本發(fā)明屬于醫(yī)藥檢測領(lǐng)域，具體涉及一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法。

背景技術(shù)：

祖卡木制劑收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》維吾爾藥分冊。祖卡木制劑具有調(diào)節(jié)異常氣質(zhì)、清熱、發(fā)汗、通竅的作用，用于感冒咳嗽、發(fā)熱無汗、咽喉腫痛，鼻塞流涕，是維吾爾醫(yī)治療感冒的經(jīng)典名方，在新疆各族人民中廣為使用，在全國各省市均有分布，是維吾爾藥大品種。其處方包括山奈、睡蓮花、薄荷、卡西卡甫棗、洋甘菊、破布木果、甘草、蜀葵子、大黃、罌粟殼等十味藥材。祖卡木制劑組分復(fù)雜，因此評價其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的、能提供豐富鑒別信息的檢測方法。目前，對祖卡木制劑的質(zhì)量控制，多采用其中一兩種中藥成分的含量測定或薄層色譜鑒別，其中，有文獻報道測定其中的大黃素、大黃酚含量；或測定罌粟堿、嗎啡含量；或測定甘草中主要成分的含量。但是，這些單一成分測定并不能完全反映祖卡木制劑的內(nèi)在質(zhì)量，且薄層鑒別的rf值較大，同時沒有對主要成分和活性成分的含量進行測定，都具有片面性，如何建立一種方便易行并包含信息量全面的檢測方法亟待解決。

有鑒于此，有必要提出一種方便易行，包含信息量較為全面的針對于祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，該檢測方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，可以全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，從而確保祖卡木制劑的安全性和有效性。

為了實現(xiàn)上述目的，所采用的技術(shù)方案為：

一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，所述檢測方法包括以下步驟：

(1)制備供試品溶液：

將祖卡木顆粒溶解于水中，得祖卡木顆粒溶液；

用萃取劑萃取祖卡木顆粒溶液，靜置分層后，得上層溶液1和下層溶液1；用萃取劑萃取下層溶液1，靜置分層后，得上層溶液2和下層溶液2，合并上層溶液1和上層溶液2，得萃取液；所述萃取劑為水飽和的正丁醇溶液；

蒸干萃取液去除正丁醇，得殘渣；

將殘渣溶解于甲醇溶液后，過濾，得濾液，濾液為供試品溶液；所述祖卡木顆粒的質(zhì)量與甲醇溶液的體積比為2-5g：50ml；

(2)制備對照品溶液：

將煙花苷溶解于甲醇后，過濾，得濾液，濾液為對照品溶液；所述煙花苷的質(zhì)量與甲醇的體積比為0.009-0.011mg：1ml；

(3)檢測：

分別吸取對照品溶液與供試品溶液各5-10μl，注入高效液相色譜儀，記錄69-75分鐘內(nèi)的色譜圖；其中，所述填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠；所述流動相a為甲醇，所述流動相b為磷酸水溶液；所述洗脫方式為梯度洗脫；所述檢測器為二極管陣列檢測器。

進一步的，所述步驟(1)中，甲醇溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30-70％；

所述蒸干萃取液的溫度小于80℃；

所述過濾采用0.22μm的微孔濾膜過濾；

所述步驟(2)中，過濾采用0.22μm的微孔濾膜過濾。

再進一步的，所述步驟(1)還包括，用萃取劑萃取下層溶液2，靜置分層后，得上層溶液3和下層溶液3，合并上層溶液1、上層溶液2和上層溶液3，得萃取液；

所述步驟(2)中，煙花苷的質(zhì)量與甲醇的體積比為0.01mg：1ml。

再進一步的，所述步驟(1)中，祖卡木顆粒溶液中的水與甲醇溶液的體積比為10-50：50。

再進一步的，所述步驟(1)中，每次萃取時萃取劑的體積與甲醇溶液的體積比為10-50：50。

再進一步的，所述步驟(3)中，磷酸水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.09-0.11％；

所述柱溫為30-35℃；

所述二極管陣列檢測器的檢測波長為250-260nm；

所述理論塔板數(shù)大于2000。

再進一步的，所述梯度洗脫的流速為1.0ml/min，流動相a、b的體積分?jǐn)?shù)變化為：0-10min，a相15％-35％，b相85％-65％；10-35min，a相35％-55％，b相65％-45％；35-40min，a相55％-65％，b相45％-35％；40-45min，a相65％-67％，b相35％-33％；45-50min，a相67％-70％，b相33％-30％；50-55min，a相70％-72％，b相30％-28％；55-58min，a相72％-73％，b相28-27％；58-63min，a相73％-79％，b相27-21％；63-75min，a相79％-82％，b相21％-18％。

