專利名稱：百日咳IgG抗體檢測卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型屬于免疫檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于快速檢測接種百日咳苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗百日咳桿菌的IgG抗體的百日咳IgG抗體檢測卡。
背景技術(shù)：
百日咳疫苗是用百日咳桿菌類毒素(Pertussis Toxin，PT)和百日咳桿菌的一種表面蛋白絲狀血凝素(Filamentous Hemagglutinin, FHA)制成的無細(xì)胞組分疫苗,用于預(yù)
防百曰咳。目前用于檢測接種百日咳疫苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗百日咳桿菌IgG抗體多采用酶聯(lián)免疫法(市售試劑盒，百日咳IgG抗體測定試劑盒(酶聯(lián)免疫法))，該方法是將免疫接種百日咳疫苗的人血清進(jìn)行稀釋后，加到包被百日咳組分抗原的微孔板中，37°C孵育I小時(shí)后，洗滌數(shù)次，加抗人IgG酶標(biāo)記物，再經(jīng)過洗滌、加底物顯色，根據(jù)樣品OD值的大小，判斷人血清中是否含有抗百日咳桿菌的IgG抗體。該方法存在的技術(shù)問題1、操作繁瑣試驗(yàn)步驟較多。待檢血清或血漿需進(jìn)行稀釋，前兩個反應(yīng)步驟需進(jìn)行數(shù)次洗滌，最后酶標(biāo)儀讀取OD值；2、耗時(shí)長試驗(yàn)過程中三個步驟(加樣品、酶標(biāo)記物、底物)均需37°C孵育，加上洗滌時(shí)間，整個試驗(yàn)需要耗時(shí)3小時(shí)。

實(shí)用新型內(nèi)容本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種百日咳IgG抗體檢測卡，它能快速檢測接種百日咳疫苗后人體內(nèi)是否產(chǎn)生抗百日咳的IgG抗體，檢測操作簡便，生產(chǎn)成本低。本實(shí)用新型解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是一種百日咳IgG抗體檢測卡，包括襯墊、樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊；所述樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊以水平方向順序相接并固定在所述襯墊上；并且所述玻璃纖維墊上噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜上設(shè)置試驗(yàn)線，所述試驗(yàn)線是將百日咳桿菌毒素或者百日咳桿菌絲狀血凝素固定在層析膜上形成。作為優(yōu)選，所述層析膜上還設(shè)置對照線，并且所述試驗(yàn)線位于所述樣品墊和所述對照線之間。作為優(yōu)選，所述襯墊的主體為塑料墊。作為優(yōu)選，所述樣品墊長度為20mm,寬度為5mm ;所述玻璃纖維墊長度為IOmm,寬度為5mm ;所述層析膜長度為25mm,寬度為5mm ;所述吸收墊長度為20mm,寬度為5mm ;所述襯墊長度為30mm,寬度為5mm,厚度為1mm。上述技術(shù)方案中，所述樣品墊和吸收墊均采用具有吸水性能的材料制備而成，可以均為市售的濾紙制成，優(yōu)選吸水性能較強(qiáng)的定性濾紙，這樣利于檢測，增加檢測速度。所述層析膜為市售硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜又稱NC膜，在膠體金試紙中用做C/T線的承載體，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。米用的硝酸纖維素膜型號135s、170s或180s (以秒為單位的定義每4cm膜，水的層析時(shí)間是多少秒)。玻璃纖維墊是玻璃纖維制品的一種。玻璃纖維是一種性能優(yōu)異的無機(jī)非金屬材料。英文原名為Glassfiber，成分為二氧化硅、氧化鋁、氧化鈣、氧化硼、氧化鎂、氧化鈉等。它是以玻璃球或廢舊玻璃為原料經(jīng)高溫熔制、拉絲、絡(luò)紗、織布等工藝，最后形成各類產(chǎn)品，玻璃纖維單絲直徑從幾個微米到二十幾個微米，相當(dāng)于一根頭發(fā)絲的1/20-1/50，每束纖維原絲都有數(shù)百根甚至上千根單絲組成，通常作為復(fù)材料中的增強(qiáng)材料、電絕緣材料和絕熱保溫材料，電路基板等，廣泛用于國民經(jīng)濟(jì)各個領(lǐng)域。所述玻璃纖維墊上均勻噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒，彩色膠乳顆粒一般采用紅色的膠乳顆粒，這樣顯色明顯；膠乳顆粒上進(jìn)行標(biāo)記的方法在本領(lǐng)域?yàn)槌Ｒ?guī)技術(shù)手段，發(fā)明人在此不做贅述。彩色膠乳顆粒帶的標(biāo)記可以與人血清中的IgG抗體結(jié)合，試驗(yàn)線上是抗原。作為優(yōu)選,所述玻璃纖維墊為噴涂有帶金黃色葡萄球菌A蛋白(StaphylococalProtein A, SPA)標(biāo)記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊。金黃色葡萄球菌A蛋白是一種從金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁分離的蛋白質(zhì)。由于SPA能與人、鼠、兔等的IgG的Fe端結(jié)合，成為免疫學(xué)上一種極為有用的工具。所述對照線是將SPA固定在層析膜上形成的對照線。所述對照線與標(biāo)記物對應(yīng)。作為優(yōu)選，所述玻璃纖維墊為噴涂有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標(biāo)記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊。鼠抗人IgG單克隆抗體是一種較好的標(biāo)記物。所述對照線是將羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜上形成的對照線。