本實(shí)用新型涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種百日咳疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒。

背景技術(shù)：

百日咳是由革蘭氏陰性的百日咳桿菌引起的呼吸道傳染病，主要表現(xiàn)為遷延數(shù)周的咳嗽，以有吸氣性“尾聲”的劇烈陣發(fā)性痙咳為特征，嬰幼兒的臨床表現(xiàn)最為嚴(yán)重。

百日咳的病原體為百日咳鮑特菌，是一種小的、營養(yǎng)需求苛刻的革蘭氏陰性球桿菌，專門附著在人呼吸道的粘膜層。有時(shí)，其他傳染源，尤其是副百日咳鮑特菌，也可引起百日咳樣疾病。鮑特氏菌屬可因環(huán)境條件改變而發(fā)生表型變化，毒力因子的表達(dá)也可不同。這些因子包括百日咳毒素(PT)、絲狀血凝素(FHA)、百日咳粘著素(PRN)、菌毛(FIM)2型和3型、腺苷酸環(huán)化酶毒素(ACT)、氣管細(xì)胞毒素(TCT)、脂低聚糖和百日咳鮑特菌內(nèi)毒素。雖然百日咳的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，但FHA、PRN和菌毛可幫助細(xì)菌粘附在宿主細(xì)胞上，PT、TCT和ACT可使細(xì)菌破壞上皮層，并躲避宿主的免疫系統(tǒng)。這些都是重要的致病因素。

百日咳的病原體僅在發(fā)病早起患者的鼻咽部可以檢出，經(jīng)9～10天(范圍：6～20天)的潛伏期，患者出現(xiàn)卡他癥狀(包括咳嗽)。1～2周內(nèi)，出現(xiàn)陣發(fā)性痙攣性咳嗽，并帶有特征性的雞鳴樣尾音。典型表現(xiàn)是夜間咳嗽特別嚴(yán)重，咳后常伴有嘔吐。在嬰幼兒中，百日咳可引發(fā)呼吸暫停和發(fā)紺，但可無咳嗽；在青少年和成人中，非特異性的、經(jīng)久不愈的咳嗽可能是唯一的臨床表現(xiàn)。疾病的卡他期、陣發(fā)期和恢復(fù)期可持續(xù)數(shù)月。雖然大部分臨床上可辨別的百日咳病例發(fā)生在1～5歲的兒童，但報(bào)告的嚴(yán)重病例和死亡病例主要發(fā)生于出生后數(shù)周或數(shù)月。在大齡兒童、青少年和成人中，由于其病程常常不典型，通常未被辨識為百日咳。

百日咳作為一種傳染病，每2～5年(平均3～4年)出現(xiàn)一次流行高峰。兒童廣泛接種疫苗和百日咳發(fā)病率的降低，并沒有影響到百日咳的流行周期。其沒有固定的季節(jié)流行模式，不同性別間存在一定差異，可發(fā)生在任何年齡。

接種百日咳疫苗是有效減少百日咳發(fā)病率的手段之一，疫苗接種后4～6 周，將產(chǎn)生百日咳IgG抗體，為機(jī)體形成防止百日咳桿菌致病的保護(hù)。實(shí)驗(yàn)室檢測百日咳IgG抗體的方法主要有補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、凝集試驗(yàn)、毒素中和實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)(ELISA)等。

評價(jià)疫苗免疫效果最可靠的方法就是檢測接種者體內(nèi)血清中的特異抗體的含量。當(dāng)前市場上檢測百日咳類毒素抗體的商品化試劑盒多采用酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法，這些方法雖然靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、化學(xué)發(fā)光試劑還可以對抗體進(jìn)行定量，但在實(shí)際操作上存在諸多不便，如步驟復(fù)雜、耗時(shí)較長，還需使用特定的儀器設(shè)備；試劑盒需4℃保存；對樣品要求靜脈采血等，不易在基層普及運(yùn)用。