再進一步的，所述步驟(3)中，磷酸水溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％；

所述柱溫為35℃；

所述二極管陣列檢測器的檢測波長為254nm。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

1、本發(fā)明所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法制得的祖卡木制劑的指紋圖譜檢測方法，建立的祖卡木制劑hplc指紋圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；

2、本發(fā)明實施例所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法建立的祖卡木制劑hplc特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了18個共有峰，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，18個共有峰中1號峰為藥材大黃、睡蓮花、山柰、破布木果共有成分沒食子酸；7號峰為藥材睡蓮花的特征性成分煙花苷；15號峰為藥材山柰特征性成分對甲氧基肉桂酸乙酯；16號峰為藥材甘草的特征性成分甘草酸銨；18號峰為藥材大黃的特征性成分大黃素，避免了祖卡木制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標(biāo)的可能性。

3、本發(fā)明所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法制得的指紋圖譜出峰較多，反映的信息較完全，可以充分反映化學(xué)成分的信息，并且各個峰吸收值良好，基線平穩(wěn)，也避免了近紫外雜質(zhì)峰較大吸收，以及只是為了測定某個成分的精確含量的情況。

4、本發(fā)明所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法所得的祖卡木制劑指紋圖譜的峰多，峰形好，易于鑒別，相似性高，準(zhǔn)確可靠。

5、本發(fā)明所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，該檢測方法以祖卡木顆粒為例，雖然市售的祖卡木制劑僅有祖卡木顆粒一種制劑類型，若出現(xiàn)其他祖卡木制劑類型，也同樣適用于其他祖卡木制劑類型，因藥物的物質(zhì)基礎(chǔ)沒有改變，所含化學(xué)成分無差異，因此，本發(fā)明所述的祖卡木制劑的指紋圖譜檢測方法仍適用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1測得的祖卡木顆粒其顆粒的共有模式圖譜；

圖2為本發(fā)明祖卡木顆粒其顆粒精密度hplc指紋圖譜；

圖3為本發(fā)明祖卡木顆粒其顆粒重復(fù)性hplc指紋圖譜；

圖4為本發(fā)明祖卡木顆粒其顆粒穩(wěn)定性hplc指紋圖譜；

圖5為本發(fā)明10個批次祖卡木顆粒其顆粒指紋圖譜疊加圖。

具體實施方式

為了進一步闡述本發(fā)明一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，達到預(yù)期發(fā)明目的，以下結(jié)合較佳實施例，對依據(jù)本發(fā)明提出的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，其具體實施方式、結(jié)構(gòu)、特征及其功效，詳細說明如后。在下述說明中，不同的“一實施例”或“實施例”指的不一定是同一實施例。此外，一或多個實施例中的特定特征、結(jié)構(gòu)或特點可由任何合適形式組合。

在詳細闡述本發(fā)明一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法之前，有必要對本發(fā)明中提及的相關(guān)材料和實驗儀器，以及名詞做進一步說明，以達到更好的效果。

指紋圖譜是指某些復(fù)雜物質(zhì)，比如中藥，某種生物體或某種組織或細胞的dna，蛋白質(zhì)經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段。建立指紋圖譜將能較為全面地反映制劑中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進而對藥品質(zhì)量進行整體描述和評價，可以為控制和保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性提供保障。

本發(fā)明所述的祖卡木制劑由山奈、睡蓮花、破布木果、薄荷、大棗、洋甘菊、甘草、蜀葵子、大黃、罌粟殼十種干藥材按重量比83∶176∶333∶176∶83∶83∶33∶83∶50∶83的比例稱取后水提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液濾過備用；藥渣與其余甘草等7味，加水煎煮3次，每次1小時，合并煎液，濾過，濾液與上述水溶液合并，減壓濃縮至相對密度為1.06-1.16(50℃)的清膏，放冷，加乙醇使含醇量達到60％，靜置24小時以上使沉淀，濾過，濾液減壓濃縮至適量，加入適量醫(yī)學(xué)常用的輔料，及上述備用的揮發(fā)油，制成顆粒，低溫干燥，混勻，制成顆粒。

本發(fā)明中質(zhì)量分?jǐn)?shù)(massfraction)指溶液中溶質(zhì)質(zhì)量與溶液質(zhì)量之比。也指混合物中某種物質(zhì)質(zhì)量占總質(zhì)量的百分比。

本發(fā)明中體積分?jǐn)?shù)指的是：在理想溶液中，溶液的體積有加成性，總體積等于所有成份混合前的體積和，此時的體積分?jǐn)?shù)也可稱為體積濃度，指某種成分在總體積中所占的百分比。

在了解上述相關(guān)材料和實驗儀器后，下面將結(jié)合具體的實施例，對本發(fā)明一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法做進一步的詳細介紹：

一實施例

實施例1.

