本發(fā)明屬于生物體外診斷試劑制備領(lǐng)域。具體涉及一種凍干液配方及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

酶聯(lián)免疫吸附(elisa)作為國際公認(rèn)的蛋白定量金標(biāo)準(zhǔn)，具有靈敏度高，特異性好等特點(diǎn)。其中標(biāo)準(zhǔn)品是elisa試劑盒構(gòu)成的一個(gè)關(guān)鍵，標(biāo)準(zhǔn)品的保質(zhì)期直接影響到試劑盒的貨架期。目前elisa標(biāo)準(zhǔn)品的保存方法有甘油-20℃保存法和真空冷凍干燥法，此兩種方法對蛋白的穩(wěn)定性有一定的延長作用，但難以滿足試劑盒長時(shí)間的保存需求。從實(shí)際的經(jīng)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同蛋白對于同一配方的凍干液表現(xiàn)出來的保存效果不同。而市面上一般的試劑盒的保存時(shí)間為半年，令使用受到限制。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的凍干液配方。由該凍干液配方制成的elisa標(biāo)準(zhǔn)品具有較長的保質(zhì)期，尤其適用于猴細(xì)胞elisa標(biāo)準(zhǔn)品的制備。

本發(fā)明的上述目的通過如下方案予以實(shí)現(xiàn)：

一種凍干液配方，由以下按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)算的組分組成：

0.5～5％干酪素鈉，1～10％甘露醇，0.05～0.5％聚吡咯烷酮k30，余量為濃度0.01mol/l的磷酸緩沖液。

在凍干粉劑中，現(xiàn)存通常有兩種產(chǎn)品，一種是散的粉劑，一種是結(jié)合得相對緊密的粉劑，即凍干粉之間能形成一個(gè)良好的型狀，通常是餅型。而前者比較容易獲得，但在開蓋時(shí)容易使凍干粉飄出，后者則需要在賦型劑等作用下經(jīng)過配方的優(yōu)化獲得，并且可能出現(xiàn)塌陷等成型問題。

本發(fā)明中甘露醇、聚吡咯烷酮k30二者協(xié)同作用有助于蛋白的成膜，減少凍干粉在凍干后出現(xiàn)的掛壁現(xiàn)象，并且適量的k30顯著提高凍干粉的成型率。采用本發(fā)明的凍干液配方進(jìn)行凍干，能使凍干粉獲得很好的成型效果，并且產(chǎn)品外觀良好，不出現(xiàn)掛壁等不良現(xiàn)象。

磷酸緩沖液的ph值可以參考現(xiàn)有技術(shù)。最優(yōu)選地，所述磷酸緩沖液的ph值為7.4。

最優(yōu)選地，所述干酪素鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最優(yōu)選為1％。

最優(yōu)選地，所述甘露醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最優(yōu)選為5％。

所述凍干液配方在制備含有蛋白的凍干粉中的應(yīng)用。

現(xiàn)有技術(shù)中，為了確保凍干效果良好，通常不會(huì)在凍干瓶(西林瓶)中添加過多的蛋白溶液，因?yàn)槿绻芤后w積過多，液面高度過大，會(huì)使凍干變得困難，凍干效果變差。而本發(fā)明的優(yōu)選配方，則是可以在液面較高時(shí)，依然保持較好的凍干效果，優(yōu)選地，所述凍干液適用于容積為3ml的西林瓶，每瓶加入1ml的由所述凍干液配成的蛋白溶液。

本發(fā)明的凍干液對多種細(xì)胞因子都有很好的凍干效果?，F(xiàn)有的elisa試劑盒產(chǎn)品中，猴細(xì)胞因子的產(chǎn)品甚少，所以對其保存方式和保存周期的研究并不多。而本發(fā)明的凍干液適用于猴細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品的制備，其保質(zhì)期可以達(dá)到兩年。

優(yōu)選地，所述猴細(xì)胞因子為猴細(xì)胞因子il-12或23。

本發(fā)明所述凍干液的制備方法為，將干酪素鈉、甘露醇、聚吡咯烷酮k30溶解于磷酸緩沖液中得到。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

本發(fā)明通過對凍干液配方的合理搭配，利用甘露醇、聚吡咯烷酮k30二者協(xié)同作用有助于蛋白的成膜，減少凍干粉在凍干后出現(xiàn)的掛壁現(xiàn)象，提高凍干粉的成型率。采用本發(fā)明的凍干液配方進(jìn)行凍干，能獲得很好的成型效果，并且產(chǎn)品外觀良好，不出現(xiàn)掛壁等不良現(xiàn)象。本凍干液對多種細(xì)胞因子都有很好的凍干效果，尤其是對猴細(xì)胞因子有很好的凍干效果。采用本發(fā)明的凍干液制成的猴細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品保質(zhì)期可以達(dá)到兩年。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步的解釋說明，但具體實(shí)施例并不對本發(fā)明作任何限定。除非特別說明，實(shí)施例中，所涉及的試劑、方法均為本領(lǐng)域常用的試劑和方法。

