本實(shí)用新型涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種卡介苗接種效果快速評價(jià)試劑盒。

背景技術(shù)：

結(jié)核病的主要致病菌是結(jié)核分枝桿菌，牛分枝桿菌是引起牛發(fā)生結(jié)核病的分枝桿菌，也可以感染人發(fā)生結(jié)核病。

肺結(jié)核早期或輕度肺結(jié)核，可無任何癥狀或癥狀輕微而被忽視，若病變處于活動(dòng)進(jìn)展階段時(shí)，可出現(xiàn)發(fā)熱、咳嗽咳痰、痰中帶血等癥狀。

按照免疫反應(yīng)的一般規(guī)律：人體感染細(xì)菌后，抗體免疫系統(tǒng)首先產(chǎn)生IgM抗體并釋放至血液中。數(shù)周后隨著免疫反應(yīng)的進(jìn)展，免疫細(xì)胞將產(chǎn)生IgG抗體(此時(shí)IgG及IgM并存)。IgM抗體通常將會在數(shù)月內(nèi)逐漸消退IgG則在血液中存留較長的時(shí)間。由于結(jié)核感染一般是個(gè)慢性的疾病過程，結(jié)核體持續(xù)存在體內(nèi)，則可持續(xù)不斷的刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG。

因此IgM抗體陽性表示是早期階段的初期結(jié)核病菌感染；IgG及IgM同時(shí)陽性表明初期結(jié)核病菌感染正由早期轉(zhuǎn)成后期，IgG抗體陽性說明是后期階段或慢性結(jié)核病菌感染。

目前結(jié)核病診斷缺乏快速的方法，確診只有通過臨床標(biāo)本培養(yǎng)出抗酸分枝桿菌并行菌型鑒定為結(jié)核分枝桿菌方能確定，雖然該法特異性高，但檢出率低，且需費(fèi)時(shí)2～8周，因而無法早期明確診斷，特別是對涂陰、培陰、無痰的肺結(jié)核病人或肺外結(jié)核病人更難以診斷，影響到治療方案的確定。

檢測血液中結(jié)核IgG及IgM抗體可為結(jié)核的診斷提供有效的參考信息，尤其是結(jié)核IgM抗體的檢測對于結(jié)核病的診斷有著重大的意義。它是早期感染的標(biāo)志，早發(fā)現(xiàn)，早治療，可以大大提高結(jié)核病的治愈率，并且間接地降低了結(jié)核病的發(fā)生率。由于抗體存在于血液中，其檢測對于臨床陽性但細(xì)菌學(xué)陰性的病人，尤其肺外結(jié)核是一個(gè)很好的輔助診斷措施。

防治結(jié)核病最有效的手段就是接種卡介苗，卡介苗是一種用來預(yù)防兒童結(jié)核病的預(yù)防接種疫苗。接種后可使兒童產(chǎn)生對結(jié)核病的特殊抵抗力。由于這一疫苗是由兩位法國學(xué)者卡邁爾與介蘭發(fā)明的，為了紀(jì)念發(fā)明者，將這一預(yù)防結(jié)核病的疫苗定名為“卡介苗”。目前，世界上多數(shù)國家都已將卡介苗列為計(jì)劃免疫必須接種的疫苗之一。卡介苗接種的主要對象是新生嬰幼兒，接種后可預(yù)防發(fā)生兒童結(jié)核病，特別是能防止那些嚴(yán)重類型的結(jié)核病，如結(jié)核性腦膜炎。

接種卡介苗對兒童的健康成長很有好處，在預(yù)防結(jié)核病，特別是可能危及兒童生命的嚴(yán)重類型結(jié)核病，如結(jié)核性腦膜炎、粟粒性結(jié)核病等方面具有相當(dāng)明顯的作用。世界衛(wèi)生組織(WHO)研究證實(shí)，接種卡介苗預(yù)防結(jié)核性腦膜炎和播散性結(jié)核病的平均有效率為86％；預(yù)防結(jié)核相關(guān)死亡的有效率為 65％，預(yù)防結(jié)核性腦膜炎死亡的有效率為64％，預(yù)防播散性結(jié)核死亡的有效率為78％。多年來，通過卡介苗接種已挽救了成千上萬的生命。