(1)供試品溶液的制備：

精密稱定5g祖卡木顆粒，溶解于50ml水中，攪拌至溶解，得祖卡木顆粒溶液；

用50ml的水飽和正丁醇溶液萃取祖卡木顆粒溶液，靜置分層后，得上層溶液1和下層溶液1；用40ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液1，靜置分層后，得上層溶液2和下層溶液2，用30ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液2，靜置分層后，得上層溶液3和下層溶液3，合并上層溶液1、上層溶液2和上層溶液3，得萃取液；

蒸干萃取液去除正丁醇，加熱溫度小于80℃，得殘渣；

將殘渣溶解于50ml的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70％的甲醇溶液后，過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：精密稱定0.011mg的煙花苷對照品，加入到1ml的甲醇，溶解后過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液作為對照品溶液；

(3)檢測：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，記錄69分鐘內(nèi)的色譜圖，高效液相色譜測定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％磷酸水溶液為流動相b，梯度洗脫，流動相a、b的體積分?jǐn)?shù)變化如表1所示為：0-10min，a相15％-35％，b相85％-65％；10-35min，a相35％-55％，b相65％-45％；35-40min，a相55％-65％，b相45％-35％；40-45min，a相65％-67％，b相35％-33％；45-50min，a相67％-70％，b相33％-30％；50-55min，a相70％-72％，b相30％-28％；55-58min，a相72％-73％，b相28-27％；58-63min，a相73％-79％，b相27-21％；63-69min，a相79％-82％，b相21％-18％；流速1.0ml·min^-1，采用dad檢測器，波長260nm，柱溫35℃，理論塔板數(shù)按煙花苷峰計算應(yīng)大于2000。記錄75分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得祖卡木顆粒的指紋圖譜中18個共有峰，由這18個共有峰構(gòu)成祖卡木制劑的指紋特征，作為祖卡木制劑成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，如圖1所示。

表1祖卡木顆粒指紋圖譜梯度洗脫程序

結(jié)果表明，通過表1中流動相的梯度洗脫程序所得高效液相色譜圖基線平穩(wěn)，各色譜峰分離效果良好，峰形佳。

18個共有峰中1號峰為藥材大黃、睡蓮花、山柰、破布木果共有成分沒食子酸；7號峰為藥材睡蓮花的特征性成分煙花苷；15號峰為藥材山柰特征性成分對甲氧基肉桂酸乙酯；16號峰為藥材甘草的特征性成分甘草酸銨；18號峰為藥材大黃的特征性成分大黃素。

本發(fā)明實施例所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法制得的祖卡木制劑的指紋圖譜檢測方法，建立的祖卡木制劑hplc指紋圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；建立的祖卡木制劑hplc特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了18個共有峰，出峰較多，峰形好，易于鑒別，相似性高，成功的表征了祖卡木制劑中所含4種藥材(睡蓮花、甘草、大黃、山奈)的特征成分，反映的信息較完全，可以充分反映化學(xué)成分的信息，并且各個峰吸收值良好，基線平穩(wěn)，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，準(zhǔn)確可靠，避免了祖卡木制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標(biāo)的可能性。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從整體特征上控制祖卡木其制劑的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，從而確保祖卡木制劑的安全性和有效性，為祖卡木制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

實施例2.

(1)供試品溶液的制備：

精密稱定2g祖卡木顆粒，溶解于10ml水中，加熱溶解，冷卻至室溫，得祖卡木顆粒溶液；

用30ml的水飽和正丁醇溶液萃取祖卡木顆粒溶液，靜置分層后，得上層溶液1和下層溶液1；用20ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液1，靜置分層后，得上層溶液2和下層溶液2，用10ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液2，靜置分層后，得上層溶液3和下層溶液3，合并上層溶液1、上層溶液2和上層溶液3，得萃取液；

蒸干萃取液去除正丁醇，加熱溫度為75℃，得殘渣；

將殘渣溶解于50ml的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30％的甲醇溶液后，過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：精密稱定0.009mg的煙花苷對照品，加入到1ml的甲醇，溶解后過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液作為對照品溶液；

