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一種B族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的制作方法

文檔序號:11284308閱讀:564來源:國知局
本發(fā)明涉及一種b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,屬于醫(yī)學檢測
技術領域
。
背景技術
:b族鏈球菌(groupbstreptococcus,簡稱gbs),正常寄居于陰道和直腸,它是一種條件致病菌,一般正常健康人群感染gbs并不致病。據(jù)統(tǒng)計約10%~30%的孕婦有感染gbs,其中40%~70%在分娩過程中會傳遞給新生兒。如果新生兒帶了這種菌,大約有1%~3%會出現(xiàn)早期侵入性感染,其中有5%會導致死亡。因此,gbs的檢測尤為重要。其中免疫測試法是一種常用的gbs檢測方法,但是現(xiàn)有的gbs免疫檢測方法中,由于免疫檢測的各個步驟中涉及不同的處理,通常樣本需要經(jīng)過多個設備分別進行不同步驟的處理,檢測較為麻煩,而且在進行不同步驟時,有時還需要轉移樣本至不同的載體(試管),這一過程容易引入污染,影響檢測精度。技術實現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的在于,提供一種b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒。它可以一體化完成gbs免疫檢測的各個步驟,不易引入污染,操作更為方便,檢測精度更高。本發(fā)明的技術方案:一種b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,其特點是:包括頂部帶翻蓋的盒體,盒體內依次設有通過柱塞分隔的樣本處理區(qū)、第一清洗區(qū)、檢測抗體結合區(qū)、第二清洗區(qū)、發(fā)光底物結合區(qū)、第三清洗區(qū)和終止區(qū);所述柱塞上設有柱塞孔;所述樣本處理區(qū)設有樣本處理液,樣本處理液中設有金屬攪拌子和包被有gbs抗體的亞微米級超順磁免疫磁珠;所述檢測抗體結合區(qū)內設有含生物素標記的gbs抗體的結合液;發(fā)光底物結合區(qū)內設有含sa-pe(鏈霉親和素藻紅蛋白)的底物顯色液;終止區(qū)內設有終止液。上述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒中,所述樣本處理液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa(牛血清白蛋白)1%質量百分比前述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒中,所述亞微米級超順磁免疫磁珠的直徑為0.5~10um,在樣本處理液中的濃度為50~200mg/ml。前述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒中,所述第一清洗區(qū)、第二清洗區(qū)和第三清洗區(qū)內設有清洗液,清洗液的組分為nacl138mmkcl2.7mmddh2o溶劑前述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫免疫檢測試劑盒中,所述結合液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa1%質量百分比生物素標記的gbs抗體4ug/mlddh2o溶劑前述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫免疫檢測試劑盒中,所述底物顯色液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa1%質量百分比sa-pe4ug/mlddh2o溶劑前述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫免疫檢測試劑盒中,所述終止液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa1%質量百分比ddh2o溶劑前述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒中,所述柱塞一端設有彈簧,另一端與伸出盒體外的頂桿;所述頂桿外端的下側設有斜坡。前述的b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒中,所述柱塞孔帶3~5°的錐度,中心直徑為3~5mm,這樣的設置既有利于磁珠通過,又可利用毛細作用阻斷各個區(qū)間的液體自由穿過;所述樣本處理區(qū)底端為上寬下窄的收口,每個收口邊與豎直方向夾25°~35°角,以便于充分裂解及磁珠順利匯合到柱塞孔內。