本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種中藥領(lǐng)域的藥物組合物及其特征圖譜的構(gòu)建方法和檢測方法。

背景技術(shù)：

1、對于某些中藥領(lǐng)域的產(chǎn)品，其制備工藝提高和改進后，可能會對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生影響，包括性狀、理化鑒別、薄層鑒別、常規(guī)檢查、含量測定等方面，不同批次的產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需統(tǒng)一，且有待進一步提高。因此，建立綜合的、可量化的全面成分質(zhì)量監(jiān)控方法，對提高產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性及一致性具有重要作用。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在至少在一定程度上解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題至少之一。為此，本發(fā)明提出了一種藥物組合物特征圖譜的構(gòu)建方法、鑒定所述藥物組合物的方法、檢測所述藥物組合物的方法以及所述藥物組合物的質(zhì)控的方法。采用本技術(shù)方法構(gòu)建的藥物組合物特征圖譜中的特征峰作為衡量指標(biāo)，可以準(zhǔn)確地鑒定所述藥物組合物、確定所述藥物組合物的組分含量，專屬性強，有助于藥物組合物的質(zhì)量控制。并且，構(gòu)建方法操作簡便，具有重現(xiàn)性好、精密度高和穩(wěn)定性強等優(yōu)點，適于推廣應(yīng)用。

2、在本發(fā)明的一個方面，本發(fā)明提出了一種藥物組合物特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括：提供多個不同批次的藥物組合物樣品；在相同條件下，分別將每個樣品進行預(yù)處理，得到多個供試品溶液；在相同條件下，分別將多個所述供試品溶液進行高效液相色譜檢測，得到多個色譜圖；通過對多個所述色譜圖進行比對分析，確定共有特征峰，以便得到所述藥物組合物的特征圖譜；其中，所述高效液相色譜檢測采用的流動相包括：流動相a，所述流動相a為0.05～0.15質(zhì)量％的磷酸溶液；流動相b，所述流動相b為乙腈；所述流動相的洗脫方式為梯度洗脫；其中，所述藥物組合物包含活性成分，所述活性成分是由以下中藥原料制成：馬勃，莪術(shù)，金銀花，桃仁，玄參，三棱，紅花，丹參，板藍根，麥冬，浙貝母，澤瀉，雞內(nèi)金，蟬蛻，木蝴蝶，蒲公英；優(yōu)選地，馬勃的重量與選自莪術(shù)、桃仁、三棱、紅花、雞內(nèi)金中任一種原料的重量比是1:2，馬勃的重量與選自丹參、浙貝母、澤瀉、蟬蛻、木蝴蝶中任一種原料的重量比是1:3，馬勃的重量與選自金銀花、玄參、板藍根、蒲公英中的任一種原料的重量比是1:5，且馬勃的重量與麥冬的重量比是1:4。具體地，在所述藥物組合物中，所述活性成分是由以下重量百分比的中藥原料制成：基于中藥原料的總重量計，2％馬勃，4％莪術(shù)，10％金銀花，4％桃仁，10％玄參，4％三棱，4％紅花，6％丹參，10％板藍根，8％麥冬，6％浙貝母，6％澤瀉，4％雞內(nèi)金，6％蟬蛻，6％木蝴蝶，10％蒲公英。

3、本發(fā)明的發(fā)明人采用高效液相色譜對該藥物組合物進行檢測，發(fā)現(xiàn)流動相的組成和洗脫條件會顯著影響分離效果，當(dāng)以0.05～0.15質(zhì)量％的磷酸溶液作為流動相a和以乙腈作為流動相b進行梯度洗脫，可以獲得較多分離度高且峰型好的色譜峰。

4、進一步地，發(fā)明人對多個不同批次樣品進行同樣的預(yù)處理和高效液相色譜檢測，通過比對分析獲得的多個色譜圖，確定共有的7個共有特征峰，這7個共有特征峰構(gòu)成了該藥物組合物的特征圖譜，可以利用該特征圖譜鑒定該藥物組合物、確定該藥物組合物的組分含量以及質(zhì)量是否達標(biāo)，實現(xiàn)質(zhì)控。并且，該方法操作簡便，具有重現(xiàn)性好、專屬性強、精密度高和穩(wěn)定性強等優(yōu)點，適于推廣應(yīng)用。

5、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述流動相的洗脫方式如下：

6、 時間(min) 流動相a(％) 流動相b(％) 0～20 90～85 10～15 20～25 85～80 15～20 25～55 80～65 20～35 55～65 65～45 35～55

