專利名稱：一種藏藥烈香杜鵑及其制劑的質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種質(zhì)量檢測方法，具體涉及一種藏藥烈香杜鵑及其制劑的質(zhì)量檢測方法。
背景技術(shù)：
烈香杜醇(Rhododendronanthopogoniodes Maxim, et Franch)為杜醇花科植物烈香杜鵑的干燥花和葉或帶葉嫩枝，系常用藏藥材，性味甘、澀，平；具有清熱消腫，補(bǔ)腎的功效，主要用于氣管炎，肺氣腫，浮腫，身體虛弱及水土不適，消化不良，胃下垂，胃擴(kuò)張，外用治瘡疬?！对峦跛幵\》記載“治龍、赤巴、培根病、脾胃虛寒、消化不良、水土不服?！薄毒е楸静荨酚涊d“滋補(bǔ)益壽，治寒性培根病?！薄段稓忤F鬟》記載味苦、性溫、效輕。治培根病?！睹麽屓隆酚涊d性溫，治培根病、肺病疼痛、呃逆?！秷D鑒》記載本品生于高山陰面。樹 干白色，葉褐色，花白色，味甘、苦、潘，治龍病、赤巴病、培根病、喑啞病、肺病。烈香杜鵑現(xiàn)已大量應(yīng)用于藏成藥制劑中，藏醫(yī)常用于培根病、肺病、脾胃虛寒、消化不良、水土不服癥等的治療，該藥材收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》藏藥第一冊中，原標(biāo)準(zhǔn)除有顯微理化鑒別外，未制定任何含量測定方法?！禦P-HPLC測定烈香杜鵑葉總黃酮含量的研究》一文提供了一種烈香杜鵑葉總黃酮含量測定的RP-HPLC方法。該方法以槲皮素、山奈素、異鼠李素3種黃酮甙元的總含量作為烈香杜鵑葉總黃酮含量，但未對供試品中雜質(zhì)進(jìn)行處理，干擾成分多，不能準(zhǔn)確可靠的說明烈香杜鵑的質(zhì)量，不適用于制劑中含量的控制。《藏藥烈香杜鵑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究》一文提供了一種采用高效液相色譜法同時測定烈香杜鵑中金絲桃苷、槲皮素的含量的方法。該方法通過對金絲桃苷、槲皮素的含量測定來控制烈香杜鵑的質(zhì)量，但是仍不能全面的反應(yīng)烈香杜鵑的質(zhì)量。綜上所述亟需一種可以全面控制藏藥烈香杜鵑的檢測方法，以保證患者用藥的安全有效。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種藏藥烈香杜鵑及其制劑全面的質(zhì)量檢測方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案一種藏藥烈香杜鵑質(zhì)量檢測方法，所述方法包括烈香杜鵑中總黃酮含量測定的紫外分光光度方法，烈香杜鵑中總槲皮素含量測定的高效液相色譜方法，和烈香杜鵑中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的檢測方法中的一種或幾種。優(yōu)選的，所述質(zhì)量檢測方法包括以下一種或幾種所述總黃酮的含量測定方法是以金絲桃苷制成對照品溶液，經(jīng)黃酮的亞硝酸鈉和硝酸鋁的顯色反應(yīng)(即硝酸鋁顯色法)，通過紫外-可見分光光度法測定不同對照品濃度的吸收度并繪制吸收曲線；將烈香杜鵑粉末經(jīng)過石油醚除雜后配制供試品溶液，經(jīng)過硝酸鋁顯色法顯色后，通過紫外-可見分光光度法測定其吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中總黃酮的含量的方法；所述總槲皮素含量測定方法是以槲皮素對照品為對照，烈香杜鵑使用酸水解后，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積份數(shù)比45:55的甲醇-體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相，檢測波長為360nm的高效液相色譜法；所述黃酮類成分HPLC指紋圖譜的檢測方法，其是以槲皮素、山奈素、金絲桃苷、蘆丁對照品為對照制成四種參照物溶液；色譜條件是十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以異丙醇為流動相B，以體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相C，梯度洗脫，流速為lml/min，檢測波長為360nm ;將參照物溶液與供試品所制備的供試品溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，比較參照物溶液與供試品溶液的相對保留時間和相對峰面積。上面步驟中，作為進(jìn)一步之優(yōu)選，所述總黃酮的含量測定方法中，對照品溶液和供試品溶液均為乙醇為溶劑配制。所述黃酮的亞硝酸鈉和硝酸鋁的顯色反應(yīng)(即硝酸鋁顯色 法)的步驟是對照品溶液或供試品溶液均加水至5ml，加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液Iml，混勻，放置6分鐘，加重量體積份數(shù)比10%硝酸鋁溶液Iml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘。上面步驟中，作為進(jìn)一步之優(yōu)選，所述總槲皮素含量測定方法中，對照品溶液和供試品溶液均由體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液配制，供試品使用回流的方法制備，對供試品進(jìn)行除雜，使脂類及葉綠素類進(jìn)行消解，同時使含槲皮素的黃酮苷均水解轉(zhuǎn)化為槲皮素(即總槲皮素包括游離槲皮素和轉(zhuǎn)化之后槲皮素之和)，便于測定。而且在此條件下還可以采用山奈素對照品作對照，測量山奈素含量，且與槲皮素互不影響。上面步驟中，作為進(jìn)一步之優(yōu)選，所述黃酮類成分HPLC指紋圖譜的檢測方法中，四份參照物溶液和供試品溶液均由75%乙醇配制。另外，作為本發(fā)明另一優(yōu)選，梯度洗脫優(yōu)選下面技術(shù)方案