與現(xiàn)有技術相比,本發(fā)明利用柱塞在同一個試劑盒內分隔出多個區(qū)間(腔體),各個區(qū)間可分別設置不同檢測步驟所需的物質,并利用包被有能與檢測標的物特異性結合的抗體或抗原的亞微米級超順磁免疫磁珠作為檢測標的物的移動載體,使其能夠通過使用時連通的柱塞孔,進入各個區(qū)間進行結合反應,因此整個檢測過程可在可控的情況下在同一個試劑盒內(配合使用一臺設備)進行所有gbs免疫檢測所需的步驟,不容易產(chǎn)生二次污染,而且工作效率大大提高,檢測精度也大大提高,而且更可以解決免疫檢測需要很多配套設備的問題。本發(fā)明由于使用了柱塞進行分隔,它可以通過簡單的機械動作即可導通各個區(qū)間,無需其它處理(若采用石蠟等物質進行隔離,導通及裝配時需加熱,加熱會影響到試劑盒內的試劑及樣本,進行影響檢測精度),操作上來說更為方便,而且柱塞的裝配更為簡單、便于各個區(qū)間內試劑的裝配。附圖說明圖1是本發(fā)明試劑盒的結構示意圖。附圖中的標記為:1-翻蓋,2-盒體,3-柱塞,4-樣本處理區(qū),5-第一清洗區(qū),6-檢測結合區(qū),7-第二清洗區(qū),8-發(fā)光底物結合區(qū),9-第三清洗區(qū),10-終止區(qū),11-備用區(qū),12-彈簧。具體實施方式下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步的說明,但并不作為對本發(fā)明限制的依據(jù)。實施例。一種b族鏈球菌酶聯(lián)免疫檢測試劑盒,如圖1所示:包括頂部帶翻蓋1的盒體2,盒體2內依次設有通過柱塞3分隔的樣本處理區(qū)4、兩個第一清洗區(qū)5、檢測抗體結合區(qū)6、兩個第二清洗區(qū)7、發(fā)光底物結合區(qū)8、兩個第三清洗區(qū)9和終止區(qū)10;所述柱塞3上設有柱塞孔;所述樣本處理區(qū)4設有樣本處理液,樣本處理液中設有金屬攪拌子和包被有gbs抗體的亞微米級超順磁免疫磁珠;所述檢測抗體結合區(qū)6內設有含生物素標記的gbs抗體的結合液;發(fā)光底物結合區(qū)8內設有含sa-pe的底物顯色液;終止區(qū)10內設有終止液,終止區(qū)10還可以連接一個備用區(qū)。所述樣本處理液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa1%質量百分比ddh2o溶劑所述亞微米級超順磁免疫磁珠的直徑為0.5~10um,在樣本處理液中的濃度為50~200mg/ml。所述第一清洗區(qū)5、第二清洗區(qū)7和第三清洗區(qū)9內設有清洗液,清洗液的組分為nacl138mmkcl2.7mmddh2o溶劑所述結合液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa1%質量百分比生物素標記的gbs抗體4ug/mlddh2o溶劑所述底物顯色液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa1%質量百分比sa-pe4ug/mlddh2o溶劑所述終止液的組分為nacl138mmkcl2.7mmbsa1%質量百分比ddh2o溶劑所述柱塞3一端設有彈簧12,另一端與伸出盒體2外的頂桿;所述頂桿外端的下側設有斜坡。所述柱塞孔帶3~5°的錐度,中心直徑為3~5mm,所述樣本處理區(qū)4底端為上寬下窄的收口,每個收口邊與豎直方向夾25°~35°角。本發(fā)明的試劑盒的工作原理:①將樣本放入盒體2,蓋上盒蓋1,然后將盒體2插入配套檢測設備的試劑盒容納槽,試劑盒容納槽內設有擋條,在插入過程中,各個柱塞3的頂桿8依次被擋條推動,使得各個柱塞3克服彈簧7的彈力發(fā)生移動,致使柱塞孔對準分離腔體,導通各個區(qū)間。②然后通過電磁線圈陣列帶動金屬攪拌子,將樣本攪勻,樣本中的gbs抗原與亞微米級超順磁免疫磁珠(以下簡稱載體)上的gbs抗體相結合;③載體通過第一清洗區(qū)5,洗脫雜質;④載體進入檢測結合區(qū)6,生物素標記的gbs抗體結合到載體上的gbs抗原上;⑤載體通過第二清洗區(qū)7,洗脫未結合的生物素標記的gbs抗體;⑥載體進入發(fā)光底物結合區(qū)8,發(fā)光底物(sa-pe)的鏈酶親和素與載體上的生物素特異結合;⑦載體通過第三清洗區(qū)9,洗脫未結合的發(fā)光底物;⑧載體進入終止液,載體上的發(fā)光底物藻紅蛋白在儀器激發(fā)光作用下產(chǎn)生穩(wěn)定的被激發(fā)光;⑨外部設備使用光學檢測探頭從終止區(qū)的透明窗口上獲取熒光強度信號,以此信號對樣本中的gbs抗原進行定性或定量檢測。當前第1頁12
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