7、發(fā)明人經(jīng)過大量實驗得到上述較佳的洗脫方式和流速，由此，可以同時檢測出全部共有特征峰，獲得分離度高、峰型好的特征圖譜。

8、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述高效液相色譜檢測采用的流動相的流速為0.8～1.2ml/min，柱溫為25～35℃，波長為320～330nm。發(fā)明人經(jīng)過大量實驗得到上述較佳色譜條件，由此，可以同時檢測出全部共有特征峰，獲得分離度高、峰型好的特征圖譜。

9、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述高效液相色譜檢測采用的色譜柱選自c18色譜柱。發(fā)明人對welch?xtimate@c18(4.6mm×250mm，5μm)、pfchrom?c18(4.6mm×250mm，5μm)、sinochrom?ods-bp?c18(4.6mm×250mm，5μm)、welch?blossmate@c18(4.6mm×250mm?5μm)、agilent?5tc?c18(4.6mm×250mm?5μm)進行研究發(fā)現(xiàn)，welch?xtimate@c18柱或agilent5tc-c18柱對本發(fā)明所述藥物組合物的特征圖譜的分離效果更佳。

10、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述預(yù)處理包括：將藥物組合物與甲醇混合后進行超聲處理，將所得混合液用甲醇補足重量，搖勻，過濾，收集濾液，得到供試品溶液。發(fā)明人經(jīng)過大量實驗得到上述較優(yōu)預(yù)處理條件，由此，可以有效地提取出共有特征峰對應(yīng)的特征成分，且雜質(zhì)少，從而有助于獲得分離度高、峰型好的特征圖譜。

11、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述超聲處理是在功率為220～280w和頻率為35～45khz下處理10～30分鐘。由此，以便于充分提取出本發(fā)明所述藥物組合物的組分。

12、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述甲醇的濃度為90～100體積％。由此，以便于充分提取出本發(fā)明所述藥物組合物的組分。

13、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述方法進一步包括：在相同條件下，分別將參照物溶液與多個所述供試品溶液進行高效液相色譜檢測，優(yōu)選地，所述參照物溶液選自溶液。采用作為參照物，分離度好。

14、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述參照物溶液的制備方法包括：取對照品(又稱“參照物”)適量，精密稱定，加甲醇溶解制成每1ml約含0.1mg的溶液，作為參照物溶液。

15、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述多個不同批次的批次個數(shù)至少為5個(例如，5個、6個、7個、8個、9個或10個)。由此，以便保證構(gòu)建的特征圖譜的準(zhǔn)確性。

16、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述特征圖譜包括7個共有特征峰，以第二個特征峰為參照峰，7個共有特征峰相對保留時間與參照峰保留時間的比值分別為0.63±10.0％、1、2.57±10.0％、2.98±10.0％、3.05±10.0％、3.12±10.0％、3.48±10.0％。

17、參考圖1，本發(fā)明所述藥物組合物的特征圖譜包括7個共有特征峰，所述共有特征峰為：1號峰為共有特征峰，2號峰對應(yīng)的物質(zhì)具有以下結(jié)構(gòu)：

18、

19、3號峰為共有特征峰，4號峰為共有特征峰，5號峰為共有特征峰，6號峰對應(yīng)的物質(zhì)具有以下結(jié)構(gòu)：

20、

21、7號峰為共有特征峰。其中，2號峰為參照峰s；各特征峰與s峰的相對保留時間在規(guī)定值±10.0％范圍之內(nèi)；規(guī)定值為：0.63(峰1)、1.00(峰2，s)、2.57(峰3)、2.98(峰4)、3.05(峰5)、3.12(峰6)、3.48(峰7)。

22、在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明提出了一種鑒定本發(fā)明所述藥物組合物的方法，其特征在于，包括：將待測樣品進行預(yù)處理，得到上樣液；對所述上樣液進行高效液相色譜檢測，獲得色譜圖；將所述色譜圖與利用前面所述方法獲得的特征圖譜進行分析，確定所述待測樣品是否為本發(fā)明所述的藥物組合物；所述高效液相色譜的檢測條件是如前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法中所限定的。由此，利用根據(jù)上述本發(fā)明的鑒定方法可以準(zhǔn)確鑒定本發(fā)明所述的藥物組合物。

23、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述預(yù)處理是如前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法中所限定的。

24、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述色譜圖與所述特征圖譜的相似度不低于0.9，則認定所述待測樣本品為本發(fā)明所述的藥物組合物。具體地，所述相似度通過國家藥典委員會制訂的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》v2.0版進行指紋圖譜的相似度評價軟件得到。