免疫膠體金快速診斷技術(shù)是建立在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、單克隆抗體技術(shù)和免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)基礎(chǔ)上，以膠體金為標(biāo)記物，利用特異的抗原抗體反應(yīng)放大反應(yīng)信號,通過直接觀察就可以判定結(jié)果的新技術(shù)。該技術(shù)具有簡單、快速、準(zhǔn)確和無污染等優(yōu)點(diǎn)，在臨床醫(yī)學(xué)檢測、動物醫(yī)學(xué)檢測、激素檢測、食品安全檢測、藥物殘留和毒品快速檢測等諸多診斷領(lǐng)域迅速發(fā)展。目前，膠體金標(biāo)記快速檢測抗體的方法大體分為兩種：一種是將抗原標(biāo)金，待測抗體的抗體劃膜；另一種是將抗原劃膜，待測抗體的抗體標(biāo)金?，F(xiàn)有研究表明：因?yàn)榭贵w蛋白性質(zhì)較為穩(wěn)定，所以對抗體蛋白的膠體金標(biāo)記較為穩(wěn)定，上述第一種方法所述的抗原的膠體金標(biāo)記則存在頗多問題，因?yàn)榭乖酁椴《绢?，性質(zhì)多樣，有的大小甚至比膠體金顆粒還大，且穩(wěn)定性較差，因此很難直接將抗原標(biāo)記在膠體金顆粒上；即使勉強(qiáng)能將抗原標(biāo)記上，也需要抗原達(dá)到極高的純度，而對抗原病毒的純化是一項(xiàng)難度較大、成本較高的工程；也有人尋找抗原的重組抗原來代替這些天然抗原，但是很多抗原很難尋到能替代的重組抗原，而且即使有，成本也是極高的，因此上述第一種方法的局限性比較高。上述的第二種方法是將抗原進(jìn)行劃膜，這種方法使用待測抗體的抗體進(jìn)行金標(biāo)記，可以避免抗原金標(biāo)記的問題，但將抗原劃到膜上發(fā)生反應(yīng)，需要抗原具有較高的濃度和純度，這也增加了產(chǎn)品生產(chǎn)的成本和難度；另外將抗原劃到膜上，由于抗原穩(wěn)定性較差，很難長時(shí)間保存，檢測試紙的有效期極短。這些都是限制抗體快速檢測類試劑盒快速發(fā)展的原因。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種百日咳疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒，解決采用膠體金標(biāo)記時(shí)抗原的顆粒大，純度要求高以及采用抗原劃膜時(shí)，由于抗原穩(wěn)定性差，很難長時(shí)間保存，檢測試紙的有效期極短的問題。

本實(shí)用新型解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種百日咳疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒，包括包裝盒、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙；所述包裝盒包括盒體和蓋體，所述盒體內(nèi)設(shè)有第一隔板，所述第一隔板將所述盒體分為第一容納腔和第二容納腔，所述檢測試紙?jiān)O(shè)于所述第一容納腔內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔內(nèi)；所述蓋體包括第一蓋體和第二蓋體，所述第一蓋體設(shè)于所述第一容納腔的上方，所述第二蓋體設(shè)于所述第二容納腔的上方；所述第一容納腔內(nèi)設(shè)有若干個(gè)第二隔板，若干個(gè)所述第二隔板分別與所述盒體的外壁圍成第三容納腔，所述第三容納腔內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板上設(shè)有多個(gè)直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔；所述第一蓋體上設(shè)有防塵塞，所述防塵塞與所述第一蓋體上的加樣口相匹配；所述檢測試紙包括包被膜、標(biāo)記物結(jié)合墊和抗原墊；所述抗原墊上包被有百日咳類毒素抗原，所述標(biāo)記物結(jié)合墊上包被有膠體金標(biāo)記的鼠抗百日咳類毒素抗原單克隆抗體，所述包被膜上固定有檢測T線和質(zhì)控C線，所述檢測T線上包被有鼠抗人IgG抗體，所述質(zhì)控C線上包被羊抗鼠IgG抗體；所述檢測試紙的最低檢測線為50IU/ml。