評價(jià)疫苗免疫效果最可靠的方法就是檢測接種者體內(nèi)血清中的特異抗體的含量。當(dāng)前市場上檢測結(jié)核分枝桿菌抗體的商品化試劑盒多采用酶聯(lián)免疫法和化學(xué)發(fā)光法，這些方法雖然靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、化學(xué)發(fā)光試劑還可以對抗體進(jìn)行定量，但在實(shí)際操作上存在諸多不便，如步驟復(fù)雜、耗時(shí)較長，還需使用特定的儀器設(shè)備；試劑盒需4℃保存；對樣品要求靜脈采血等，不易在基層普及運(yùn)用。

免疫膠體金快速診斷技術(shù)是建立在酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、單克隆抗體技術(shù)和免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)基礎(chǔ)上，以膠體金為標(biāo)記物，利用特異的抗原抗體反應(yīng)放大反應(yīng)信號,通過直接觀察就可以判定結(jié)果的新技術(shù)。該技術(shù)具有簡單、快速、準(zhǔn)確和無污染等優(yōu)點(diǎn)，在臨床醫(yī)學(xué)檢測、動(dòng)物醫(yī)學(xué)檢測、激素檢測、食品安全檢測、藥物殘留和毒品快速檢測等諸多診斷領(lǐng)域迅速發(fā)展。目前，膠體金標(biāo)記快速檢測抗體的方法大體分為兩種：一種是將抗原標(biāo)金，待測抗體的抗體劃膜；另一種是將抗原劃膜，待測抗體的抗體標(biāo)金。現(xiàn)有研究表明：因?yàn)榭贵w蛋白性質(zhì)較為穩(wěn)定，所以對抗體蛋白的膠體金標(biāo)記較為穩(wěn)定，上述第一種方法所述的抗原的膠體金標(biāo)記則存在頗多問題，因?yàn)榭乖酁椴《绢?，性質(zhì)多樣，有的大小甚至比膠體金顆粒還大，且穩(wěn)定性較差，因此很難直接將抗原標(biāo)記在膠體金顆粒上；即使勉強(qiáng)能將抗原標(biāo)記上，也需要抗原達(dá)到極高的純度，而對抗原病毒的純化是一項(xiàng)難度較大、成本較高的工程；也有人尋找抗原的重組抗原來代替這些天然抗原，但是很多抗原很難尋到能替代的重組抗原，而且即使有，成本也是極高的，因此上述第一種方法的局限性比較高。上述的第二種方法是將抗原進(jìn)行劃膜，這種方法使用待測抗體的抗體進(jìn)行金標(biāo)記，可以避免抗原金標(biāo)記的問題，但將抗原劃到膜上發(fā)生反應(yīng)，需要抗原具有較高的濃度和純度，這也增加了產(chǎn)品生產(chǎn)的成本和難度；另外將抗原劃到膜上，由于抗原穩(wěn)定性較差，很難長時(shí)間保存，檢測試紙的有效期極短。這些都是限制抗體快速檢測類試劑盒快速發(fā)展的原因。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問題是提供一種卡介苗接種效果快速評價(jià)試劑盒，解決采用膠體金標(biāo)記時(shí)抗原的顆粒大，純度要求高以及采用抗原劃膜時(shí)，由于抗原穩(wěn)定性差，很難長時(shí)間保存，檢測試紙的有效期極短的問題。