25、需要說明的是，前面針對特征圖譜的構(gòu)建方法所描述的特征和優(yōu)點，同樣適用于該鑒定本發(fā)明所述藥物組合物的方法，在此不再贅述。

26、在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種檢測本發(fā)明所述藥物組合物的方法，其特征在于，包括：將前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法獲得的特征圖譜中的至少一個特征峰所對應(yīng)的特征組分的已知濃度溶液配置成參照品溶液；將樣品進行預(yù)處理，得到供試品溶液；分別將所述參照品溶液與供試品溶液進行高效液相色譜檢測，得到色譜圖；對參照品溶液的色譜圖和供試品溶液的色譜圖進行分析，以便確定所述樣品中至少一個特征組分的含量；其中，所述高效液相色譜檢測條件是如前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法中所限定的。由此，利用本發(fā)明實施例的方法可以準(zhǔn)確測定本發(fā)明所述藥物組合物中特征成分含量，具有重現(xiàn)性好、專屬性強，精密度高和穩(wěn)定性強等優(yōu)點，適于推廣應(yīng)用。

27、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述預(yù)處理是如前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法中所限定的。

28、需要說明的是，前面針對特征圖譜的構(gòu)建方法所描述的特征和優(yōu)點，同樣適用于該檢測本發(fā)明所述藥物組合物的方法，在此不再贅述。

29、在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提出了一種本發(fā)明所述藥物組合物質(zhì)控的方法，其特征在于，包括：將所述藥物組合物的樣品進行預(yù)處理，得到供試品溶液；將所述供試品溶液進行高效液相色譜檢測，得到色譜圖；將所述色譜圖與利用前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法獲得的特征圖譜進行分析，確定所述待測樣品質(zhì)量是否達標(biāo)；其中，所述高效液相色譜檢測條件是如前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法中所限定的。由此，采用根據(jù)本發(fā)明實施例的方法可以準(zhǔn)確判斷出本發(fā)明所述藥物組合物的樣品是否符合要求，從而有效地把控質(zhì)量。

30、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述預(yù)處理是如前面所述特征圖譜的構(gòu)建方法中所限定的。

31、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述色譜圖與所述特征圖譜的相似度不低于0.9，則認定所述藥物組合物質(zhì)量達標(biāo)。

32、需要說明的是，前面針對特征圖譜的構(gòu)建方法所描述的特征和優(yōu)點，同樣適用于該藥物組合物質(zhì)控的方法，在此不再贅述。

33、在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包含活性成分，所述活性成分是由以下中藥原料制成：馬勃，莪術(shù)，金銀花，桃仁，玄參，三棱，紅花，丹參，板藍根，麥冬，浙貝母，澤瀉，雞內(nèi)金，蟬蛻，木蝴蝶，蒲公英；優(yōu)選地，馬勃的重量與選自莪術(shù)、桃仁、三棱、紅花、雞內(nèi)金中任一種原料的重量比是1:2，馬勃的重量與選自丹參、浙貝母、澤瀉、蟬蛻、木蝴蝶中任一種原料的重量比是1:3，馬勃的重量與選自金銀花、玄參、板藍根、蒲公英中的任一種原料的重量比是1:5，且馬勃的重量與麥冬的重量比是1:4。具體地，在所述藥物組合物中，所述活性成分是由以下重量百分比的中藥原料制成：基于中藥原料的總重量計，2％馬勃，4％莪術(shù)，10％金銀花，4％桃仁，10％玄參，4％三棱，4％紅花，6％丹參，10％板藍根，8％麥冬，6％浙貝母，6％澤瀉，4％雞內(nèi)金，6％蟬蛻，6％木蝴蝶，10％蒲公英；

34、所述藥物組合物還包含輔料二氧化硅，具體地，所述藥物組合物包含0.2％-2％(優(yōu)選0.3％-1.5％)的二氧化硅，基于藥物組合物的總重量計；優(yōu)選地，所述藥物組合物是顆粒劑或膠囊劑。

35、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，所述藥物組合物的高效液相色譜圖與本發(fā)明第一方面的方法構(gòu)建獲得的特征圖譜的相似度不低于0.9。優(yōu)選地，所述藥物組合物的高效液相色譜圖使用本發(fā)明第一方面中限定的高效液相色譜檢測條件和預(yù)處理操作獲得。

36、具體地，所述藥物組合物具有本發(fā)明第一方面所述方法構(gòu)建的特征圖譜，其包括7個特征峰，第二個特征峰對應(yīng)的物質(zhì)具有以下結(jié)構(gòu)：

