本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種梨形蟲血涂片復(fù)合染液及血涂片的染色方法。

背景技術(shù)：

梨形蟲病（piroplasmosis），又名“焦蟲病”或“血孢子蟲病”。是一類經(jīng)硬傳播的血液寄生原蟲病，包括泰勒蟲（theileriaapp）和巴貝斯蟲（babesiaapp）所引起的血液原蟲病的總稱。多見于牛、馬、羊等家畜和嚙齒類動物及其它野生動物，本病臨床上出現(xiàn)稽留熱、貧血、呼吸困難、黃疸等癥狀，如診治不及時，死亡率極高，本病在世界各地廣泛流行，給畜牧業(yè)和國民經(jīng)濟(jì)造成巨大損失，據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織（fao）統(tǒng)計，蜱和蜱傳血液原蟲病每年可給畜牧業(yè)生產(chǎn)造成大約70億美元的經(jīng)濟(jì)損失。該病在我國分布廣泛，全國31個省市幾乎都有本病的發(fā)生或病原分離的報道，對我國畜牧業(yè)的生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。據(jù)估計，我國每年約有3500萬頭（只）小反芻動物感染梨形蟲病，直接年經(jīng)濟(jì)損失可達(dá)3-4億元。由于本病的病原是由硬蜱傳播，所以一旦傳入將很難消除。目前在有關(guān)文獻(xiàn)中提到用血液涂片針對蟲體進(jìn)行染色，其染色方法過于復(fù)雜，用時較長，并且染色效果不理想，染色雜質(zhì)較多，影響觀察蟲體。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一：研制一種梨形蟲血涂片復(fù)合染液配方，使用這種配方能很好對梨形蟲進(jìn)行染色，便于觀察和教學(xué)；之二就是利用上述染料通過設(shè)計合理的染色方法能更好的對血液中的梨形蟲進(jìn)行染色。

本發(fā)明的技術(shù)方案一：一種梨形蟲血涂片復(fù)合染液，所述復(fù)合染液包括復(fù)合染液ⅰ和復(fù)合染夜ⅱ；所述的復(fù)合染液ⅰ是由瑞氏染料2g、吉姆薩色素1.7g、甘油50ml及甲醇1000ml組成，具體制備方法為：將瑞氏染料2g及吉姆薩色素1.7g加入研缽中，加50ml甘油研磨成均勻糊狀后加入1000ml甲醇，研磨并收集上層染液保存于棕色瓶中，即可；所述復(fù)合染液ⅱ是由無水磷酸二氫鈉2.3g、無水磷酸二氫鉀0.3g及1000ml的蒸餾水組成，具體制備方法為：將無水磷酸二氫鈉2.3g、無水磷酸二氫鉀0.3g加入1000ml的蒸餾水中溶解，制備出ph值為6.5-6.8磷酸緩沖液即可。

本發(fā)明的技術(shù)方案二、一種梨形蟲血涂片的染色方法，該染色方法包括下述步驟：

一、用移液器吸取20μl帶有梨形蟲的血滴，滴到載玻片a一端，另取一塊邊緣光滑載玻片b作為推片，放在血滴正中，使血液沿載玻片b邊沿勻開，后將載玻片b45°放到載玻片a空白地方向后推片，使載玻片a片上留下一層薄血膜；推片成功之后室溫放置，使血膜干燥，涂片時需注意血膜的厚度，紅細(xì)胞分布要均勻，保證紅細(xì)胞不要堆積，同時血膜上不能有間隙，備用；

二、將步驟一中制備好的血涂片放置室溫5分鐘，待血液完全風(fēng)干后放入甲醇中對紅細(xì)胞進(jìn)行固定，再次放置在室溫中3分鐘，待甲醇揮發(fā)干凈，備用；

三、將步驟二中制備好的血涂片放入復(fù)合染液ⅰ中1-1.5min；然后取出血涂片放入復(fù)合染液ⅱ中1-2min；最后再用清水進(jìn)行輕輕涮洗，室溫晾干即可染色制成梨形蟲血涂片。