本實(shí)用新型解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種卡介苗接種效果快速評價(jià)試劑盒，包括包裝盒、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙；所述包裝盒包括盒體和蓋體，所述盒體內(nèi)設(shè)有第一隔板，所述第一隔板將所述盒體分為第一容納腔和第二容納腔，所述檢測試紙?jiān)O(shè)于所述第一容納腔內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔內(nèi)；所述蓋體包括第一蓋體和第二蓋體，所述第一蓋體設(shè)于所述第一容納腔的上方，所述第二蓋體設(shè)于所述第二容納腔的上方；所述第一容納腔內(nèi)設(shè)有若干個(gè)第二隔板，若干個(gè)所述第二隔板分別與所述盒體的外壁圍成第三容納腔，所述第三容納腔內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板上設(shè)有多個(gè)直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔；所述第二蓋體上設(shè)有卡槽，所述卡槽設(shè)于所述第二蓋體遠(yuǎn)離所述第一蓋體的一側(cè)的內(nèi)壁上，所述盒體上設(shè)有與所述卡槽相配合的第二凸起；所述檢測試紙包括包被膜、標(biāo)記物結(jié)合墊和抗原墊；所述抗原墊上包被有結(jié)核分枝桿菌抗原，所述標(biāo)記物結(jié)合墊上包被有膠體金標(biāo)記的鼠抗結(jié)核分枝桿菌抗原單克隆抗體，所述包被膜上固定有檢測T線和質(zhì)控C線，所述檢測T線上包被有鼠抗人IgG 抗體，所述質(zhì)控C線上包被羊抗鼠IgG抗體；所述檢測試紙的最低檢測線為 0IU/ml。

本實(shí)用新型的有益效果是：所采用的檢測試紙，通過引進(jìn)結(jié)核分枝桿菌抗原墊，同時(shí)在抗原墊中加入抗原保護(hù)液，解決了結(jié)核分枝桿菌抗原由于穩(wěn)定性差而不容易被金標(biāo)記的問題；另一方面，采用的結(jié)核分枝桿菌抗原為粗抗原，在檢測試紙反應(yīng)層析過程中，已經(jīng)通過雙抗體夾心法對粗抗原進(jìn)行了篩選和純化，保證了試劑反應(yīng)的特異性，因此不需對粗抗原進(jìn)一步純化就能達(dá)到反應(yīng)效果，制備成本低，利用推廣應(yīng)用。另采用的卡介苗接種效果快速評價(jià)試劑盒將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙均設(shè)于包裝盒內(nèi)，用戶在使用時(shí)，無需另外準(zhǔn)備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙分別置于試劑盒的兩個(gè)容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個(gè)蓋體，使試劑盒的結(jié)構(gòu)更加緊湊，另用戶在使用時(shí)只需打開第二蓋體即可取出樣品稀釋液，不會對檢測試紙?jiān)斐筛蓴_；另在包裝盒內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為0IU/ml，可實(shí)現(xiàn)對卡介苗接種效果的快速評估。

進(jìn)一步：所述第二隔板的數(shù)量為兩個(gè)，兩個(gè)所述的第二隔板分別設(shè)于所述第一容納腔的前端和后端。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：通過設(shè)置兩個(gè)第二隔板，進(jìn)一步的設(shè)置有兩個(gè)第三容納腔，且每個(gè)第三容納腔內(nèi)均放有干燥劑，加強(qiáng)對濕氣、氧氣的吸收。

進(jìn)一步：所述第一容納腔內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙的定位裝置。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：通過定位裝置可將檢測試紙鎖緊在第一容納腔中，防止其左右晃動(dòng)。

進(jìn)一步：所述定位裝置包括定位組件和活動(dòng)組件，所述定位組件和所述活動(dòng)組件分別設(shè)于所述第一容納腔的左端和右端；所述定位組件包括底板和 U型定位塊，所述底板固定于所述盒體上；所述U型定位塊固定于所述底板的上方，且所述U型定位塊的開口端朝向所述活動(dòng)組件；所述活動(dòng)組件包括固定板、活動(dòng)板和銅片，所述固定板固定于所述盒體上；所述銅片的一端嵌設(shè)于所述固定板中，所述銅片的另一端抵設(shè)于所述活動(dòng)板上，所述活動(dòng)板可在所述盒體內(nèi)移動(dòng)。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：定位組件主要用于對檢測試紙的放置位置進(jìn)行定位，活動(dòng)組件可根據(jù)檢測試紙的具體大小進(jìn)行調(diào)整，是檢測試紙能夠卡緊在包裝盒中，避免其左右晃動(dòng)。