本實(shí)用新型的有益效果是：所采用的檢測試紙，通過引進(jìn)百日咳類毒素抗原墊，同時(shí)在抗原墊中加入抗原保護(hù)液，解決了百日咳類毒素抗原由于穩(wěn)定性差而不容易被金標(biāo)記的問題；另一方面，采用的百日咳類毒素抗原為粗抗原，在檢測試紙反應(yīng)層析過程中，已經(jīng)通過雙抗體夾心法對粗抗原進(jìn)行了篩選和純化，保證了試劑反應(yīng)的特異性，因此不需對粗抗原進(jìn)一步純化就能達(dá)到反應(yīng)效果，制備成本低，利用推廣應(yīng)用。另采用的百日咳疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙均設(shè)于包裝盒內(nèi)，用戶在使用時(shí)，無需另外準(zhǔn)備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙分別置于試劑盒的兩個(gè)容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個(gè)蓋體，使試劑盒的結(jié)構(gòu)更加緊湊，另用戶在使用時(shí)只需打開第二蓋體即可取出樣品稀釋液，不會對檢測試紙?jiān)斐筛蓴_；另在包裝盒內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為50IU/ml，可實(shí)現(xiàn)對百日咳疫苗接種效果的快速評估。

進(jìn)一步：所述第二隔板的數(shù)量為兩個(gè)，兩個(gè)所述的第二隔板分別設(shè)于所述第一容納腔的前端和后端。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：通過設(shè)置兩個(gè)第二隔板，進(jìn)一步的設(shè)置有兩個(gè)第三容納腔，且每個(gè)第三容納腔內(nèi)均放有干燥劑，加強(qiáng)對濕氣、氧氣的吸收。

進(jìn)一步：所述第一容納腔內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙的定位裝置。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：通過定位裝置可將檢測試紙鎖緊在第一容納腔中，防止其左右晃動。

進(jìn)一步：所述定位裝置包括定位組件和活動組件，所述定位組件和所述活動組件分別設(shè)于所述第一容納腔的左端和右端；所述定位組件包括底板和 U型定位塊，所述底板固定于所述盒體上；所述U型定位塊固定于所述底板的上方，且所述U型定位塊的開口端朝向所述活動組件；所述活動組件包括固定板、活動板和銅片，所述固定板固定于所述盒體上；所述銅片的一端嵌設(shè)于所述固定板中，所述銅片的另一端抵設(shè)于所述活動板上，所述活動板可在所述盒體內(nèi)移動。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：定位組件主要用于對檢測試紙的放置位置進(jìn)行定位，活動組件可根據(jù)檢測試紙的具體大小進(jìn)行調(diào)整，是檢測試紙能夠卡緊在包裝盒中，避免其左右晃動。

進(jìn)一步：所述活動板的底部設(shè)有若干個(gè)凸起，所述盒體的底部設(shè)有若干個(gè)與所述凸起相匹配的滑槽。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：活動板的底部設(shè)置凸起，且在盒體上設(shè)置與所述凸起相匹配的滑槽，可對活動板在盒體內(nèi)的移動進(jìn)行導(dǎo)向，防止活動板的偏移。

進(jìn)一步：所述第一蓋體上的加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：第三圓筒起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時(shí)，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。

進(jìn)一步：所述第一蓋體與所述第二蓋體之間通過鉸鏈連接，且所述第一蓋體與所述盒體之間、所述第二蓋體與所述盒體之間均通過卡合方式連接。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：確保第二蓋體的打開不會影響到檢測試紙的穩(wěn)定性。

進(jìn)一步：所述第二容納腔內(nèi)設(shè)有第二圓筒，所述第二圓筒用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。

進(jìn)一步：所述標(biāo)記物結(jié)合墊為玻璃纖維。

進(jìn)一步：所述抗原墊為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。

上述進(jìn)兩步方案的有益效果是：使樣品加入到檢測試紙上后，可通過靜電作用和疏水相互作用等物理作用與蛋白質(zhì)結(jié)合且能通過毛細(xì)管現(xiàn)象展開。

附圖說明

圖1為本實(shí)用新型百日咳疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒中的包裝盒的爆炸圖；

圖2為本實(shí)用新型中的檢測試紙的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本實(shí)用新型中的包裝盒在揭開第二蓋體時(shí)的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4為本實(shí)用新型中的活動組件的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖對本實(shí)用新型的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本實(shí)用新型，并非用于限定本實(shí)用新型的范圍。