37、

38、第六個特征峰對應(yīng)的物質(zhì)具有以下結(jié)構(gòu)：

39、

40、其中，以第二個特征峰為參照峰，7個特征峰相對保留時間與參照峰保留時間的比值分別為0.63±10.0％、1.00、2.57±10.0％、2.98±10.0％、3.05±10.0％、3.12±10.0％、3.48±10.0％。

41、或者，具體地，在本發(fā)明所述藥物組合物的特征圖譜中，所述7個特征峰的相對峰面積分別為：0.127，1.000，0.528，0.259，0.189，0.080，0.100。

42、在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明還提供了一種本發(fā)明所述藥物組合物的制備方法，其包括(或由以下組成)：

43、(1)取部分量的金銀花、浙貝母、紅花以及馬勃，粉碎，過篩，混勻；

44、(2)取全部量的其余12味藥材(莪術(shù)、桃仁、玄參、三棱、丹參、板藍根、麥冬、澤瀉、雞內(nèi)金、蟬蛻、木蝴蝶、蒲公英)與剩余量的上述4味藥材(金銀花、浙貝母、紅花、馬勃)加水煎煮，合并煎液，過濾，濾液濃縮；

45、(3)將步驟(1)得到的粉末和步驟(2)得到的稠膏混合后，制粒。

46、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，在本發(fā)明的制備方法中，步驟(3)中制粒是將混合后的膏粉(即，步驟(1)得到的粉末和步驟(2)得到的稠膏混合后的物質(zhì))與水直接進行沸騰制粒。

47、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，在本發(fā)明的制備方法中，步驟(1)中金銀花、浙貝母、紅花以及馬勃的部分量為每種藥材全部量的15％至75％，優(yōu)選為每種藥材全部量的20％至70％，更優(yōu)選為每種藥材全部量的25％至65％。

48、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，在本發(fā)明的制備方法中，步驟(1)中粉碎是將所述藥材粉碎成細粉；和/或，根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，在本發(fā)明的制備方法中，步驟(1)中所述過篩是過100-120目篩。

49、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，在本發(fā)明的制備方法中，步驟(2)中煎煮次數(shù)為1-5次，優(yōu)選為2-4次；和/或，步驟(2)中煎煮時間為1-5小時/次，優(yōu)選2-4小時/次。

50、根據(jù)本發(fā)明的一個具體實施方案，在本發(fā)明的制備方法中，步驟(2)中濾液濃縮至在溫度為70℃-90℃時相對密度為1.28-1.32的稠膏，優(yōu)選濃縮至在溫度為75℃-85℃時相對密度為1.28-1.32的稠膏。

51、在本發(fā)明的又一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的藥物組合物在制備用于治療或預(yù)防咽喉病如慢喉喑、聲帶白斑、反流性咽喉炎和/或慢性咽炎的藥物中的用途；優(yōu)選地，所述慢喉喑選自聲帶小結(jié)、聲帶息肉，和/或，聲帶粘膜增厚，以及由此引起的聲音嘶啞癥狀。

52、有益效果：

53、1、本發(fā)明的特征圖譜的構(gòu)建方法，克服了由于本發(fā)明所述藥物組合物化學(xué)成分復(fù)雜造成的干擾以致不能夠多個角度全方位地對相關(guān)劑型質(zhì)量進行檢測的缺陷；本發(fā)明獲得了7個共有特征峰，并實現(xiàn)了7個共有特征峰的有效分離，峰形良好且無干擾，從而實現(xiàn)了多個角度全方位地對本發(fā)明所述藥物組合物進行有效性的質(zhì)量檢測，進一步實現(xiàn)了本發(fā)明所述藥物組合物質(zhì)量的控制，且該質(zhì)量檢測方法操作簡單，經(jīng)過方法學(xué)驗證，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性好、回收率可靠、檢測成本低、檢測效率高，本方法的應(yīng)用對本發(fā)明所述藥物組合物產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性起到至關(guān)重要作用。

54、2、本發(fā)明建立了一組快速、全面、專屬性強的本發(fā)明所述藥物組合物質(zhì)量檢測方法。

55、3、本發(fā)明構(gòu)建的特征圖譜能夠多個角度全方位對本發(fā)明所述藥物組合物進行質(zhì)量控制，為本發(fā)明所述藥物組合物真?zhèn)舞b別及規(guī)?；a(chǎn)提供更有力保障。

56、4、本發(fā)明在不同批次的特征圖譜中均檢出相應(yīng)的特征峰，指紋圖譜相似度大于0.9，說明產(chǎn)品質(zhì)量均一、穩(wěn)定。

57、本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。