本發(fā)明涉及利用化學(xué)指示劑對(duì)非生物材料的檢測(cè)，特別是涉及中成藥及保健品中非法添加瑞格列奈的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

現(xiàn)代社會(huì)，人們生活節(jié)奏快，工作壓力大，如今具有調(diào)節(jié)機(jī)體功能的保健食品成為不少人的需求。保健食品是食品的一個(gè)種類(lèi)，具有一般食品的共性，能調(diào)節(jié)人體的機(jī)能，適于特定人群食用。保健(功能)食品在歐美各國(guó)被稱為“健康食品”，在日本被稱為“功能食品”。保健食品既可以是普通食品的形態(tài)，也可以為了方便食用做成口服液、片劑或膠囊等，但保健食品不是藥物，不具有治療效果。市售的保健食品以“純天然，效果佳，無(wú)不良反應(yīng)”的宣傳使得消費(fèi)者頗為青睞。然而，某些無(wú)良企業(yè)竟在保健食品中添加處方西藥成分以增加功效，牟取經(jīng)濟(jì)利益。

中國(guó)消費(fèi)者協(xié)會(huì)調(diào)查顯示，有相當(dāng)比例的保健食品中存在非法添加現(xiàn)象。具有輔助降血糖、緩解體力疲勞、改善睡眠、減肥降血脂等功能的產(chǎn)品，是非法添加的重災(zāi)區(qū)。降糖類(lèi)保健品中非法添加的有雙胍類(lèi)、瑞格列奈、噻唑烷酮類(lèi)及格列奈類(lèi)。其中瑞格列奈即屬于格列奈類(lèi)中的一種藥物成分。消費(fèi)者在不知情的情況下，食用這樣的保健品，易造成處方藥過(guò)量服用，非但不能保健身體，反而會(huì)危害健康。另外保健食品中藥成分與非法添加的西藥共同服用，也可能會(huì)引起不良反應(yīng)。

對(duì)于中成藥和保健食品中降糖藥物的非法添加，現(xiàn)階段檢測(cè)方法主要有以下兩類(lèi)：

一、儀器檢測(cè)類(lèi)

紅外光譜法、拉曼光譜法、高效液相色譜法和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法可用于檢驗(yàn)中成藥和保健食品中是否非法添加瑞格列奈降糖藥。它們都具有快速、直接地檢測(cè)藥物的優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)也存在需要配備不方便攜帶的昂貴儀器、對(duì)檢測(cè)環(huán)境有一定要求的局限性。

二、非儀器檢測(cè)

薄層色譜法、顯色反應(yīng)、膠體金法可用于檢驗(yàn)中成藥和保健食品中是否非法添加瑞格列奈藥物成分。其中薄層色譜法的優(yōu)點(diǎn)是不需要使用大型、昂貴分析儀器，易于操作、結(jié)果直觀明了，其缺點(diǎn)是對(duì)點(diǎn)板技術(shù)有一定要求、邊緣效應(yīng)、干擾因素多。顯色反應(yīng)(中國(guó)藥典2010年版二部)分析成本低，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，其缺點(diǎn)是顯色反應(yīng)中使用的醋酸酐氣味較大，對(duì)人體和環(huán)境不好；且其為易制毒試劑，使用限制較大，不適宜快檢需求，且操作步驟中需要沸水浴加熱，并配備加熱工具，不適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)；膠體金法(專利申請(qǐng)?zhí)?201510430055.0)該法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，操作步驟簡(jiǎn)單，試驗(yàn)結(jié)果明顯，現(xiàn)象易觀測(cè)，然而膠體金法中由于實(shí)驗(yàn)需要使用專屬膠體金卡，制作過(guò)程復(fù)雜，技術(shù)及環(huán)境要求較高。另對(duì)于平時(shí)快檢，成本較高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，有必要針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的問(wèn)題，提供一種中成藥及保健品中非法添加瑞格列奈的檢測(cè)方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

一種中成藥及保健品中非法添加瑞格列奈的檢測(cè)方法，所述的檢測(cè)方法具體步驟如下：

(1)取1次口服量的樣品，取出內(nèi)容物，研磨，加入到5-8ml的水中，振蕩溶解，靜置，得樣品溶液，所述的1次口服量的樣品為膠囊1-3粒、片劑1片以及散劑1包的任意一種；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中緩慢加入酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化，滴入氫氧化鈉溶液后，溶液變?yōu)榧t色，振蕩搖勻后，觀察淺紅色未消失時(shí)，則終止檢測(cè)；