進(jìn)一步：所述活動(dòng)板的底部設(shè)有若干個(gè)凸起，所述盒體的底部設(shè)有若干個(gè)與所述凸起相匹配的滑槽。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：活動(dòng)板的底部設(shè)置凸起，且在盒體上設(shè)置與所述凸起相匹配的滑槽，可對活動(dòng)板在盒體內(nèi)的移動(dòng)進(jìn)行導(dǎo)向，防止活動(dòng)板的偏移。

進(jìn)一步：所述第一蓋體上的加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：第三圓筒起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時(shí)，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。

進(jìn)一步：所述第二容納腔內(nèi)設(shè)有第二圓筒，所述第二圓筒用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。

上述進(jìn)一步方案的有益效果是：將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。

進(jìn)一步：所述標(biāo)記物結(jié)合墊為玻璃纖維。

進(jìn)一步：所述抗原墊為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。

上述進(jìn)兩步方案的有益效果是：使樣品加入到檢測試紙上后，可通過靜電作用和疏水相互作用等物理作用與蛋白質(zhì)結(jié)合且能通過毛細(xì)管現(xiàn)象展開。

附圖說明

圖1為本實(shí)用新型卡介苗接種效果快速評價(jià)試劑盒中的包裝盒的爆炸圖；

圖2為本實(shí)用新型中的檢測試紙的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖3為本實(shí)用新型中的包裝盒在揭開第二蓋體時(shí)的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖4為本實(shí)用新型中的活動(dòng)組件的結(jié)構(gòu)示意圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖對本實(shí)用新型的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本實(shí)用新型，并非用于限定本實(shí)用新型的范圍。

如圖1至圖4所示，一種卡介苗接種效果快速評價(jià)試劑盒包括包裝盒1、樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3；所述包裝盒1包括盒體12和蓋體13，所述盒體12內(nèi)設(shè)有第一隔板11，第一隔板11將所述盒體12分為第一容納腔 111和第二容納腔112；所述檢測試紙3設(shè)于所述第一容納腔111內(nèi)，所述樣品稀釋液盛裝容器設(shè)于所述第二容納腔112內(nèi)；所述蓋體13包括第一蓋體131和第二蓋體132，所述第一蓋體131設(shè)于所述第一容納腔111的上方，所述第二蓋體132設(shè)于所述第二容納腔112的上方；所述第一容納腔111內(nèi)設(shè)有若干個(gè)第二隔板1115，若干個(gè)所述第二隔板1115分別與所述盒體12 的外壁圍成第三容納腔1116，所述第三容納腔1116內(nèi)填充有干燥劑；所述第二隔板1115上設(shè)有多個(gè)直徑小于干燥劑粒徑的透氣孔1117；所述檢測試紙3包括包被膜32、標(biāo)記物結(jié)合墊33和抗原墊34；所述抗原墊34上包被有結(jié)核分枝桿菌抗原，所述標(biāo)記物結(jié)合墊33上包被有膠體金標(biāo)記的鼠抗結(jié)核分枝桿菌抗原單克隆抗體，所述包被膜32上固定有檢測T線321和質(zhì)控C 線322，所述檢測T線321上包被有鼠抗人IgG抗體，所述質(zhì)控C線322上包被羊抗鼠IgG抗體；所述檢測試紙3的最低檢測線為0IU/ml(0IU/ml 表示最低檢測線為零)。將樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3均設(shè)于包裝盒 1內(nèi)，用戶在使用時(shí)，無需另外準(zhǔn)備樣品稀釋液，使用更加方便，且樣品稀釋液盛裝容器和檢測試紙3分別置于試劑盒的兩個(gè)容納腔中，且均對應(yīng)的設(shè)置一個(gè)蓋體13，使試劑盒的尺寸更加緊湊，另用戶在使用時(shí)只需打開第二蓋體132即可取出樣品稀釋液，不會對檢測試紙3造成干擾；另在包裝盒1內(nèi)放有干燥劑，可吸收試劑盒內(nèi)的濕氣、氧氣，有效延長試劑瓶儲存診斷試劑的保存期限；另將試劑盒的靈敏度設(shè)置為0IU/ml，可實(shí)現(xiàn)對卡介苗接種效果的快速評估。