羊抗鼠IgG抗體又稱羊抗鼠IgG多克隆抗體。羊抗鼠IgG (免疫球蛋白)多克隆抗體在膠體金法快速抗體診斷產(chǎn)品中用來固定于硝酸纖維素膜上，與膠體金標(biāo)記的單克隆抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)并顯示一定的顏色，形成對照線進(jìn)行免疫診斷。本實(shí)用新型的檢測原理是本實(shí)用新型的檢測是在層析作用的推動下完成的。當(dāng)血清樣品被添加至樣品墊上后，通過層析作用到達(dá)玻璃纖維墊，血清樣品中的IgG抗體與標(biāo)記的彩色膠乳顆粒結(jié)合形成結(jié)合顆粒，然后進(jìn)一步至層析膜上，在層析膜的層析作用下，結(jié)合顆粒向前移動，如血清中含有抗水痘帶狀皰疹病毒的抗體時(shí)(即接種水痘疫苗后應(yīng)產(chǎn)生此抗體)，與相應(yīng)的試驗(yàn)線結(jié)合，呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，未結(jié)合的顆粒會繼續(xù)向前移動，與對照線結(jié)合呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，即顯示試驗(yàn)線和對照線兩條顏色線；如血清中不含有抗水痘帶狀皰疹病毒的抗體時(shí)，顆粒與相應(yīng)的試驗(yàn)線的抗原無法結(jié)合，試驗(yàn)線不顯色，為結(jié)合的顆粒會繼續(xù)向前移動，與對照線結(jié)合呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，即只顯示對照線一條顏色線。因膜層析速度較快，幾分鐘內(nèi)帶標(biāo)記彩色膠乳顆粒即可移動完整個層析膜條，立刻可以判讀結(jié)果，如試驗(yàn)線和對照線均顯色，血清抗體為陽性；只有對照線一條線顯色，血清抗體為陰性。綜上所述，本實(shí)用新型的有益效果是(I)抗百日咳IgG抗體是接種百日咳疫苗后人體內(nèi)產(chǎn)生的一種特異性保護(hù)抗體。人體內(nèi)只有具有這種特異性保護(hù)抗體時(shí)，才能在人體接觸到百日咳桿菌時(shí)將百日咳桿菌及其產(chǎn)生的毒素中和掉而不被感染。本實(shí)用新型百日咳IgG抗體檢測卡能快速、有效的檢測人接種疫苗后體內(nèi)是否產(chǎn)生了這種特異性保護(hù)抗體。(2)本實(shí)用新型使用時(shí)，只需將待檢樣品用生理鹽水1:1稀釋，直接加到本實(shí)用新型樣品墊上即可，操作十分簡便；樣品加到本實(shí)用新型樣品墊上，10分鐘肉眼即可觀測檢測結(jié)果，進(jìn)行判定，整個檢測耗時(shí)約15分鐘，耗時(shí)短。(3)本實(shí)用新型所述樣品墊長度為20mm，寬度為5mm ;所述玻璃纖維墊長度為IOmm,寬度為5mm ;所述層析膜長度為25mm,寬度為5mm ;所述吸收墊長度為20mm,寬度為5mm ;所述襯墊長度為30mm,寬度為5mm,厚度為1mm。這種大小規(guī)格,不僅提高本實(shí)用新型使用時(shí)的檢測效率，而且方便產(chǎn)品包裝和運(yùn)輸。

圖1是實(shí)施例1的俯視圖；圖2是實(shí)施例1的剖視圖。圖中標(biāo)記相對應(yīng)的部件名稱是1-樣品墊，2-玻璃纖維墊，3-試驗(yàn)線，4-對照線，5-層析膜，6-吸收墊，7-襯墊。
具體實(shí)施方式
下面通過具體實(shí)施例，并結(jié)合附圖，對本實(shí)用新型的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。實(shí)施例1如圖1和2所示，一種百日咳IgG抗體檢測卡，包括襯墊7，襯墊7的主體為塑料墊，塑料墊的表面涂覆有不干膠，所述襯墊7上沿水平方向依次固定具有吸水性能的樣品墊I (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)、玻璃纖維墊2 (Ahlstrom8964玻纖,上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號JY-JlOl)、層析膜5 (硝酸纖維素膜，Millipore公司，型號135s)和具有吸水性能的吸收墊6 (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)。所述玻璃纖維墊2為均勻噴涂有帶SPA標(biāo)記的紅色膠乳顆粒(紅色聚苯乙烯膠乳顆粒，上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號PSR030N)的玻璃纖維墊，膠乳顆粒進(jìn)行標(biāo)記的方法為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不作贅述。所述層析膜5上設(shè)置試驗(yàn)線3和對照線4，所述試驗(yàn)線3和對照線4平行；并且試驗(yàn)線3位于樣品墊I和對照線3之間。所述試驗(yàn)線3是將滅活的純化的百日咳桿菌毒素(蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司)或者百日咳桿菌絲狀血凝素(蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司)固定在層析膜5上形成。所述對照線4是將SPA (市售，鄭州百基生物技術(shù)有限公司)固定在層析膜5上形成。純化百日咳桿菌毒素及百日咳桿菌絲狀血凝素、SPA固定方法均為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不作贅述。本實(shí)用新型中，所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6以水平方向順序相接。具體地，所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6順序相接的方式是部分重疊的，即樣品墊I的尾端搭接在玻璃纖維墊2上，玻璃纖維墊2的尾端搭接在層析膜5的首端上，吸收墊6的首端搭接在層析膜5的尾端上。