權(quán)利要求
1.一種藏藥烈香杜鵑質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述方法包括烈香杜鵑中總黃酮含量測定的紫外分光光度方法，烈香杜鵑中總槲皮素含量測定的高效液相色譜方法，和烈香杜鵑中黃酮類成分HPLC指紋圖譜的檢測方法中的一種或幾種。
2.如權(quán)利要求I所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述質(zhì)量檢測方法包括以下一種或幾種所述總黃酮的含量測定方法是以金絲桃苷制成對照品溶液，經(jīng)黃酮的亞硝酸鈉和硝酸鋁的顯色反應(yīng)，通過紫外-可見分光光度法測定不同對照品濃度的吸收度并繪制吸收曲線；將烈香杜鵑粉末經(jīng)石油醚除雜后配制供試品溶液，經(jīng)過硝酸鋁顯色法顯色后，通過紫外-可見分光光度法測定其吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中總黃酮的含量的方法; 所述總槲皮素含量測定方法是以槲皮素對照品為對照，烈香杜鵑使用酸水解后，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積份數(shù)比45:55的甲醇-體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相，檢測波長為360nm的高效液相色譜法； 所述黃酮類成分HPLC指紋圖譜的檢測方法，其是以槲皮素、山奈素、金絲桃苷、蘆丁對照品為對照制成四種參照物溶液；色譜條件是十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以異丙醇為流動相B，以體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相C，梯度洗脫，流速為lml/min，檢測波長為360nm ;將參照物溶液與供試品所制備的供試品溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，比較參照物溶液與供試品溶液的相對保留時間和相對峰面積。
3.如權(quán)利要求2所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述總黃酮的含量測定方法如下 對照品溶液的制備取金絲桃苷對照品15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻；精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品液lml、2ml、3ml、4ml與5ml，分別置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液1ml，混勻，放置6分鐘，加重量體積份數(shù)比10%硝酸鋁溶液Iml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液IOml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄VA)，在500nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線. 測定法取本品細(xì)粉約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，加石油醚50ml，加熱回流I小時，過濾，濾渣洗滌3次，每次10ml，棄去石油醚液，濾渣揮干溶劑后，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50ml，稱定重量，加熱回流I小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“加水至5ml”起，依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中金絲桃苷的含量(μ g/ml)，計算，即得。
4.如權(quán)利要求2所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述總槲皮素含量測定方法如下 照高效液相色譜法； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比45:55的甲醇-體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相；檢測波長為360nm ;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2000 ； 對照品溶液的制備取槲皮素對照品適量，精密稱定，加體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液制成每Iml含槲皮素150 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取本品細(xì)粉約lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