如圖1至圖4所示，一種百日咳疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒包括包裝盒1、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3；所述包裝盒1包括盒體12和蓋體 13，所述盒體12內(nèi)設(shè)有第一隔板11，第一隔板11將所述盒體12分為第一容納腔111和第二容納腔112；所述檢測試紙3設(shè)于所述第一容納腔111內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔112內(nèi)；所述蓋體13包括第一蓋體131和第二蓋體132，所述第一蓋體131設(shè)于所述第一容納腔111的上方，所述第二蓋體132設(shè)于所述第二容納腔112的上方；所述第一容納腔 111內(nèi)設(shè)有若干個(gè)第二隔板1115，若干個(gè)所述第二隔板1115分別與所述盒體12的外壁圍成第三容納腔1116，所述第三容納腔1116內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板1115上設(shè)有多個(gè)直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔1117；所述檢測試紙3包括包被膜32、標(biāo)記物結(jié)合墊33和抗原墊34；所述抗原墊34上包被有百日咳類毒素抗原，所述標(biāo)記物結(jié)合墊33上包被有膠體金標(biāo)記的鼠抗百日咳類毒素抗原單克隆抗體，所述包被膜32上固定有檢測T線321和質(zhì)控C線322，所述檢測T線321上包被有鼠抗人IgG抗體，所述質(zhì)控C線 322上包被羊抗鼠IgG抗體；所述檢測試紙3的最低檢測線為50IU/ml。將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3均設(shè)于包裝盒1內(nèi)，用戶在使用時(shí)，無需另外準(zhǔn)備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3 分別置于試劑盒的兩個(gè)容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個(gè)蓋體13，使試劑盒的尺寸更加緊湊，另用戶在使用時(shí)只需打開第二蓋體132即可取出樣品稀釋液，不會對檢測試紙3造成干擾；另在包裝盒1內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為50IU/ml，可實(shí)現(xiàn)對百日咳疫苗接種效果的快速評估。

如圖1所示，在第二隔板1115上設(shè)有多個(gè)通氣孔1117，可加強(qiáng)干燥劑的吸濕效果。所述第二隔板1115優(yōu)選為兩個(gè)，兩個(gè)所述第二隔板1115分別設(shè)于所述第一容納腔111的前后兩端，設(shè)于所述第一容納腔111前方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的前側(cè)壁延伸形成第三容納腔 1116，設(shè)于所述第一容納腔111后方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的后側(cè)壁延伸形成另一第三容納腔1116。

所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙3的定位裝置。通過定位裝置可將檢測試紙3鎖緊在第一容納腔111中，防止其左右晃動。

如圖1所示，所述定位裝置包括定位組件1112和活動組件1113，所述定位組件1112和所述活動組件1113分別設(shè)于所述第一容納腔111的左端和右端；所述定位組件1112包括底板11121和U型定位塊11122，所述底板 11121固定于所述盒體12上；所述U型定位塊11122固定于所述底板11121 的上方，且所述U型定位塊11122的開口端朝向所述活動組件1113；所述活動組件1113包括固定板11131、活動板11133和銅片11132，所述固定板 11131固定于所述盒體12上；所述銅片11132的一端嵌設(shè)于所述固定板11131 中，所述銅片11132的另一端翹起，翹起的所述銅片11132抵設(shè)于所述活動板11133上，所述活動板11133可在所述盒體12內(nèi)移動。定位組件1112主要用于對檢測試紙3的放置位置進(jìn)行定位，活動組件1113可根據(jù)檢測試紙3 的具體大小進(jìn)行調(diào)整，使檢測試紙3能夠卡緊在包裝盒1中，避免其左右晃動。

如圖1和圖4所示，所述活動板11133的底部設(shè)有若干個(gè)凸起11134，所述盒體12的底部設(shè)有若干個(gè)與所述凸起11134相匹配的滑槽1118。凸起 11134和滑槽1118的設(shè)置可對活動板在盒體12內(nèi)的移動進(jìn)行導(dǎo)向，防止活動板11133的偏移。

如圖1所示，所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有多個(gè)交叉型凸筋1114，多個(gè)所述交叉型凸筋1114均設(shè)于所述定位組件1112與所述活動組件1113之間，所述第一蓋體131在與每個(gè)所述交叉型凸筋1114相匹配的位置上均設(shè)有多個(gè)凸條1312。通過設(shè)置交叉型凸筋1114和與交叉型凸筋1114相匹配的多個(gè)凸條1312，可對檢測試紙3起到良好的支撐以及固定的作用。

