本發(fā)明屬于植物成分含量檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法。

背景技術(shù)：

大麻屬于木蘭綱(magnoliopsida)蕁麻目(urticales)大麻科(cannabinaceae)大麻屬(cannabis)大麻種(cannabissatival.)一年生草本植物。大麻植物活性成分包括大麻酚和非大麻酚類化合物，其中大麻酚類化合物數(shù)量及生物活性成分較多。大麻酚類化合物主要包括四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol，thc)、大麻二酚(cannabidiol,cbd)、大麻酚(cannabinol，cbn)及大麻萜酚(cannabichromene，cbc)等成分。目前，已有很多國家在麻類作物開發(fā)利用方面進(jìn)行了深入的研究，涉及麻紡、造紙、建材、麻塑、吸污、食用、醫(yī)藥等諸多領(lǐng)域。我國麻類作物種類眾多種植地域覆蓋面廣，是繼糧、棉、油、菜之后的又一大作物群，因此推廣和普及麻類作物的開發(fā)及產(chǎn)品深加工具有深遠(yuǎn)意義。但是大麻酚類化合物中thc成分具有致幻作用，易于被不法分子用來提煉毒品造成社會危害。按照國際禁毒公約規(guī)定，大麻植株中thc含量低于0.3％的品種稱為纖維大麻(hemp),高于0.3％的品種稱為藥用(毒品)大麻(marijuana.hashish)。

近年來我國在大麻種植利用及產(chǎn)品深加工方面不斷進(jìn)展，但是隨之而來的大麻毒品(thc)相關(guān)案件不斷增加，大麻推廣種植與thc毒品案件增加的矛盾日益增強(qiáng)。因此，迫切需要研發(fā)一種快速檢測thc含量的識別方法，用于大麻種植管理中快速檢測植株中thc含量是否低于0.3％，為大麻禁(限)種及執(zhí)法管理部門監(jiān)管提供必要的監(jiān)控手段，同時為工業(yè)大麻育種研究工作提供快速而又準(zhǔn)確的篩選方法。

大麻酚類化合物成分復(fù)雜數(shù)量眾多，給大麻酚類化合物定性定量分析造成了一定的困難。目前國內(nèi)外文獻(xiàn)中有基于化學(xué)顯色原理，利用薄層色譜技術(shù)進(jìn)行大麻酚類化合物分析檢測的方法，例如郭孟壁提供的一種檢測方法(一種半定量快速檢測大麻植物中δ9-thc含量的方法[p].中國：102175813b，2011.11.16)，判定其是否為工業(yè)大麻或藥用(毒品)大麻；有基于氣相色譜法、液相色譜法進(jìn)行準(zhǔn)確定量的分析檢測方法，判定其是否為工業(yè)大麻或藥用(毒品)大麻。然而上述方法具有檢驗速度慢、分析操作繁瑣、專業(yè)性強(qiáng)、檢驗成本高等缺點，這些方法都不能滿足大麻植物育種或監(jiān)管中，大批量測試大麻植株thc含量是否低于0.3％的要求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供了一種半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，利用化學(xué)顯色原理技術(shù)快速準(zhǔn)確的實現(xiàn)大麻植株中thc含量快速篩選。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，包括如下步驟：

步驟1、顯色板的制備：將濾紙裁剪成每張尺寸20×20cm，將裁剪好的濾紙完全浸入飽和碳酸鈉溶液或飽和碳酸氫鈉溶液或飽和磷酸鈉溶液中，浸泡時間2～5min，將浸泡好的濾紙取出后自然晾干，將已晾干的濾紙用鉛筆從一端開始等分為2×2cm的方格，并在方格上用數(shù)字進(jìn)行標(biāo)號，制成顯色板待用；

步驟2、顯色劑的配置：稱取一定量的快藍(lán)b鹽或快藍(lán)bb鹽溶解于水溶性有機(jī)溶劑中，配置成濃度為0.002～0.008g/ml的溶液，置于棕色瓶中保存，待用；

步驟3、待測樣品的取樣：取3～5mm長度的待測樣品，樣品質(zhì)量0.1～1g，直接置于顯色板中一個方格中心位置處或置于研缽中研磨1～2min后、取出研磨后的樣品均勻涂于步驟1制備的顯色板中一個方格中心位置處，待測；

步驟4、樣品的顯色測試：將步驟3顯色板上制備的待測樣品上滴加步驟2制備的顯色劑，滴加量0.05～0.2ml，滴加后2～10s，目視觀察樣品周圍顯色板的顏色；

步驟5、樣品的含量判定：根據(jù)步驟4中顯色板上樣品周圍顯示的顏色不同，判定大麻植物中四氫大麻酚的含量，樣品周圍顏色為淡黃色或者淺粉色或者無色，判定樣品中四氫大麻酚含量低于0.3％；樣品周圍斑點顏色為紅色或者深紅色，判定樣品中四氫大麻酚含量高于0.3％。

本發(fā)明所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟1中的濾紙是定性濾紙或者定量濾紙。

本發(fā)明所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟2中的水溶性有機(jī)溶劑是甲醇、乙醇、二甲基甲酰胺中的一種。

本發(fā)明所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟2中的顯色劑濃度為0.002g/ml、0.004g/ml、0.006g/ml、0.008g/ml中的一種。

