樣使用溶解產(chǎn)物，并然后執(zhí)行擴(kuò)增，例如NASBA或PCR。
[0180] 根據(jù)由本發(fā)明提出的裝置1的優(yōu)選用途，在微生物10已被溶解并且核酸11已在 反應(yīng)液體或洗脫緩沖劑12中被吸取之后，收集裝置1使得執(zhí)行所述已提取的核酸11的擴(kuò) 增以及檢測(cè)成為可能。為此目的，主要有四個(gè)步驟在溶解之后被執(zhí)行。
[0181] 第一步驟包括提取包含核酸11以及一定數(shù)量的微生物10殘?jiān)?0的緩沖劑12,這 些殘?jiān)谌芙庵蟠嬖谟谝后w12中，這些殘?jiān)S后在將在分析區(qū)域26的水平上進(jìn)行的分 析中不被考慮。在該第一步驟中，載有核酸11和殘?jiān)?0的液體12將經(jīng)由排出通道8從保 持裝置9中排出。在排出通道8的水平上，例如可以具有僅允許具有小于或等于提取的核 酸的尺寸的生物學(xué)成分通過的過濾器。
[0182] 在第二步驟中，該混合物被發(fā)送至用于獲得等分試樣的區(qū)域34中，如在圖2中清 楚地示出。這樣獲得的體積相當(dāng)于120 yl。
[0183] 該等分試樣然后被發(fā)送到標(biāo)記為35的溶解產(chǎn)物分離區(qū)域中的第三步驟。該圖中， 有從彼此完全區(qū)分開的六個(gè)區(qū)域以允許在區(qū)域26的分析通道中分離成20 yl的六倍。在 區(qū)域26的這些通道中，擴(kuò)增借助于被定位在中間區(qū)域36中的用于擴(kuò)增的試劑（諸如核苷 酸）、擴(kuò)增引物和檢測(cè)探針被執(zhí)行。從圖3可以看出，存在位于主卡4正面上的第二中間區(qū) 域37,其包含至少一種酶（如果執(zhí)行PCR的話為一種酶，如果執(zhí)行TMA的話為兩種，并且如 果執(zhí)行NASBA的話為三種）。
[0184] 第四且最后的步驟發(fā)生在區(qū)域26的通道的水平上，如在圖3中清楚地示出的，在 中間區(qū)域37的右邊，檢測(cè)可以在這里被執(zhí)行。
[0185] 因此所有的這些運(yùn)動(dòng)都借助于分配器閥22和泵活塞23被執(zhí)行，分配器閥22和泵 活塞23通過它們的滑動(dòng)運(yùn)動(dòng)（未示于圖中）使得將液體從各個(gè)區(qū)域引導(dǎo)到將允許核酸11 的擴(kuò)增及其隨后的檢測(cè)的其它區(qū)域成為可能。分配器閥22和泵活塞23分別具有密封件38 和39 (清楚地示于圖1中），它們確保了系統(tǒng)的氣密性。
[0186] 實(shí)施例1 :根據(jù)珠子尺寸和珠子堆厚度的微牛物捕獲效率（利用粒子計(jì)數(shù)器）
[0187] 對(duì)于同一個(gè)裝置，這里是用于根據(jù)珠子尺寸和珠子堆厚度的捕獲效率的規(guī)程。
[0188] 1. A. i寸稈：
[0189] 滑動(dòng)板15和17在貫穿實(shí)驗(yàn)的過程中是打開的。
[0190] 對(duì)于該實(shí)驗(yàn)，使用粒子計(jì)數(shù)器，其估算每立方米（m3)的吸入空氣中粒子的量。檢 測(cè)到的粒子以在〇? 3 y m，0. 5 y m，1 y m和5 y m之間的不同的尺寸范疇被分類。
[0191] 三個(gè)測(cè)量周期被執(zhí)行：
[0192] 1 :不使用該裝置的空白標(biāo)準(zhǔn)（Blank reference)測(cè)量。
[0193] 2 :在粒子計(jì)數(shù)器的上游使用該裝置的估算測(cè)量。
[0194] 3 :第二標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量。
[0195] I.B.實(shí)駘：
[0196] 空白標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量被平均。捕獲效率作為使用和不使用該裝置的測(cè)量值的比值被計(jì)算 出。
[0197] 結(jié)果在下面在表1中被示出：