如圖1所示，所述第一蓋體131上設(shè)有加樣口，所述加樣口設(shè)于所述樣品墊35上方的所述第一蓋體131上，所述加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒1313。第三圓筒1313起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時(shí)，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。

所述第一蓋體131上還設(shè)有防塵塞，所述防塵塞與所述加樣口相匹配。可防止加樣口處聚集灰塵、雜質(zhì)，影響檢測試紙3檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。所述第一蓋體131上還設(shè)有觀察窗1314，所述觀察窗1314設(shè)于所述包被膜32 上方的所述第一蓋體131上。便于用戶觀察檢測結(jié)果。

如圖1和圖3所示，所述第一蓋體131與所述第二蓋體132之間通過鉸鏈133連接，且所述第一蓋體131與所述盒體12之間、所述第二蓋體132 與所述盒體12之間均通過卡合方式連接。具體的，所述第一容納腔111內(nèi)設(shè)有多個(gè)第一圓筒1111，所述第一蓋體131上設(shè)有多個(gè)與所述第一圓筒1111 相匹配的第一凸起1311。盒體12和蓋體13之間可通過所述的第一圓筒1111 和第一凸起1311進(jìn)行卡合連接，且采用第一圓筒1111和第一凸起1311配合還具有良好的定位效果。所述第二蓋體132上設(shè)有卡槽1321，所述卡槽 1321設(shè)于所述第二蓋體132遠(yuǎn)離所述第一蓋體131的一側(cè)的內(nèi)壁上，所述盒體12上設(shè)有與所述卡槽1321相配合的第二凸起121。第二蓋體132與盒體 12之間直接采用卡槽1321與第二凸起121進(jìn)行配合連接，方便開啟。

如圖1所示，所述第二容納腔112內(nèi)設(shè)有第二圓筒1121，所述第二圓筒 1121用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。所述樣品稀釋液盛裝容器可選為瓶體或包裝袋，且瓶體的瓶口或包裝袋的開口處設(shè)置為錐形，便于樣品稀釋液的倒出。

本實(shí)用新型百日咳疫苗接種效果快速評價(jià)試劑盒的組裝方法為：首先撥動活動組件1113中的活動板11133，將檢測試紙3的底板31放置在交叉型凸筋1114上并使檢測試紙3靠近樣品墊35的一端卡設(shè)于定位組件1112中，松開活動板11133將檢測試紙3抵緊；然后將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121中，然后將盒體12和蓋體13通過第一圓筒1111和第一凸起1311 進(jìn)行卡合連接，并將第二凸起121卡合在卡槽1321中。使用時(shí)，用戶只需揭開第二蓋體132，并將樣品稀釋液取出滴在加樣口處即可，操作簡單方便。

如圖2所示，所述檢測試紙3還包括底板31和吸收墊36，所述包被膜 32設(shè)于所述底板31上；所述標(biāo)記物結(jié)合墊33、所述抗原墊34和所述樣品墊35依次搭接在所述包被膜32的一端，所述吸收墊36搭接在所述包被膜 32的另一端。所述抗原墊34為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。所述標(biāo)記物結(jié)合墊33和樣品墊35為玻璃纖維，所述吸收墊36為吸水紙。

所述的樣品稀釋液為：含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉的混合水溶液。以下實(shí)施例中，樣品稀釋液的組分為：磷酸氫二鈉5.72g，磷酸二氫鈉 0.624g，氯化鈉8g，超純水定容至1L。

下面將對百日咳類毒素IgG抗體檢測試紙3的制備、組裝、檢測原理以及檢測效果進(jìn)行詳細(xì)的說明：

1、主要材料

抗原：百日咳類毒素抗原購自深圳市菲鵬生物股份有限公司購入，是天然抗原。

鼠抗人IgG單克隆抗體，購自廈門波生生物技術(shù)有限公司，用于硝酸纖維素膜T線的包被。

鼠抗百日咳類毒素抗原單克隆抗體，購自武漢賽欣生物技術(shù)有限公司，用于標(biāo)記膠體金。

羊抗鼠IgG抗體，購自杭州隆基生物技術(shù)有限公司，用于硝酸纖維素膜質(zhì)控C線的包被。

氯金酸：sigma公司產(chǎn)品。

硝酸纖維素膜：millipore公司產(chǎn)品。

牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白：sigma公司產(chǎn)品。

其余化學(xué)試劑均為分析純試劑。

臨床實(shí)驗(yàn)由公司在武漢市省級以上臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成，其中百日咳類毒素IgG抗體陽性樣本162份，陰性樣本206份。