如圖1所示，在第二隔板1115上設(shè)有多個(gè)通氣孔1117，可加強(qiáng)干燥劑的吸濕效果。所述第二隔板1115優(yōu)選為兩個(gè)，兩個(gè)所述第二隔板1115分別設(shè)于所述第一容納腔111的前后兩端，設(shè)于所述第一容納腔111前方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的前側(cè)壁延伸形成第三容納腔 1116，設(shè)于所述第一容納腔111后方的所述第二隔板1115的兩端均向第一容納腔111的后側(cè)壁延伸形成另一第三容納腔1116。

所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有用于固定所述檢測試紙3的定位裝置。通過定位裝置可將檢測試紙3鎖緊在第一容納腔111中，防止其左右晃動(dòng)。

如圖1所示，所述定位裝置包括定位組件1112和活動(dòng)組件1113，所述定位組件1112和所述活動(dòng)組件1113分別設(shè)于所述第一容納腔111的左端和右端；所述定位組件1112包括底板11121和U型定位塊11122，所述底板 11121固定于所述盒體12上；所述U型定位塊11122固定于所述底板11121 的上方，且所述U型定位塊11122的開口端朝向所述活動(dòng)組件1113；所述活動(dòng)組件1113包括固定板11131、活動(dòng)板11133和銅片11132，所述固定板 11131固定于所述盒體12上；所述銅片11132的一端嵌設(shè)于所述固定板11131 中，所述銅片11132的另一端翹起，翹起的所述銅片11132抵設(shè)于所述活動(dòng)板11133上，所述活動(dòng)板11133可在所述盒體12內(nèi)移動(dòng)。定位組件1112主要用于對檢測試紙3的放置位置進(jìn)行定位，活動(dòng)組件1113可根據(jù)檢測試紙3 的具體大小進(jìn)行調(diào)整，使檢測試紙3能夠卡緊在包裝盒1中，避免其左右晃動(dòng)。

如圖1和圖4所示，所述活動(dòng)板11133的底部設(shè)有若干個(gè)凸起11134，所述盒體12的底部設(shè)有若干個(gè)與所述凸起11134相匹配的滑槽1118。凸起 11134和滑槽1118的設(shè)置可對活動(dòng)板在盒體12內(nèi)的移動(dòng)進(jìn)行導(dǎo)向，防止活動(dòng)板11133的偏移。

如圖1所示，所述第一容納腔111內(nèi)還設(shè)有多個(gè)交叉型凸筋1114，多個(gè)所述交叉型凸筋1114均設(shè)于所述定位組件1112與所述活動(dòng)組件1113之間，所述第一蓋體131在與每個(gè)所述交叉型凸筋1114相匹配的位置上均設(shè)有多個(gè)凸條1312。通過設(shè)置交叉型凸筋1114和與交叉型凸筋1114相匹配的多個(gè)凸條1312，可對檢測試紙3起到良好的支撐以及固定的作用。

如圖1所示，所述第一蓋體131上設(shè)有加樣口，所述加樣口設(shè)于所述樣品墊35上方的所述第一蓋體131上，所述加樣口的底部向下延伸形成第三圓筒1313。第三圓筒1313起到導(dǎo)流的作用，可防止添加樣品或添加樣品稀釋液時(shí)，液體到處散濺，且能夠保證添加的樣品稀釋液與樣品的位置一致，起到良好的稀釋作用。

所述第一蓋體131上還設(shè)有防塵塞，所述防塵塞與所述加樣口相匹配?？煞乐辜訕涌谔幘奂覊m、雜質(zhì)，影響檢測試紙3檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。所述第一蓋體131上還設(shè)有觀察窗1314，所述觀察窗1314設(shè)于所述包被膜32 上方的所述第一蓋體131上。便于用戶觀察檢測結(jié)果。