(3)檢測：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入高效液相色譜儀，記錄69分鐘內(nèi)的色譜圖，高效液相色譜測定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.09％磷酸水溶液為流動相b，梯度洗脫，流動相a、b的體積分?jǐn)?shù)變化為：0-10min，a相15％-35％，b相85％-65％；10-35min，a相35％-55％，b相65％-45％；35-40min，a相55％-65％，b相45％-35％；40-45min，a相65％-67％，b相35％-33％；45-50min，a相67％-70％，b相33％-30％；50-55min，a相70％-72％，b相30％-28％；55-58min，a相72％-73％，b相28-27％；58-63min，a相73％-79％，b相27-21％；63-69min，a相79％-82％，b相21％-18％；流速1.0ml·min^-1，采用dad檢測器，波長250nm，柱溫30℃，理論塔板數(shù)按煙花苷峰計算應(yīng)大于2000。記錄69分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得祖卡木顆粒的指紋圖譜中17個共有峰，由這17個共有峰構(gòu)成祖卡木制劑的指紋特征，作為祖卡木制劑成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

本發(fā)明實施例所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法制得的祖卡木制劑的指紋圖譜檢測方法，建立的祖卡木制劑hplc指紋圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；建立的祖卡木制劑hplc特征指紋圖譜共有模式，出峰較多，峰形好，易于鑒別，相似性高，反映的信息較完全，可以充分反映化學(xué)成分的信息，并且各個峰吸收值良好，基線平穩(wěn)，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，準(zhǔn)確可靠，避免了祖卡木制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標(biāo)的可能性。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從整體特征上控制祖卡木其制劑的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，從而確保祖卡木制劑的安全性和有效性，為祖卡木制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

實施例3.

(1)供試品溶液的制備：

精密稱定4g祖卡木顆粒，溶解于40ml水中，攪拌至溶解，得祖卡木顆粒溶液；

用30ml的水飽和正丁醇溶液萃取祖卡木顆粒溶液，靜置分層后，得上層溶液1和下層溶液1；用30ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液1，靜置分層后，得上層溶液2和下層溶液2，合并上層溶液1和上層溶液2，得萃取液；

蒸干萃取液去除正丁醇，加熱溫度為70℃，得殘渣；

將殘渣溶解于50ml的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40％的甲醇溶液后，過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：精密稱定0.01mg的煙花苷對照品，加入到1ml的甲醇，溶解后過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液作為對照品溶液；

(3)檢測：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各8μl，注入高效液相色譜儀，記錄72分鐘內(nèi)的色譜圖，高效液相色譜測定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.11％磷酸水溶液為流動相b，梯度洗脫，流動相a、b的體積分?jǐn)?shù)變化為：0-10min，a相15％-35％，b相85％-65％；10-35min，a相35％-55％，b相65％-45％；35-40min，a相55％-65％，b相45％-35％；40-45min，a相65％-67％，b相35％-33％；45-50min，a相67％-70％，b相33％-30％；50-55min，a相70％-72％，b相30％-28％；55-58min，a相72％-73％，b相28-27％；58-63min，a相73％-79％，b相27-21％；63-72min，a相79％-82％，b相21％-18％；流速1.0ml·min^-1，采用dad檢測器，波長255nm，柱溫33℃，理論塔板數(shù)按煙花苷峰計算應(yīng)大于2000。記錄72分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得祖卡木顆粒的指紋圖譜中17個共有峰，由這17個共有峰構(gòu)成祖卡木制劑的指紋特征，作為祖卡木制劑成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

本發(fā)明實施例所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法制得的祖卡木制劑的指紋圖譜檢測方法，建立的祖卡木制劑hplc指紋圖譜能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；建立的祖卡木制劑hplc特征指紋圖譜共有模式，出峰較多，峰形好，易于鑒別，相似性高，反映的信息較完全，可以充分反映化學(xué)成分的信息，并且各個峰吸收值良好，基線平穩(wěn)，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，準(zhǔn)確可靠，避免了祖卡木制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標(biāo)的可能性。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從整體特征上控制祖卡木其制劑的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，從而確保祖卡木制劑的安全性和有效性，為祖卡木制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

實施例4.