本發(fā)明所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟2中的乙醇溶劑為95％的乙醇溶劑。

本發(fā)明所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟3中的待測樣品是大麻新鮮葉片、烘干后的大麻葉片、大麻植株莖稈、大麻種子、大麻種皮、大麻花蕊中的一種。

本發(fā)明所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟3中的研缽是瑪瑙研缽。

本發(fā)明所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟5中參照比色卡色系進(jìn)行顏色判斷，色度弱于gb5.6r7/6.80263標(biāo)準(zhǔn)，判定樣品中四氫大麻酚含量低于0.3％。

本發(fā)明檢測效率高、適用范圍廣、操作簡單、效率高、檢測成本低，特別適合大麻作物中thc含量大批量檢測。本發(fā)明檢測準(zhǔn)確率能夠達(dá)到95％以上。

相對于現(xiàn)有技術(shù)本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

樣品測試范圍普適性好，大麻鮮葉、烘干的葉片、大麻表皮、大麻花蕊等大麻植株各個部位均可以采用本發(fā)明方法進(jìn)行快速檢測；

測試方法簡單，本發(fā)明適用于大麻培育研究工作或監(jiān)管部門進(jìn)行thc含量大批量快速檢測，操作方法簡單易學(xué)不需要專業(yè)培訓(xùn)。尤其適合對生長期新鮮大麻植物中thc含量測試，避免了傳統(tǒng)樣品前處理方法中烘干的步驟，大大提高了工作效率；

檢測時間短，單次檢測過程在5秒內(nèi)完成，特別適合大麻植物田間批量測試，可以實現(xiàn)對大麻田間單株植物及植株中不同部位進(jìn)行thc含量靶向檢測；

本發(fā)明能實現(xiàn)對大麻植物進(jìn)行半定量快速檢測，既可以進(jìn)行實驗室快速篩查，又可以在大麻植物種植現(xiàn)場進(jìn)行快速篩查。

附圖說明

圖1為利用具體實施方式一所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法檢測36組大麻植物樣品的對比照片。

具體實施方式

具體實施方式一：

一種半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，包括如下步驟：

步驟1、顯色板的制備：將定性濾紙裁剪成每張尺寸20×20cm，將裁剪好的濾紙完全浸入飽和碳酸鈉溶液或飽和碳酸氫鈉溶液或飽和磷酸鈉溶液中，浸泡時間2min，將浸泡好的濾紙取出后自然晾干，將已晾干的濾紙用鉛筆從一端開始等分為2×2cm的方格，并在方格上用數(shù)字進(jìn)行標(biāo)號，制成顯色板待用；

步驟2、顯色劑的配置：稱取一定量的快藍(lán)b鹽溶解于水溶性有機(jī)溶劑中，配置成濃度為0.002g/ml的溶液，置于棕色瓶中保存，待用；

步驟3、待測樣品的取樣：取3mm長度的待測樣品，樣品質(zhì)量0.1g，直接置于顯色板中一個方格中心位置處或置于研缽中研磨1min后、取出研磨后的樣品均勻涂于步驟1制備的顯色板中一個方格中心位置處，待測；

步驟4、樣品的顯色測試：將步驟3顯色板上制備的待測樣品上滴加步驟2制備的顯色劑，滴加量0.2ml，滴加后5s，目視觀察樣品周圍顯色板的顏色；

步驟5、樣品的含量判定：根據(jù)步驟4中顯色板上樣品周圍顯示的顏色不同，判定大麻植物中四氫大麻酚的含量，樣品周圍顏色為淡黃色或者淺粉色或者無色，判定樣品中四氫大麻酚含量低于0.3％；樣品周圍斑點顏色為紅色或者深紅色，判定樣品中四氫大麻酚含量高于0.3％。

本實施方式所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟2中的水溶性有機(jī)溶劑是95％的乙醇溶劑。綜合考慮安全、環(huán)保、揮發(fā)性等因素，本實施方式采用95％的乙醇溶劑；調(diào)節(jié)顯色劑溶液的ph值，ph值為酸性或者堿性顯色效果差異性不強(qiáng)，不利于直接目視觀察。

本實施方式所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟3中的待測樣品是大麻新鮮葉片。

本實施方式所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟3中的研缽是瑪瑙研缽。

本實施方式所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法，步驟5中參照比色卡色系進(jìn)行顏色判斷，色度弱于gb5.6r7/6.80263標(biāo)準(zhǔn)，判定樣品中四氫大麻酚含量低于0.3％。

利用本實施方式進(jìn)行大麻新鮮葉片測試，測試取不同thc含量的大麻植物樣品35份，采用本實施方式所述的半定量快速識別大麻植物中四氫大麻酚含量的方法操作并作出含量判定，與hplc儀器準(zhǔn)確定量分析結(jié)果比較，準(zhǔn)確率達(dá)到95％以上，測試結(jié)果如表1所示，測試得到的顯色圖片如附圖1所示。附圖1中比色卡的色度從上到下依次為：gb9.4r8.5/1.8a0261，gb8.1r7.5/3.6b0262、gb5.6r7/6.8c10263、gb6.9r5/6c10264、gb6.3r6/6.4c10265。

表1大麻植物樣品thc含量判定結(jié)果

注:+為陽性(樣品thc含量>0.3％)，-為陰性(樣品thc含量>0.3％)，*表示誤判結(jié)果。