百日咳類毒素IgG抗體檢測試劑盒(ELISA法)：購自德國維潤賽潤，是CE已認(rèn)證的商用產(chǎn)品。

2、標(biāo)記物結(jié)合墊33的制備

氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后，取100ml膠體金溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，調(diào)節(jié)pH至8.0，然后按每 100ml膠體金溶液1.3mg抗體加入鼠抗百日咳類毒素抗原單克隆抗體1.3mg，繼續(xù)攪拌30min，再加入終濃度為0.8％的BSA進(jìn)行封閉，繼續(xù)攪拌30min。標(biāo)記結(jié)束后，以13500r/min對標(biāo)記液進(jìn)行離心，棄上清，然后將沉淀用復(fù)溶溶液進(jìn)行復(fù)溶至原體積，所述復(fù)溶溶液的配方為：Tris：1.965g， Casein-Na：2.5g，檸檬酸三鈉：2.5g，吐溫-20：0.50ml，蔗糖：10.0g，用超純水定容至1L。將復(fù)溶好的金標(biāo)記溶液按每1ml溶液鋪18cm²的比例均勻鋪在玻璃纖維上，置于37℃，相對濕度低于20％的環(huán)境中，干燥12-18小時(shí)，制成標(biāo)記物結(jié)合墊33。

3、抗原墊34的制備

將百日咳類毒素抗原使用抗原保護(hù)液進(jìn)行稀釋到20倍得到抗原液，將稀釋好的抗原液按每1ml溶液鋪18cm²的比例均勻鋪在玻璃纖維、無紡布或聚酯膜上，置于37℃，相對濕度低于40％的環(huán)境中，干燥4小時(shí)，制成抗原墊34。所述抗原保護(hù)液的配方為：Na₂HPO₄：5.72g，NaH₂PO₄：0.624g，檸檬酸三鈉：8.5g，蔗糖：10g，水定容至1L；所述百日咳類毒素抗原為粗抗原，其中抗原的含量為30wt％至50wt％。

4、包被膜32的制備

使用0.02M，pH為7.2的磷酸鹽緩沖液將鼠抗人IgG單克隆抗體分別稀釋成2.0mg/ml(T線溶液)，羊抗鼠IgG抗體稀釋至170IU/ml(C線溶液)。然后使用劃膜儀將檢測T線321與質(zhì)控C線322溶液按1.5ul/cm的出液量均勻地包被于NC膜(硝酸纖維素膜)上，NC膜已事先黏貼于塑料底板上，包被完成后，將NC膜置于37℃，相對濕度低于40％的環(huán)境中，干燥3至4 小時(shí)，制成包被膜32。

5、百日咳類毒素IgG抗體檢測試紙3的組裝

在干燥環(huán)境下(溫度20至25℃，相對濕度低于30％)，將包被膜32置于潔凈環(huán)境中，在靠近包被膜32的檢測T線321的一端緊密壓接標(biāo)記物結(jié)合墊33，標(biāo)記物結(jié)合墊33(標(biāo)記物結(jié)合墊33已事先切裁成6mm寬)緊密壓接在包被膜32上的長度為2mm左右，抗原墊34(抗原墊已事先切裁成10mm 寬)緊密壓接在標(biāo)記物結(jié)合墊33的另一端，抗原墊34(抗原墊34已事先切裁成10mm寬)緊密壓接在標(biāo)記物結(jié)合墊33的長度為2mm左右，樣品墊35 緊密壓接抗原墊34的另一端，樣品墊35緊密壓接抗原墊34上的長度為4 至5mm，最后用切條機(jī)將貼好的底板31切成約4mm寬的檢測試紙3。