當(dāng)紅色消失時(shí)，進(jìn)行以下步驟：

(3)取步驟(2)所述的混合溶液，靜置1-5min，取混合溶液的2±0.1ml上清液；

(4)向步驟(3)所述的上清液中加入的kmno4溶液，振蕩搖勻，觀察其顏色是變?yōu)辄S色或者是紫色；

其中，步驟(2)所述氫氧化鈉溶液中含有氫氧化鈉為0.0003-0.0006mmol，所述酚酞-乙醇溶液中含有的酚酞為0.15-0.75mg，步驟(4)所述kmno4溶液中含有kmno4為0.005-0.0125mmol。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(4)所述觀察的溶液顏色為黃色時(shí)，則樣品中有瑞格列奈，步驟(4)所述觀察的溶液為紫色時(shí)，樣品中沒(méi)有瑞格列奈。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)所述水的用量?jī)?yōu)選為5-8ml，優(yōu)選為6ml。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(1)所述酚酞乙醇的濃度為5g/l，用量為0.03-0.15ml，優(yōu)選為所述酚酞乙醇溶液的濃度為5g/l，用量為0.03ml。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(2)所述的氫氧化鈉溶液的濃度為0.01mol/l，用量為0.03-0.06ml，優(yōu)選為所述氫氧化鈉溶液的濃度為0.01mol/l，用量為0.03ml。

在其中一些實(shí)施例中，步驟(4)所述kmno4溶液的濃度為0.02-0.05mol/l，用量為0.25ml，優(yōu)選為所述高錳酸鉀的濃度為0.040mol/l，用量為0.25ml。

相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)及效果：

1、待測(cè)樣品僅需加入低濃度的氫氧化鈉溶液、酚酞-乙醇溶液以及kmno4溶液，根據(jù)顯色反應(yīng)，就可以判斷樣品中是否含有瑞格列奈藥物，所用試劑均為普通化學(xué)試劑，鑒別方法操作簡(jiǎn)單且安全，分析成本低。

2、用蒸餾水提取待測(cè)樣品，以kmno4溶液為顯色反應(yīng)劑，反應(yīng)靈敏，專屬性強(qiáng)，現(xiàn)象明顯，不需要配備儀器，適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。

3、本發(fā)明的的中成藥及保健品中非法添加瑞格列奈的快速檢測(cè)鑒別方法對(duì)瑞格列奈樣品檢出限為0.125mg/次。

附圖說(shuō)明

圖1為高錳酸鉀作為瑞格列奈顯色反應(yīng)劑時(shí)發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)。

具體實(shí)施方式

以下將結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但本發(fā)明不僅限于以下實(shí)施例。

實(shí)施例1(對(duì)比例1)

(1)取待測(cè)樣品膠囊劑2粒，取其內(nèi)容物，研磨，加入到盛有5ml蒸餾水的具塞試管(10ml)中，振蕩溶解，靜置2min，得樣品溶液；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入0.03ml0.01mol/l氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化。滴入氫氧化鈉溶液后，混合溶液液面顯紅色，振蕩搖勻后，紅色后消失；

(3)取步驟(2)所述混合溶液，靜置1-5min，取2ml混合溶液的上層清液；

(4)向步驟(3)所述的上清液中加入0.25ml0.1mol/lkmno4溶液，振蕩搖勻，溶液變?yōu)樽仙?/p>

實(shí)施例2

(1)取待測(cè)樣品膠囊劑3粒，取其內(nèi)容物，研磨，加入到盛有6ml蒸餾水的具塞試管(10ml)中，振蕩溶解，靜置2min，得樣品溶液；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入0.05ml0.01mol/l氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化。滴入氫氧化鈉溶液后，混合溶液液面顯紅色，振蕩搖勻后，紅色后消失；

(3)取步驟(2)所述混合溶液，靜置1-5min，取混合溶液的2ml上層清液；

(4)向步驟(3)所述的上清液中加入0.25ml0.05mol/lkmno4溶液，振蕩搖勻，溶液逐漸由紫色變?yōu)辄S色。

實(shí)施例3

(1)取待測(cè)樣品片劑2片，研磨，加入到盛有6ml蒸餾水的具塞試管(10ml)中，振蕩溶解，靜置2min，得樣品溶液；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入0.03ml0.01mol/l氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化。滴入氫氧化鈉溶液后，混合溶液液面顯紅色，振蕩搖勻后，紅色未消失。