(1)供試品溶液的制備：

精密稱定3g祖卡木顆粒，溶解于30ml水中，加熱溶解，冷卻至室溫，得祖卡木顆粒溶液；

用30ml的水飽和正丁醇溶液萃取祖卡木顆粒溶液，靜置分層后，得上層溶液1和下層溶液1；用20ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液1，靜置分層后，得上層溶液2和下層溶液2，用20ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液2，靜置分層后，得上層溶液3和下層溶液3，合并上層溶液1、上層溶液2和上層溶液3，得萃取液；

蒸干萃取液去除正丁醇，加熱溫度小于80℃，得殘渣；

將殘渣溶解于50ml的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為50％的甲醇溶液后，過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：精密稱定0.01mg的煙花苷對照品，加入到1ml的甲醇，溶解后過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液作為對照品溶液；

(3)檢測：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各6μl，注入高效液相色譜儀，記錄75分鐘內(nèi)的色譜圖，高效液相色譜測定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％磷酸水溶液為流動相b，梯度洗脫，流動相a、b的體積分?jǐn)?shù)變化為：0-10min，a相15％-35％，b相85％-65％；10-35min，a相35％-55％，b相65％-45％；35-40min，a相55％-65％，b相45％-35％；40-45min，a相65％-67％，b相35％-33％；45-50min，a相67％-70％，b相33％-30％；50-55min，a相70％-72％，b相30％-28％；55-58min，a相72％-73％，b相28-27％；58-63min，a相73％-79％，b相27-21％；63-75min，a相79％-82％，b相21％-18％；流速1.0ml·min^-1，采用dad檢測器，波長254nm，柱溫35℃，理論塔板數(shù)按煙花苷峰計算應(yīng)大于2000。記錄75分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得祖卡木顆粒的指紋圖譜中18個共有峰，由這18個共有峰構(gòu)成祖卡木制劑的指紋特征，作為祖卡木制劑成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

本發(fā)明實施例所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法制得的祖卡木制劑的指紋圖譜檢測方法，建立的祖卡木制劑hplc指紋圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；建立的祖卡木制劑hplc特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了18個共有峰，出峰較多，峰形好，易于鑒別，相似性高，反映的信息較完全，可以充分反映化學(xué)成分的信息，并且各個峰吸收值良好，基線平穩(wěn)，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，準(zhǔn)確可靠，避免了祖卡木制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標(biāo)的可能性。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從整體特征上控制祖卡木其制劑的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，從而確保祖卡木制劑的安全性和有效性，為祖卡木制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

實施例5.

(1)供試品溶液的制備：

精密稱定4g祖卡木顆粒，溶解于50ml水中，加熱溶解，冷卻至室溫，得祖卡木顆粒溶液；

用50ml的水飽和正丁醇溶液萃取祖卡木顆粒溶液，靜置分層后，得上層溶液1和下層溶液1；用50ml的水飽和正丁醇溶液萃取下層溶液1，靜置分層后，得上層溶液2和下層溶液2，合并上層溶液1和上層溶液2，得萃取液；

蒸干萃取液去除正丁醇，加熱溫度為73℃，得殘渣；

將殘渣溶解于50ml的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60％的甲醇溶液后，過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：精密稱定0.01mg的煙花苷對照品，加入到1ml的甲醇，溶解后過0.22μm的微孔濾膜，得濾液，濾液作為對照品溶液；

(3)檢測：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各7μl，注入高效液相色譜儀，記錄69分鐘內(nèi)的色譜圖，高效液相色譜測定的色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇為流動相a，以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％磷酸水溶液為流動相b，梯度洗脫，流動相a、b的體積分?jǐn)?shù)變化為：0-10min，a相15％-35％，b相85％-65％；10-35min，a相35％-55％，b相65％-45％；35-40min，a相55％-65％，b相45％-35％；40-45min，a相65％-67％，b相35％-33％；45-50min，a相67％-70％，b相33％-30％；50-55min，a相70％-72％，b相30％-28％；55-58min，a相72％-73％，b相28-27％；58-63min，a相73％-79％，b相27-21％；63-69min，a相79％-82％，b相21％-18％；流速1.0ml·min^-1，采用dad檢測器，波長254nm，柱溫35℃，理論塔板數(shù)按煙花苷峰計算應(yīng)大于2000。記錄69分鐘內(nèi)的色譜圖，用指紋圖譜軟件對圖譜進行處理，即得祖卡木顆粒的指紋圖譜中18個共有峰，由這18個共有峰構(gòu)成祖卡木制劑的指紋特征，作為祖卡木制劑成分的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