上述技術(shù)方案中涉及到的材料均為市售可得。

有益效果：本發(fā)明的復(fù)合染料和染色方法在不需借助高端的儀器設(shè)備的情況下對梨形蟲染色效果較好，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，所需時間較短，無雜質(zhì)干擾觀察蟲體，效果極為突出。

附圖說明

附圖1為牛雙芽巴貝斯血涂片；附圖2為牛巴貝斯血涂片；附圖3為馬駑巴貝斯蟲血涂片。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1、一種梨形蟲血涂片復(fù)合染液，所述復(fù)合染液包括復(fù)合染液ⅰ和復(fù)合染夜ⅱ；所述的復(fù)合染液ⅰ是由瑞氏染料2g、吉姆薩色素1.7g、甘油50ml及甲醇1000ml組成，具體制備方法為：將瑞氏染料2g及吉姆薩色素1.7g加入研缽中，加50ml甘油研磨成均勻糊狀后加入1000ml甲醇，研磨并收集上層染液保存于棕色瓶中，即可；所述復(fù)合染液ⅱ是由無水磷酸二氫鈉2.3g、無水磷酸二氫鉀0.3g及1000ml的蒸餾水組成，具體制備方法為：將無水磷酸二氫鈉2.3g、無水磷酸二氫鉀0.3g加入1000ml的蒸餾水中溶解，制備出ph值為6.5-6.8磷酸緩沖液即可。

實(shí)施例2、一種梨形蟲血涂片的染色方法，該染色方法包括下述步驟：

一、用移液器吸取20μl帶有梨形蟲的血滴，滴到載玻片a一端，另取一塊邊緣光滑載玻片b作為推片，放在血滴正中，使血液沿載玻片b邊沿勻開，后將載玻片b45°放到載玻片a空白地方向后推片，使載玻片a片上留下一層薄血膜；推片成功之后室溫放置，使血膜干燥，涂片時需注意血膜的厚度，紅細(xì)胞分布要均勻，保證紅細(xì)胞不要堆積，同時血膜上不能有間隙，備用；

二、將步驟一中制備好的血涂片放置室溫5分鐘，待血液完全風(fēng)干后放入甲醇中對紅細(xì)胞進(jìn)行固定，再次放置在室溫中3分鐘，待甲醇揮發(fā)干凈，備用；

三、將步驟二中制備好的血涂片放入復(fù)合染液ⅰ中1-1.5min；然后取出血涂片放入復(fù)合染液ⅱ中1-2min；最后再用清水進(jìn)行輕輕涮洗，室溫晾干即可染色制成梨形蟲血涂片。

實(shí)施例3，運(yùn)用上述技術(shù)方法所制備的血涂片如附圖1、附圖2及附圖3所示，均可明顯的在顯微鏡下觀察到梨形蟲。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種梨形蟲血涂片復(fù)合染液包括復(fù)合染液Ⅰ和復(fù)合染夜Ⅱ；所述的復(fù)合染液Ⅰ是由瑞士粉2g、吉姆薩色素1.7g、甘油50ml及甲醇1000ml組成，復(fù)合染液Ⅱ是由無水磷酸二氫鈉2.3g、無水磷酸二氫鉀0.3g及1000ml的蒸餾水組成。染色方法包括下述步驟：一、血涂片的制備；二、血涂片二次處理；三、復(fù)合染液中進(jìn)行染色。本發(fā)明的復(fù)合染料和染色方法在不需借助高端的儀器設(shè)備的情況下對梨形蟲染色效果較好，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，所需時間較短，無雜質(zhì)干擾觀察蟲體，效果極為突出。

技術(shù)研發(fā)人員：海尼木古力·艾合買提;張楊;巴音查汗·蓋力克;劉世芳;郭慶勇;謝小婉;王盼舉;聞秀秀;宋瑞其
受保護(hù)的技術(shù)使用者：托克遜縣夏鄉(xiāng)畜牧業(yè)服務(wù)中心
技術(shù)研發(fā)日：2017.06.15
技術(shù)公布日：2017.10.27