如圖1和圖3所示，所述第一蓋體131與所述第二蓋體132之間通過鉸鏈133連接，且所述第一蓋體131與所述盒體12之間、所述第二蓋體132 與所述盒體12之間均通過卡合方式連接。具體的，所述第一容納腔111內(nèi)設(shè)有多個(gè)第一圓筒1111，所述第一蓋體131上設(shè)有多個(gè)與所述第一圓筒1111 相匹配的第一凸起1311。盒體12和蓋體13之間可通過所述的第一圓筒1111 和第一凸起1311進(jìn)行卡合連接，且采用第一圓筒1111和第一凸起1311配合還具有良好的定位效果。所述第二蓋體132上設(shè)有卡槽1321，所述卡槽 1321設(shè)于所述第二蓋體132遠(yuǎn)離所述第一蓋體131的一側(cè)的內(nèi)壁上，所述盒體12上設(shè)有與所述卡槽1321相配合的第二凸起121。第二蓋體132與盒體 12之間直接采用卡槽1321與第二凸起121進(jìn)行配合連接，方便開啟。

如圖1所示，所述第二容納腔112內(nèi)設(shè)有第二圓筒1121，所述第二圓筒 1121用于放置所述樣品稀釋液盛裝容器。將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121內(nèi)，使樣品稀釋液盛裝容器的放置更加平穩(wěn)。所述樣品稀釋液盛裝容器可選為瓶體或包裝袋，且瓶體的瓶口或包裝袋的開口處設(shè)置為錐形，便于樣品稀釋液的倒出。

本實(shí)用新型卡介苗接種效果快速評價(jià)試劑盒的組裝方法為：首先撥動(dòng)活動(dòng)組件1113中的活動(dòng)板11133，將檢測試紙3的底板31放置在交叉型凸筋 1114上并使檢測試紙3靠近樣品墊35的一端卡設(shè)于定位組件1112中，松開活動(dòng)板11133將檢測試紙3抵緊；然后將樣品稀釋液盛裝容器卡設(shè)于第二圓筒1121中，然后將盒體12和蓋體13通過第一圓筒1111和第一凸起1311 進(jìn)行卡合連接，并將第二凸起121卡合在卡槽1321中。使用時(shí)，用戶只需揭開第二蓋體132，并將樣品稀釋液取出滴在加樣口處即可，操作簡單方便。

如圖2所示，所述檢測試紙3還包括底板31和吸收墊36，所述包被膜32設(shè)于所述底板31上；所述標(biāo)記物結(jié)合墊33、所述抗原墊34和所述樣品墊35依次搭接在所述包被膜32的一端，所述吸收墊36搭接在所述包被膜 32的另一端。所述抗原墊34為玻璃纖維、無紡布或聚酯膜。所述標(biāo)記物結(jié)合墊33和樣品墊35為玻璃纖維，所述吸收墊36為吸水紙。

所述的樣品稀釋液為：含磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鈉的混合水溶液。以下實(shí)施例中，樣品稀釋液的組分為：磷酸氫二鈉5.72g，磷酸二氫鈉 0.624g，氯化鈉8g，超純水定容至1L。

下面將對結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測試紙3的制備、組裝、檢測原理以及檢測效果進(jìn)行詳細(xì)的說明：

1、主要材料

抗原：結(jié)核分枝桿菌抗原購自深圳市菲鵬生物股份有限公司購入，后經(jīng)甲醛脫毒制備而成，其為粗純，不具有生物危害，用于制備抗原墊。

鼠抗人IgG單克隆抗體，購自廈門波生生物技術(shù)有限公司，用于硝酸纖維素膜T線的包被。

鼠抗結(jié)核分枝桿菌抗原單克隆抗體，購自武漢益昇生物科技有限公司，用于標(biāo)記膠體金。

羊抗鼠IgG抗體，購自杭州隆基生物技術(shù)有限公司，用于硝酸纖維素膜質(zhì)控C線的包被。

氯金酸：sigma公司產(chǎn)品。

硝酸纖維素膜：millipore公司產(chǎn)品。

牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白：sigma公司產(chǎn)品。

其余化學(xué)試劑均為分析純試劑。

臨床實(shí)驗(yàn)由公司在武漢市省級以上臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成，其中結(jié)核分枝桿菌IgG抗體陽性樣本250份，陰性樣本118份。