本發(fā)明實施例所述的一種祖卡木制劑的質(zhì)量檢測方法，根據(jù)該檢測方法制得的祖卡木制劑的指紋圖譜檢測方法，建立的祖卡木制劑hplc指紋圖譜與對照圖譜的相似度均大于0.9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量；建立的祖卡木制劑hplc特征指紋圖譜共有模式，標(biāo)定了18個共有峰，出峰較多，峰形好，易于鑒別，相似性高，反映的信息較完全，可以充分反映化學(xué)成分的信息，并且各個峰吸收值良好，基線平穩(wěn)，建立的指紋圖譜技術(shù)含量高，準(zhǔn)確可靠，避免了祖卡木制劑質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標(biāo)的可能性。該方法簡便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好，能從整體特征上控制祖卡木其制劑的質(zhì)量，保證其質(zhì)量穩(wěn)定、可控，從而確保祖卡木制劑的安全性和有效性，為祖卡木制劑的質(zhì)量控制提供科學(xué)的依據(jù)。

二實驗測試

1、精密度試驗

取實施例3的同一批祖卡木顆粒1份，制備供試品溶液，重復(fù)進樣6次，記錄色譜圖，分別對共有峰的相對保留時間及峰面積比值進行考察，結(jié)果各共有峰相對保留時間rsd小于0.1％，相對峰面積比值rsd小于2.34％，利用中國藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)a版”，將hplc圖譜導(dǎo)入，經(jīng)多點校正和數(shù)據(jù)匹配，以平均數(shù)法生成對照圖譜，如圖2所示，圖中從上至下相似度分別為0.997、1、0.998、0.996、0.995、0.999，相似度均大于0.994，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。

2、重復(fù)性試驗

精密稱取實施例2的同一批祖卡木顆粒6份，制備供試品溶液，分別進樣，記錄色譜圖，對共有峰的相對保留時間及峰面積比值進行考察，結(jié)果各共有峰相對保留時間rsd小于0.11％，相對峰面積比值rsd小于2.55％，利用中國藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)a版”，將hplc圖譜導(dǎo)入，經(jīng)多點校正和數(shù)據(jù)匹配，以平均數(shù)法生成對照圖譜，如圖3所示，圖中從上至下相似度分別為0.997、0.996、0.993、0.994、0.998、0.996，相似度均大于0.992，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。

3、穩(wěn)定性試驗

精密稱取實施例4的同一批祖卡木顆粒1份，制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24分鐘進樣分析，對共有峰的相對保留時間及峰面積比值進行考察，結(jié)果各共有峰相對保留時間rsd小于0.32％，相對峰面積比值rsd小于3.0％，利用中國藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)a版”，將hplc圖譜導(dǎo)入，經(jīng)多點校正和數(shù)據(jù)匹配，以平均數(shù)法生成對照圖譜，如圖4所示，圖中從上至下相似度分別為0.998、0.999、0.996、0.999、0.995、0.995，相似度均大于0.994，能有效的表征其質(zhì)量。

4、共有峰相對保留時間和共有峰相對峰面積

分別稱取10批實施例5的同一批祖卡木其顆粒各4g，加入50ml水，加熱溶解，冷卻，采用水飽和正丁醇萃取2次，每次50ml，合并萃取液，蒸干后加體積濃度50％甲醇50ml溶解，過0.22μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，進樣。對共有峰的相對保留時間及峰面積比值進行考察，結(jié)果見表2、表3；利用中國藥典委員會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)a版”，將10份hplc圖譜導(dǎo)入，經(jīng)多點校正和數(shù)據(jù)匹配，以平均數(shù)法生成對照圖譜，如圖5所示，10批相似度分別為0.995、0.984、0.998、0.994、0.984、0.999、0.995、0.994、0.992、0.990，相似度均大于0.9；

表2祖卡木其顆粒指紋對照圖譜10批次共有峰相對保留時間

由表2可以看出，對10個批次祖卡木其顆粒共有峰的相對保留時間比值進行考察，結(jié)果各共有峰相對保留時間比值的rsd值小于0.3％。

表3祖卡木其顆粒指紋對照圖譜10批次共有峰相對峰面積

注：s為標(biāo)準(zhǔn)峰，即煙花苷的峰。

由表3可以看出，對10個批次祖卡木顆粒共有峰的相對峰面積比值進行考察，結(jié)果各共有峰相對峰面積比值的rsd值較大，說明這10批次祖卡木顆粒中個別批次的成分含量具有一定的差異。

以上所述，僅是本發(fā)明實施例的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明實施例作任何形式上的限制，依據(jù)本發(fā)明實施例的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明實施例技術(shù)方案的范圍內(nèi)。