàng)中定義的納米顆粒，其中所述肽如權(quán)利要求6、7、46、47或48中任一項(xiàng)中定義的，并且其中所述方法如權(quán)利要求 87 - 89中任一項(xiàng)中定義的。
92.如權(quán)利要求1- 43中任一項(xiàng)中定義的納米顆粒在制備用于在如權(quán)利要求87 - 89中任一項(xiàng)中定義的方法中使用的藥物中的用途，其中所述肽如權(quán)利要求6、7、46、47或48中任一項(xiàng)中定義的。
93.一種制品，其包含如權(quán)利要求1 - 48中任一項(xiàng)中定義的至少一種納米顆粒；用于容納所述至少一種納米顆粒的容器；和插頁和/或標(biāo)簽。
94.一種用于形成中觀肽、多肽或蛋白質(zhì)簇的方法，所述簇具有如權(quán)利要求1 - 78中任一項(xiàng)中定義的一種或多種納米顆粒包埋在其中，所述方法包括在環(huán)境溫度使所述肽、多肽或蛋白質(zhì)與所述一種或多種納米顆粒接觸。
95.根據(jù)權(quán)利要求94的方法，其中所述環(huán)境溫度是15°C-30°C或20°C _25°C。
96.—種用于解離一個(gè)或多個(gè)簇的方法,所述一個(gè)或多個(gè)簇包含具有如權(quán)利要求1 - 78中任一項(xiàng)中定義的一種或多種納米顆粒包埋在其中的中觀肽、多肽或蛋白質(zhì)簇，所述方法包括對(duì)所述簇實(shí)施35°C -所述肽、多肽或蛋白質(zhì)的解鏈溫度(Tm)的溫度，從而促使所述一個(gè)或多個(gè)簇解離成個(gè)別納米顆粒-肽絮凝劑、納米顆粒-多肽絮凝劑或納米顆粒-蛋白質(zhì)絮凝劑。
97.一種用于從溶液中的一種或多種納米顆粒-肽絮凝劑中釋放單體肽的方法，所述方法包括增加溶劑的離子強(qiáng)度，其中所述納米顆粒-肽絮凝劑包含如權(quán)利要求1-78中任一項(xiàng)中定義的一種或多種納米顆粒。
98.根據(jù)權(quán)利要求97的方法，其中所述方法包括所述一種或多種納米顆粒-肽絮凝劑在血漿、間質(zhì)液或唾液中的溶解。
全文摘要
納米顆粒，其包含(i)包括金屬的核；(ii)包括共價(jià)連接至所述核的多個(gè)配體的冠，其中所述配體中的至少一種包括碳水化合物部分；和(iii)與所述冠結(jié)合的至少一種肽。
文檔編號(hào)A61P3/10GK103002922SQ201180035108
公開日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2011年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月10日
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