6、百日咳類毒素IgG抗體檢測試紙3的使用方法

將待檢血清或血漿或全血(待檢樣品)平衡至室溫，并將制備好的檢測試紙3放入包裝盒1中，通過加樣口向樣品墊35處加入5ul待檢樣品，再加入2至3滴樣品稀釋液，若樣品中含有百日咳類毒素IgG抗體，其將和抗原墊34中的百日咳類毒素抗原形成百日咳類毒素抗原-百日咳類毒素IgG抗體復(fù)合物，該復(fù)合物向前移動，復(fù)合物中的百日咳類毒素抗原再與標(biāo)記物結(jié)合墊33中的膠體金標(biāo)記的鼠抗百日咳類毒素抗原單克隆抗體結(jié)合，形成百日咳類毒素IgG抗體-百日咳類毒素抗原-膠體金標(biāo)記的鼠抗百日咳類毒素單克隆抗體免疫復(fù)合物，該復(fù)合物由于層析作用沿紙條向前移動，至檢測T線 321，復(fù)合物中的破傷風(fēng)類毒素IgG抗體與檢測T線321上包被的鼠抗人IgG 單克隆抗體反應(yīng)形成鼠抗人IgG單克隆抗體-百日咳類毒素IgG抗體-百日咳類毒素抗原-膠體金標(biāo)記的鼠抗百日咳類毒素抗原單克隆抗體免疫復(fù)合物，該復(fù)合物可聚集在檢測區(qū)，當(dāng)聚集的復(fù)合物達(dá)到一定的數(shù)量時(shí)，則形成一條肉眼可見的條帶(T線)，判斷結(jié)果為陽性；若樣品中不含有或含很少量的百日咳類毒素IgG抗體，則不能形成免疫復(fù)合物，即不能形成肉眼可見的條帶，判斷結(jié)果為陰性；質(zhì)控C線322作為試劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，陽性和陰性檢測樣品均會產(chǎn)生條帶。具體的，在20分鐘內(nèi)可直接用肉眼觀察檢測T線321 和質(zhì)控C線322的顯色情況：質(zhì)控C線322不顯色，說明本試驗(yàn)失??；質(zhì)控 C線322顯色，檢測T線321不顯色說明百日咳疫苗接種不成功；質(zhì)控C線 322和檢測T線321均顯色說明百日咳疫苗接種成功。

7、百日咳類毒素IgG抗體的最低保護(hù)滴度設(shè)為50IU/ml，當(dāng)百日咳類毒素IgG抗體濃度≥50IU/ml說明人體對百日咳具有抵抗性，當(dāng)百日咳類毒素 IgG抗體濃度＜50IU/ml說明人體對百日咳還沒有產(chǎn)生抵抗性或抵抗力較弱，因此本檢測試紙將檢測百日咳類毒素IgG抗體的檢測臨界值設(shè)置為 50IU/ml，T線顯線表明百日咳類毒素IgG抗體的濃度≥50IU/ml，百日咳疫苗接種成功，T線不顯線表明百日咳類毒素IgG抗體的濃度＜50IU/ml，百日咳疫苗接種不成功。因此，本實(shí)用新型所述的試劑盒可以實(shí)現(xiàn)快速評價(jià)百日咳疫苗的接種效果。

8、臨床樣品檢測結(jié)果對照

對公司收集的臨床血清樣本使用本申請檢測試紙及商用檢測ELISA試劑盒同時(shí)進(jìn)行檢測，再對檢測結(jié)果進(jìn)行對照。

以ELISA試劑盒為對照，對百日咳類毒素IgG抗體進(jìn)行檢測，檢測出162 份百日咳類毒素IgG陽性樣本，206份百日咳類毒素IgG陰性樣本，而本檢測試紙檢測出160份百日咳類毒素IgG陽性樣本，208份百日咳類毒素IgG 陰性樣本，總體符合率為96.74％。臨床檢測結(jié)果表明，本試劑盒的性能與 ELISA試劑盒相比無顯著差異，說明本實(shí)用新型適合用于臨床檢驗(yàn)，具有實(shí)用價(jià)值。

以上所述僅為本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例，并不用以限制本實(shí)用新型，凡在本實(shí)用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。