本發(fā)明涉及氨基甲酸乙酯檢測領域，具體涉及一種快速檢測白酒中氨基甲酸乙酯的方法。
背景技術：
白酒作為中國傳統(tǒng)的飲料酒，有著幾千年的歷史，并得到廣泛傳承。白酒在發(fā)酵過程中，會產(chǎn)生一種氨基甲酸乙酯，但是這種環(huán)境下產(chǎn)生的氨基甲酸乙酯一旦被人體直接吸收飲用，就會嚴重導致的身體致癌。
氨基甲酸乙酯可由自然反應及添加前驅(qū)物質(zhì)兩種方式形成，其致癌機理是通過兩種不同途徑破壞dna結(jié)構(gòu)。通常情況，主要通過減少前體物質(zhì)的添加和形成抑制氨基甲酸乙酯的生成。氨基甲酸乙酯的通用檢測方法為色譜與不同檢測器結(jié)合使用或色譜與質(zhì)譜聯(lián)用，其中，檢測前的樣品前處理有液液萃取，固相萃取等不同形式。目前，我國檢測控制工作雖然已經(jīng)取得一定進展，但是檢測方法不夠經(jīng)濟有效，控制方法不能夠普遍應用。關于控制方法的最新研究中，基因工程技術與系統(tǒng)生物技術的相關應用納入進程，后基因組研究和蛋白質(zhì)學等對基因的應用改造處于探索階段。隨著關于氨基甲酸乙酯的危害、形成機理等方面的研究不斷深入，不同機制的控制方法不斷出現(xiàn)。ec的處理逐步進入更加完善的狀態(tài)。
鑒于氨基甲酸乙酯的上述危害之大，研究一種快速檢測白酒中氨基甲酸乙酯的檢測方法迫在眉睫。目前氨基甲酸乙酯的檢測多采用比色法或者氣相色譜質(zhì)譜法。其中，比色法只能半定量，不穩(wěn)定，氣相色譜質(zhì)譜法操作費時、麻煩，且使用的試劑有毒，不利于人體健康。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明正是為了避免上述現(xiàn)有技術所存在的不足之處，提供了一種快速檢測白酒中氨基甲酸乙酯的方法，實現(xiàn)快速檢測氨基甲酸乙酯。
本發(fā)明為解決技術問題采用如下技術方案：一種快速檢測白酒中氨基甲酸乙酯的方法，操作步驟如下所示：
1)前處理：
取樣至蒸發(fā)瓶中，在20-50℃，20-100mpa下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，用超純水定容后再經(jīng)過過濾，獲得待測樣品；
2)設定超高效液相色譜儀的條件為：
色譜柱為acquityuplcbehc181.7μm2.1×50mmcolumn液相色譜柱；
柱溫為30～45℃；
樣品室溫度為10～20℃；
流動相：a相為乙腈，b相為體積濃度為(0.1％—0.5％的乙酸水溶液)；
流速為0.2～0.5ml/min；
洗脫方式為等度洗脫；
進樣量為1～5μl；
檢測所用時間為2min；
3)三重四級桿質(zhì)譜檢測器的條件設定為：
離子化方式：esi+；
監(jiān)測方式：多反應監(jiān)測模式mrm；
錐孔電壓：30～50v；
毛細管電壓：3.00～5.00kv；
脫溶劑氣溫度：400～600℃；
脫溶劑氣流量：500～1000l/h；
錐空氣流量：50～100l/h；
離子源溫度：150～500℃；
4)母離子以及碎片離子的掃描：
使用快速直接注入質(zhì)譜的模式(infusion模式)進入質(zhì)譜，不需要加入流動相，標準樣品的濃度保持配制的濃度，不會得到稀釋，同種濃度的樣品使用注入的進樣模式在質(zhì)譜中的相應要比普通模式進樣的響應高3-5倍。
(4)質(zhì)譜方法參數(shù)表如表1：
表1：質(zhì)譜方法參數(shù)表
5)氨基甲酸乙酯的標準曲線的繪制：
取氨基甲酸乙酯標準品配制質(zhì)量濃度范圍在50～500ng/ml的一系列標準工作溶液，至少配標準樣品5個，然后按照步驟2)所設定的條件用超高效液相色譜分離、質(zhì)譜檢測，以待測物的峰面積或者待測物在質(zhì)譜中的響應值對其所相應的質(zhì)量濃度進行線性回歸，獲得氨基甲酸乙酯的線性回歸方程，線性回歸方程所對應的曲線，即為氨基甲酸乙酯的標準曲線；以待測物在質(zhì)譜中的響應值為例，氨基甲酸乙酯對應的線性回歸方程及相關系數(shù)r2見表2，方程中x為氨基甲酸乙酯的濃度，y為對應的待測物在質(zhì)譜中的響應值。
表2：氨基甲酸乙酯的線性回歸方程、相關系數(shù)、檢出限、定量限
6)待測白酒酒樣的檢測：
將待測白酒酒樣按步驟1)的方式進行前處理獲得待測樣品后，按步驟2)所設定的條件進行檢測，獲得待測樣品的色譜圖，根據(jù)母離子對待測樣品進行定性，然后根據(jù)氨基甲酸乙酯的標準曲線對待測樣品進行定量。
進一步地，步驟1)中采用的過濾方式為：經(jīng)0.22μm濾膜針頭過濾器過濾。
進一步地，步驟2)中所述的等度洗脫中流動相a相與b相的體積比為20％：80％。
本發(fā)明提供了一種快速檢測白酒中氨基甲酸乙酯的方法，具有以下有益效果：
1、本發(fā)明建立了一種利用超高效液相色譜串接三重四級桿質(zhì)譜快速檢測白酒中氨基甲酸乙酯的方法，能夠準確地對白酒中的氨基甲酸乙酯進行定性、定量，為白酒中氨基甲酸乙酯的準確判定、快速檢測提供科學依據(jù)。