結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒(膠體金法)：購自北京健乃喜生物技術(shù)有限公司，是有國家局注冊證的商用產(chǎn)品。

2、標(biāo)記物結(jié)合墊33的制備

氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后，取100ml膠體金溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，調(diào)節(jié)pH至8.0，然后按每 100ml膠體金溶液0.7mg抗體加入鼠抗結(jié)核分枝桿菌抗原單克隆抗體0.7mg，繼續(xù)攪拌30min，再加入終濃度為0.5％的BSA進(jìn)行封閉，繼續(xù)攪拌30min。標(biāo)記結(jié)束后，以12000r/min對標(biāo)記液進(jìn)行離心，棄上清，然后將沉淀用復(fù)溶溶液進(jìn)行復(fù)溶至原體積，所述復(fù)溶溶液的配方為：Tris：1.965g， Casein-Na：2.5g，檸檬酸三鈉：2.5g，吐溫-20：0.50ml，蔗糖：10.0g，用超純水定容至1L。將復(fù)溶好的金標(biāo)記溶液按每1ml溶液鋪18cm²的比例均勻鋪在玻璃纖維上，置于37℃，相對濕度低于20％的環(huán)境中，干燥12-18小時(shí)，制成標(biāo)記物結(jié)合墊33。

3、抗原墊34的制備

將結(jié)核分枝桿菌抗原使用抗原保護(hù)液進(jìn)行稀釋到20倍得到抗原液，將稀釋好的抗原液按每1ml溶液鋪18cm²的比例均勻鋪在玻璃纖維、無紡布或聚酯膜上，置于37℃，相對濕度低于40％的環(huán)境中，干燥4小時(shí)，制成抗原墊34。所述抗原保護(hù)液的配方為：Na₂HPO₄：5.72g，NaH₂PO₄：0.624g，檸檬酸三鈉：8.5g，蔗糖：10g，水定容至1L；所述結(jié)核分枝桿菌抗原為粗抗原，其中抗原的含量為40wt％至45wt％。

4、包被膜32的制備

使用0.02M，pH為7.2的磷酸鹽緩沖液將鼠抗人IgG單克隆抗體分別稀釋成2.0mg/ml(T線溶液)，羊抗鼠IgG抗體稀釋至110IU/ml(C線溶液)。然后使用劃膜儀將檢測T線321與質(zhì)控C線322溶液按1.65ul/cm的出液量均勻地包被于NC膜(硝酸纖維素膜)上，NC膜已事先黏貼于塑料底板上，包被完成后，將NC膜置于37℃，相對濕度低于35％的環(huán)境中，干燥3至4 小時(shí)，制成包被膜32。

5、結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測試紙3的組裝

在干燥環(huán)境下(溫度20至25℃，相對濕度低于30％)，將包被膜32置于潔凈環(huán)境中，在靠近包被膜32的檢測T線321的一端緊密壓接標(biāo)記物結(jié)合墊33，標(biāo)記物結(jié)合墊33(標(biāo)記物結(jié)合墊33已事先切裁成6mm寬)緊密壓接在包被膜32上的長度為2mm左右，抗原墊34(抗原墊已事先切裁成10mm 寬)緊密壓接在標(biāo)記物結(jié)合墊33的另一端，抗原墊34(抗原墊34已事先切裁成10mm寬)緊密壓接在標(biāo)記物結(jié)合墊33的長度為2mm左右，樣品墊35 緊密壓接抗原墊34的另一端，樣品墊35緊密壓接抗原墊34上的長度為4 至5mm，最后用切條機(jī)將貼好的底板31切成約4mm寬的檢測試紙3。