實(shí)施例4(對(duì)比例2)

(1)取待測(cè)樣品片劑2片，研磨，加入到盛有5ml蒸餾水的具塞試管(10ml)中，振蕩溶解，靜置2min，得樣品溶液；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入0.1ml0.01mol/l氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化。滴入氫氧化鈉溶液后，混合溶液液面顯紅色，振蕩搖勻后，紅色未消失。

實(shí)施例5(對(duì)比例3)

(1)取待測(cè)樣品顆粒劑1包，取其內(nèi)容物，研磨，加入到盛有8ml蒸餾水的具塞試管(10ml)中，振蕩溶解，靜置2min，得樣品溶液；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入0.06ml0.01mol/l氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化。滴入氫氧化鈉溶液后，混合溶液液面顯紅色，振蕩搖勻后，紅色后消失；

(3)取步驟(2)所述混合溶液，靜置1-5min，取混合溶液2ml的上層清液；

(4)向步驟(3)所述的上清液中加入0.25ml0.001mol/lkmno4溶液，振蕩搖勻，滴加后較難觀察溶液褪色，紫色較淺。

實(shí)施例6

(1)取待測(cè)樣品顆粒劑1包，取其內(nèi)容物，研磨，加入到盛有5ml蒸餾水的具塞試管(10ml)中，振蕩溶解，靜置2min，得樣品溶液；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入0.05ml0.01mol/l氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化。滴入氫氧化鈉溶液后，混合溶液液面顯紅色，振蕩搖勻后，紅色后消失；

(3)取步驟(2)所述混合溶液，靜置1-5min，取2ml混合溶液的上層清液；

(4)向步驟(3)所述的上清液中加入0.25ml0.02mol/lkmno4溶液，振蕩搖勻，滴加后觀察溶液褪色明顯，判斷含有該藥物成分。

實(shí)施例7

(1)取待測(cè)樣品1片，研磨至粉末，加入到盛有8ml蒸餾水的具塞試管(10ml)中，振蕩溶解，靜置2min，得樣品溶液；

(2)向步驟(1)所述的樣品溶液中加入0.03ml5g/l酚酞-乙醇溶液，振蕩搖勻，再緩慢地加入0.06ml0.01mol/l氫氧化鈉溶液，振蕩搖勻，得混合溶液，觀察混合溶液顏色變化。滴入氫氧化鈉溶液后，混合溶液液面顯紅色，振蕩搖勻后，紅色后消失；

(3)取步驟(2)所述混合溶液，靜置1-5min，取2ml混合溶液的上層清液；

(4)向步驟(3)所述的上清液中加入0.25ml0.04mol/lkmno4溶液，振蕩搖勻，滴加后觀察溶液褪色明顯，判斷含有該藥物成分。

表1為實(shí)施例1-7檢測(cè)中成藥及保健品中非法添加瑞格列奈的結(jié)果與lc-ms檢驗(yàn)結(jié)果的比較。

表1

表1中“-”代表未添加。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：上述對(duì)比試驗(yàn)表明，實(shí)施例1和實(shí)施例4的鑒別結(jié)果與lc-ms檢驗(yàn)結(jié)果不符，實(shí)施例5無(wú)法判斷，由此可知，蒸餾水提取液量大于或小于5-8ml，0.25mlkmno4溶液濃度大于或小于0.02-0.05mol/l，0.01mol/l氫氧化鈉溶液添加量大于0.06ml都會(huì)出現(xiàn)干擾情況，給檢測(cè)帶來(lái)誤差，導(dǎo)致結(jié)果不易判定或出現(xiàn)假陰性。綜上所述，本發(fā)明采用的檢測(cè)方法采用兩步即可根據(jù)顯色反應(yīng)判斷樣品是否含有瑞格列奈藥物，所用的提取液、反應(yīng)試液均為普通的化學(xué)試劑，非常安全，操作簡(jiǎn)便，分析成本低。而且反應(yīng)靈敏，專屬性強(qiáng)，現(xiàn)象明顯，不需要配備儀器，適用于現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說(shuō)明書(shū)及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)變換，或直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護(hù)范圍內(nèi)。

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書(shū)記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。