[0198]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 用于收集包含在流體（2)中的微生物（1)的裝置，所述裝置包括： ?包含一組珠子（6)的反應(yīng)模塊（3)， ?至少一個(gè)流體（2)導(dǎo)入導(dǎo)管（40)，其允許流體流進(jìn)入所述模塊（3)， ?至少一個(gè)流體（2)排出導(dǎo)管（41)，其允許已經(jīng)通過所述模塊（3)內(nèi)部的所述流體流 排出， ?在所述模塊（3)內(nèi)的珠子（6)保持裝置（9)， ?至少一種反應(yīng)液體（12)的至少一個(gè)導(dǎo)入通道（7)， ?至少一種反應(yīng)液體（12)的至少一個(gè)排出通道（8)， 反應(yīng)液體（12)的導(dǎo)入通道（7)和排出通道⑶與流體⑵的導(dǎo)入導(dǎo)管（40)和排出導(dǎo) 管（41)在模塊（3)水平處被定位如下： ?用于導(dǎo)入和排出流體的導(dǎo)管（40和41)面對(duì)彼此并同時(shí)封閉模塊（3)，以便最大化流 體⑵和珠子（6)之間的接觸， ?用于一種或多種反應(yīng)液體（12)的通道分別被定位在模塊（3)的兩個(gè)相反端處，并且 ?用于一種或多種反應(yīng)液體（12)的通道（7和8)被定位在一個(gè)平面中，且用于導(dǎo)入和 排出流體的導(dǎo)管（40和41)被沿著一軸線定位，所述軸線粗略地垂直于所述平面。
2. 如權(quán)利要求所述的裝置1，其特征在于，其包括將所述流體和所述反應(yīng)液體與外部 隔離的氣密限制外殼（13)。
3. 如權(quán)利要求1或2的任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，如果所述流體為氣體，那么所 述一組珠子包括涂覆有甘油的珠子。
4. 如權(quán)利要求1或2的任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，如果所述流體為液體，那么所 述模塊包含大體在由用于所述一種或多種反應(yīng)液體的通道形成的平面中延伸的過濾器，導(dǎo) 入導(dǎo)管被定位在過濾器的具有所述一組珠子的一側(cè)上，同時(shí)排出導(dǎo)管被定位在所述過濾器 的沒有珠子的另一側(cè)上。
5. 如權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，如果按以下方式被切開的話， 模塊⑶具有"C"形狀： ?沿著由用于導(dǎo)入（7)和排出（8)反應(yīng)液體的通道形成的平面，以及 ?垂直于由流體的導(dǎo)入導(dǎo)管和排出導(dǎo)管（40和41)形成的軸線。
6. 如權(quán)利要求5所述的裝置，其特征在于，如果沿著穿過所述"C"的中心并切穿所述 "C"的半徑被切開的話，所述模塊具有四邊形形狀。
7. 如權(quán)利要求5或6中任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，用于導(dǎo)入反應(yīng)液體的一個(gè)或多 個(gè)通道位于所述模塊的形狀"C"的一端處，并且用于排出反應(yīng)液體的一個(gè)或多個(gè)通道位于 所述"C"的另一端處。
8. 如權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，所述珠子具有在200和600 ii m 之間的直徑，并且用于將所述珠子保持在所述模塊內(nèi)的裝置包括柵格，所述柵格的孔具有 小于所述珠子且在從100到500 y m的范圍內(nèi)的直徑。
9. 如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的裝置，其特征在于，其包括用于處理所收集的微生 物的另一反應(yīng)模塊，所述模塊包含：
1. 用于分離不感興趣的細(xì)胞殘?jiān)蛞种苿┲T如蛋白質(zhì)、膜的裝置，和/或
2. 用于擴(kuò)增所收集的并與所述抑制劑分離的核酸的裝置，和/或
3.用于檢測(cè)這樣產(chǎn)生的擴(kuò)增子的裝置。
10. 用于收集包含在流體中的微生物的方法，其特征在于，其包括：
1. 經(jīng)由至少一個(gè)流體導(dǎo)入導(dǎo)管引入被懷疑包含微生物的流體，
2. 穿過珠子堆，微生物在所述珠子堆被固定住，
3. 經(jīng)由用于排出所述流體的至少一個(gè)導(dǎo)管排出已從中去除所述微生物的流體，