6、結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測試紙3的使用方法

將待檢血清或血漿或全血(待檢樣品)平衡至室溫，并將制備好的檢測試紙3放入包裝盒1中，通過加樣口向樣品墊35處加入5ul待檢樣品，再加入2至3滴樣品稀釋液，若樣品中含有結(jié)核分枝桿菌IgG抗體，其將和抗原墊34中的結(jié)核分枝桿菌抗原形成結(jié)核分枝桿菌抗原-結(jié)核分枝桿菌IgG抗體復(fù)合物，該復(fù)合物向前移動(dòng)，復(fù)合物中的結(jié)核分枝桿菌抗原再與標(biāo)記物結(jié)合墊33中的膠體金標(biāo)記的鼠抗結(jié)核分枝桿菌抗原單克隆抗體結(jié)合，形成結(jié)核分枝桿菌IgG抗體-結(jié)核分枝桿菌抗原-膠體金標(biāo)記的鼠抗結(jié)核分枝桿菌單克隆抗體免疫復(fù)合物，該復(fù)合物由于層析作用沿紙條向前移動(dòng)，至檢測T線 321，復(fù)合物中的結(jié)核分枝桿菌IgG抗體與檢測T線321上包被的鼠抗人IgG 單克隆抗體反應(yīng)形成鼠抗人IgG單克隆抗體-結(jié)核分枝桿菌IgG抗體-結(jié)核分枝桿菌抗原-膠體金標(biāo)記的鼠抗結(jié)核分枝桿菌抗原單克隆抗體免疫復(fù)合物，該復(fù)合物可聚集在檢測區(qū)，當(dāng)聚集的復(fù)合物達(dá)到一定的數(shù)量時(shí)，則形成一條肉眼可見的條帶(T線)，判斷結(jié)果為陽性；若樣品中不含有結(jié)核分枝桿菌 IgG抗體，則不能形成免疫復(fù)合物，即不能形成肉眼可見的條帶，判斷結(jié)果為陰性；質(zhì)控C線322作為試劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，陽性和陰性檢測樣品均會產(chǎn)生條帶。具體的，在20分鐘內(nèi)可直接用肉眼觀察檢測T線321和質(zhì)控C線322 的顯色情況：質(zhì)控C線322不顯色，說明本試驗(yàn)失敗；質(zhì)控C線322顯色，檢測T線321不顯色說明卡介苗接種不成功；質(zhì)控C線322和檢測T線321 均顯色說明卡介苗接種成功。

7、當(dāng)結(jié)核分枝桿菌IgG抗體濃度＞0IU/ml說明人體對結(jié)核分枝桿菌具有一定的抵抗性，當(dāng)結(jié)核分枝桿菌IgG抗體濃度＝0IU/ml說明人體對結(jié)核分枝桿菌還沒有產(chǎn)生抵抗性，因此本檢測試紙將檢測結(jié)核分枝桿菌IgG抗體的檢測臨界值設(shè)置為0IU/ml，T線顯線表明結(jié)核分枝桿菌IgG抗體的濃度＞0 IU/ml，卡介苗接種成功，T線不顯線表明結(jié)核分枝桿菌IgG抗體的濃度＝0 IU/ml，卡介苗接種不成功。因此，本實(shí)用新型所述的試劑盒可以實(shí)現(xiàn)快速評價(jià)卡介苗的接種效果。

8、臨床樣品檢測結(jié)果對照

對公司收集的臨床血清樣本使用本申請檢測試紙及商用膠體金檢測試劑盒同時(shí)進(jìn)行檢測，再對檢測結(jié)果進(jìn)行對照。

以膠體金試劑盒為對照，對結(jié)核分枝桿菌IgG抗體進(jìn)行檢測，檢測出250 份結(jié)核分枝桿菌IgG陽性樣本，118份結(jié)核分枝桿菌IgG陰性樣本，而本檢測試紙檢測出252份結(jié)核分枝桿菌IgG陽性樣本，116份結(jié)核分枝桿菌IgG 陰性樣本，總體符合率為98.37％。臨床檢測結(jié)果表明，本試劑盒的性能與已獲批的膠體金試劑盒相比無顯著差異，說明本實(shí)用新型適合用于臨床檢驗(yàn)，具有實(shí)用價(jià)值。

以上所述僅為本實(shí)用新型的較佳實(shí)施例，并不用以限制本實(shí)用新型，凡在本實(shí)用新型的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本實(shí)用新型的保護(hù)范圍之內(nèi)。