實(shí)施例1

凍干液制備：1％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的干酪素鈉，5％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的甘露醇，0.1％質(zhì)量分?jǐn)?shù)的聚吡咯烷酮k30(pvpk30)溶解于0.01mol/lph為7.4的磷酸緩沖液(pbs)。

其余實(shí)施例和對比例的配方見表1

表1

猴細(xì)胞因子il-12/23elisa標(biāo)準(zhǔn)品的制備，包括如下步驟：

s1.對冷凍干燥的相關(guān)設(shè)備，例如西林瓶、架子、托盤進(jìn)行預(yù)冷，預(yù)冷至4℃；

s2.將猴細(xì)胞因子il-12/23標(biāo)準(zhǔn)蛋白用水溶解后，配制成母液，母液采用各實(shí)施例或?qū)Ρ壤膬龈梢合♂屩聊繕?biāo)濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液；

s3.將s2.得到的標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液分裝至s1.已預(yù)冷的容積為3ml西林瓶中，每瓶內(nèi)裝入1ml蛋白溶液，輕蓋上蓋子；

s4.將s3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空凍干機(jī)中至完全干燥，得到猴細(xì)胞因子il-12/23elisa標(biāo)準(zhǔn)品。其中實(shí)施例1、4、5為猴細(xì)胞因子il-12，實(shí)施例2、3為猴細(xì)胞因子il-23。對比例1～5均為猴細(xì)胞因子il-12。

本實(shí)施例1～5所得猴細(xì)胞因子il-12/23elisa標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)過37℃加速老化試驗(yàn)，可以放置14天，采用elisa實(shí)驗(yàn)測試其活性，損失率小于1％，根據(jù)阿倫尼烏斯公式結(jié)論，采用本發(fā)明制備的猴細(xì)胞因子il-12/23elisa標(biāo)準(zhǔn)品用于elisa試劑盒4℃可保存2年以上。

凍干前后蛋白活性測試：

采用elisa法對實(shí)施例1制備的猴細(xì)胞因子il-12/23elisa標(biāo)準(zhǔn)品的蛋白活性進(jìn)行測試，每一個(gè)濃度測試5個(gè)樣品，對比凍干后，加速老化14天與凍干前活性比值。詳細(xì)結(jié)果見表2

表2

比較實(shí)施例與對比例得到的猴細(xì)胞因子elisa標(biāo)準(zhǔn)品的外觀、活性損失率和成型率，結(jié)果如表3所示：

表3

從實(shí)施例與對比例1、2、3、4、5對比可以看出，當(dāng)不選用本發(fā)明所述的配方時(shí)，凍干粉的產(chǎn)品容易存在掛壁現(xiàn)象，外觀不佳，并且成型率出現(xiàn)明顯下降，凍干過程的活性損失率升高，保存時(shí)間縮短。

人細(xì)胞因子il-12/23elisa標(biāo)準(zhǔn)品的制備，包括如下步驟：

s1.對冷凍干燥的相關(guān)設(shè)備，例如西林瓶、架子、托盤進(jìn)行預(yù)冷，預(yù)冷至4℃；

s2.將人細(xì)胞因子il-12/23標(biāo)準(zhǔn)蛋白用水溶解后，配制成母液，母液采用各實(shí)施例或?qū)Ρ壤膬龈梢合♂屩聊繕?biāo)濃度，得到標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液；

s3.將s2.得到的標(biāo)準(zhǔn)濃度蛋白溶液分裝至s1.已預(yù)冷的容積為3ml西林瓶中，每瓶內(nèi)裝入1ml蛋白溶液，輕蓋上蓋子；

s4.將s3.盛有蛋白溶液的西林瓶放置在真空凍干機(jī)中至完全干燥，得到人細(xì)胞因子il-12/23elisa標(biāo)準(zhǔn)品。其中實(shí)施例1、4、5為人細(xì)胞因子il-12，實(shí)施例2、3為人細(xì)胞因子il-23。對比例1～5均為人細(xì)胞因子il-12。

比較實(shí)施例與對比例得到的人細(xì)胞因子elisa標(biāo)準(zhǔn)品的外觀、活性損失率和成型率，結(jié)果如表4所示：

表4

可以看出，本凍干液也適用于其它細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品的制備。