進(jìn)一步的，本實(shí)用新型所述樣品墊I長度為20mm，寬度為5mm ;所述玻璃纖維墊2長度為IOmm,寬度為5mm ;所述層析膜5長度為25mm,寬度為5mm ;所述吸收墊6長度為20mm,寬度為5mm ;所述襯墊7長度為30mm,寬度為5mm,厚度為1mm。[0032]實(shí)施例2本實(shí)施例與實(shí)施例1基本相同，其不同部分僅在于所述玻璃纖維墊2為均勻噴涂有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標(biāo)記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊，所述對照線4為將羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜5上形成。實(shí)施例3本實(shí)施例與實(shí)施例1基本相同，其不同部分僅在于所述樣品墊1、玻璃纖維墊2、層析膜5和吸收墊6的順序相接的方式是首尾連接并且沒有重疊的。實(shí)施例4本實(shí)施例與實(shí)施例3基本相同，其不同部分僅在于所述玻璃纖維墊2為噴涂有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標(biāo)記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊，所述對照線4為將羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜5上形成。本實(shí)用新型使用時(shí)，只需將待檢樣品用生理鹽水1:1稀釋，直接加到本實(shí)用新型的樣品墊上即可，操作十分簡便；樣品加到本實(shí)用新型樣品墊上，10分鐘肉眼即可觀測檢測結(jié)果，進(jìn)行判定，如試驗(yàn)線3和對照線4均顯色，血清抗體為陽性；只有對照線4 一條線顯色，血清抗體為陰性。整個檢測耗時(shí)約15分鐘，耗時(shí)短。以上所述的實(shí)施例只是本實(shí)用新型的一種較佳的實(shí)施方案，并非對本實(shí)用新型任何形式上的限制，在不超過權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體以及改型。
權(quán)利要求1.一種百日咳IgG抗體檢測卡，其特征在于，包括襯墊(7)、樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊￠);所述樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)以水平方向順序相接并固定在所述襯墊(7)上；并且所述玻璃纖維墊(2)上噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜(5)上設(shè)置試驗(yàn)線(3)，所述試驗(yàn)線(3)是將百日咳桿菌毒素或者百日咳桿菌絲狀血凝素固定在層析膜(5)上形成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的百日咳IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述層析膜(5)上還設(shè)置對照線(4)，并且所述試驗(yàn)線(3)位于所述樣品墊(I)和所述對照線(4)之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的百日咳IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述襯墊(7)的主體為塑料墊。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的百日咳IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述樣品墊(I)長度為20mm,寬度為5mm ;所述玻璃纖維墊(2)長度為IOmm,寬度為5mm ;所述層析膜(5)長度為25mm,寬度為5mm ;所述吸收墊(6)長度為20mm,寬度為5mm ;所述襯墊(7)長度為30mm,寬度為5mm,厚度為1mm。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的百日咳IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述玻璃纖維墊(2)為噴涂有帶SPA標(biāo)記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊(2)，所述對照線(4)為SPA固定在層析膜(5)上形成的對照線。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的百日咳IgG抗體檢測卡，其特征在于，所述玻璃纖維墊(2)為噴涂有帶鼠抗人IgG單克隆抗體標(biāo)記的彩色膠乳顆粒的玻璃纖維墊(2)，所述對照線(4)為羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜(5)上形成的對照線(4)。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種百日咳IgG抗體檢測卡，包括襯墊(7)、樣品墊(1)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)；所述樣品墊(1)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)以水平方向順序相接并固定在所述襯墊(7)上；并且所述玻璃纖維墊(2)上噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒；所述層析膜(5)上設(shè)置試驗(yàn)線(3)，所述試驗(yàn)線(3)是將百日咳桿菌毒素或者百日咳桿菌絲狀血凝素固定在層析膜(5)上形成。本實(shí)用新型百日咳IgG抗體檢測卡能快速、有效的檢測人接種疫苗后體內(nèi)是否產(chǎn)生了特異性保護(hù)抗體。
文檔編號G01N33/569GK202854142SQ201220591890
公開日2013年4月3日 申請日期2012年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月9日
發(fā)明者范亞民, 李曉霞 申請人:寧波天潤生物藥業(yè)有限公司