4. 經(jīng)由至少一個(gè)反應(yīng)液體導(dǎo)入通道引入至少一種反應(yīng)液體，
5. 穿過微生物在那里被固定住的珠子堆，以便使所述微生物處于懸浮，以及
6. 經(jīng)由用于排出反應(yīng)液體的至少一個(gè)通道排出運(yùn)輸微生物的該液體， 流體導(dǎo)管面對(duì)彼此并同時(shí)封閉所述珠子堆，用于導(dǎo)入和排出反應(yīng)液體的通道被定位以 便到達(dá)所有的珠子。
11. 如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，當(dāng)液體穿過所述珠子堆時(shí)，所述珠子通過 外部攪動(dòng)裝置被攪動(dòng)并形成接觸，這使得溶解微生物的膜成為可能，從而使核酸可獲取并 易于被排出。
12. 如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，對(duì)珠子的攪動(dòng)利用超聲波而實(shí)現(xiàn)。
13. 如權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，載有微生物中的一些或全 部的液體被排出到所述裝置的另一反應(yīng)模塊以允許對(duì)所收集的微生物進(jìn)行處理，所述處理 包括：
1. 分離不感興趣的細(xì)胞殘?jiān)蛞种苿?，諸如蛋白質(zhì)、膜，和/或
2. 擴(kuò)增所收集的核酸，和/或
3. 檢測(cè)這樣產(chǎn)生的擴(kuò)增子。
14. 如權(quán)利要求10至13中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：
1. 所測(cè)試的流體包括氣體，
2. 所述氣體穿過所述珠子堆，所述珠子涂覆有甘油，微生物在所述珠子堆處被固定住， 以及
3. 至少一種反應(yīng)液體被引入以便溶解甘油并使所述微生物處于懸浮。
15. 如權(quán)利要求10至13中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于：
1. 所測(cè)試的流體包括液體，
2. 所測(cè)試的液體穿過所述珠子堆并且然后在被排出之前、在去除其包含的微生物之后 穿過過濾器；微生物被固定住，以及
3. 至少一種反應(yīng)液體被引入以便使所述微生物處于懸浮。
16. 如權(quán)利要求14或15中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，液體在經(jīng)由用于排出反應(yīng) 液體的至少一個(gè)通道的排出的部位和用于除去抑制劑和/或用于擴(kuò)增和/或用于檢測(cè)的模 塊之間被過濾。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于從流體中收集微生物的裝置和方法，其包括：包圍珠子的反應(yīng)模塊；允許進(jìn)入所述模塊的至少一個(gè)流體入口導(dǎo)管；允許所述流體在穿過所述模塊之后排出的至少一個(gè)流體出口導(dǎo)管；用于將珠子保持在所述模塊中的裝置；用于至少一種反應(yīng)液體的至少一個(gè)入口通道；用于一種或多種液體的至少一個(gè)出口通道；流體入口和出口導(dǎo)管彼此面對(duì)并封閉所述模塊，以便最大化流體與珠子之間的接觸；用于一種或多種反應(yīng)液體的通道被分別定位在模塊的兩個(gè)相反端處；并且，各反應(yīng)液體通道被定位在一平面中，并且流體入口和出口導(dǎo)管被沿著一軸線定位，并且所述軸線大致垂直于所述平面。
【IPC分類】G01N1-22, C12M1-26
【公開號(hào)】CN104583752
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380043049
【發(fā)明人】M·蓋伊, H·羅斯坦
【申請(qǐng)人】生物梅里埃公司
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2013年7月12日
【公告號(hào)】EP2872867A1, US20150184224, WO2014009673A1