2、本發(fā)明的檢測方法操作簡單快捷、準確可靠、重復性好，降低檢測時間可以節(jié)約人力、物力以及財力。
3、本發(fā)明acquityuplcbehc181.7μm2.1×50mmcolumn液相色譜柱與0.1％的乙酸水溶液和乙腈流動相的選擇對白酒中氨基甲酸乙酯達到了優(yōu)異的分離效果。
4、本發(fā)明的前處理操作步驟少，從而降低了實驗誤差并提高了數(shù)據(jù)的準確性。
5、本發(fā)明在找母離子以及碎片時使用了一種直接注入的模式，能夠使相同濃度的物質(zhì)響應增大3-5倍，提高了數(shù)據(jù)的準確性。
6、本發(fā)明測試了加標樣品回收率以及實際樣品中氨基甲酸乙酯的含量。結(jié)果表明，氨基甲酸乙酯的檢出限與定量限完全能夠滿足酒類樣品的測定要求，化合物回收率、重現(xiàn)性均滿足定量測試要求。
具體實施方式
為使本發(fā)明實施例的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將結(jié)合本發(fā)明實施例，對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。
為驗證本發(fā)明方法的準確性，取已知氨基甲酸乙酯含量的幾個白酒樣品按本發(fā)明的方法進行測定，具體步驟如下：
(1)對待測白酒酒樣進行前處理：
準確量取50ml待測白酒酒樣于100ml旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至3-5ml，去除待測白酒中的醇類物質(zhì)，然后用超純水定容至10ml，最后經(jīng)0.22μm濾膜針頭過濾器過濾，獲得待測樣品；
(2)設定超高效液相色譜儀的條件為：
色譜柱為acquityuplcbehc181.7μm2.1×50mmcolumn液相色譜柱；
柱溫為40℃；
樣品室溫度為20℃
流動相：a相為乙腈，b相為體積濃度為0.1％的乙酸水溶液；
流速為0.2ml/min；
洗脫方式為梯度洗脫(流動相a相與b相的體積比為20％：80％)；
進樣量為2μl；
檢測所用時間為2min；
三重四級桿質(zhì)譜檢測器的條件設定為：
離子化方式：esi+；
監(jiān)測方式：多反應監(jiān)測模式mrm；
錐孔電壓：30v；
毛細管電壓：3.00kv；
脫溶劑氣溫度：400℃；
脫溶劑氣流量：1000l/h；
錐空氣流量：50l/h；
離子源溫度：150℃；
質(zhì)譜方法參數(shù)表如表1：
表1：質(zhì)譜方法參數(shù)表
3)待測白酒酒樣的檢測
將待測白酒酒樣按步驟1)的方式進行前處理獲得待測樣品后，按步驟(2)所設定的條件取1.5ml進樣檢測，獲得待測樣品的色譜圖，根據(jù)母離子對待測樣品進行定性分析，然后根據(jù)氨基甲酸乙酯的標準曲線對待測樣品進行定量分析，即獲得待測白酒中所含有的氨基甲酸乙酯及相應含量。
對本發(fā)明方法作如下靈敏度測試：靈敏度測試包括儀器的靈敏度與方法的靈敏度，儀器的靈敏度用儀器的檢出限表示，取信噪比≥3的氨基甲酸乙酯的一系列標準工作溶液的最小濃度為儀器檢出限；方法的靈敏度用方法的定量限表示，取信噪比≥9的氨基甲酸乙酯的一系列標準工作溶液的最小濃度為方法定量限。所得的相關數(shù)據(jù)見表2。
對本發(fā)明方法作如下準確性及重現(xiàn)性實驗：選用同一個白酒樣品經(jīng)前處理后作為空白樣品，分為3份，分別加入一系列標準工作溶液進行加標回收實驗，計算回收率；選取1個白酒樣品按照同一前處理方法處理6個，分別進行實驗，通過計算其相對標準偏差(rsd)的范圍來判斷分析方法的重現(xiàn)性。所述的準確性用回收率來表示，見表3，方法的重現(xiàn)性用相對標準偏差(rsd)來表示，見表4?？梢钥闯龌厥章试?0～120％，rsd<10％。
表3：氨基甲酸乙酯的加標回收率實驗
表:4：氨基甲酸乙酯的重現(xiàn)性實驗
各白酒樣品中氨基甲酸乙酯的實際含量與通過本實施例方法測得的含量見表5。
表5兩種方法檢測同一種樣品的含量比較
需要說明的是，在本文中，諸如第一和第二等之類的關系術語僅僅用來將一個實體或者操作與另一個實體或操作區(qū)分開來，而不一定要求或者暗示這些實體或操作之間存在任何這種實際的關系或者順序。而且，術語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者設備不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句“包括一個……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。
以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實施例技術方案的精神和范圍。