5.如權(quán)利要求2所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述黃酮類成分的指紋圖譜建立方法如下 照高效液相色譜法； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α，以異丙醇為流動相B，以體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相C，梯度洗脫；流速為Iml/min,檢測波長為360nm ;理論板數(shù)按參照物金絲桃苷峰計算應(yīng)不低于2000 ；時_| (分鐘) 流動相A(%) 流動棚B(%) 流動_C(%)0 30 15 I 8430 60 15—35 I 84—6460 70_35_I_M_ 參照物溶液的制備取槲皮素、山奈素、金絲桃苷、蘆丁對照品適量，精密稱定，加體積份數(shù)比75%乙醇制成每Iml含槲皮素16 μ g、山奈素3 μ g、金絲桃苷74 μ g、蘆丁 13 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取本品細(xì)粉約lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比75%乙醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用體積份數(shù)比75%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各IOul，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，即得； 供試品特征譜圖中應(yīng)呈現(xiàn)12個特征峰，其中4個峰應(yīng)分別與相應(yīng)的參照物峰保留時間相一致；與金絲桃苷參照峰相應(yīng)的峰為S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間和相對峰面積，面積在5%以下的色譜峰不做峰面積要求，其相對保留時間和相對峰面積應(yīng)在規(guī)定值的±10%之內(nèi)。
6.如權(quán)利要求5所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述12個特征峰的相對保留時間規(guī)定值為0. 33 (峰 1)、0. 89 (峰 2)、1.00 (峰 3)、1.08 (峰 4)、1· 19 (峰 5)、1.50 (峰 6)、1.74(峰 7)、L92 (峰 8)、2. 13 (峰 9)、2. 30 (峰 10)、2· 75 (峰 11)、3·21 (峰 12);相對峰面積規(guī)定值為0. 19 (峰 1),0. 16 (峰 2)、1.00 (峰 3)、0. 30 (峰 4)、0.09 (峰 5)、0. 13 (峰 6)、0· 29(峰 7)、0. 86 (峰 8)、0. 59 (峰 9)、0. 31 (峰 10)、0· 40 (峰 11)、0.07 (峰 12)。
7.如權(quán)利要求2、5或6所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，它還包括通過分別以槲皮素、山奈素、金絲桃苷、蘆丁對照品為對照，對烈香杜鵑中的槲皮素、山奈素、金絲桃苷、蘆丁進(jìn)行含量測定的方法。
8.—種藥物制劑中烈香杜鵑的質(zhì)量檢測方法，其特征是，采用權(quán)利要求1-7任一項所述的方法對制劑中烈香杜鵑進(jìn)行質(zhì)量檢測。
9.如權(quán)利要求8所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述質(zhì)量檢測方法如下 總黃酮的含量測定 對照品溶液的制備取金絲桃苷對照品15mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻；精密量取10ml，置IOOml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得； 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品液lml、2ml、3ml、4ml與5ml，分別置25ml量瓶中，各加水至5ml，加重量體積份數(shù)比5%亞硝酸鈉試液1ml，混勻，放置6分鐘，加重量體積份數(shù)比10%硝酸鋁溶液Iml，搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液IOml，再加水至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(《中國藥典》2010年版一部附錄VA)，在500nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線. 測定法取本品細(xì)粉約lg，精密稱定，置圓底燒瓶中，加石油醚50ml，加熱回流I小時，過濾，濾渣洗滌3次，每次10ml，棄去石油醚液，濾渣揮干溶劑后，置圓底燒瓶中，精密加入乙醇50ml，稱定重量，加熱回流I小時，放冷，再稱定重量，用乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻；精密量取5ml，置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法，自“加水至5ml”起，依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中金絲桃苷的含量(μ g/ml )，計算，即得； 總槲皮素含量測定 照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積份數(shù)比45:55的甲醇-體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相；檢測波長為360nm ;理論板數(shù)按槲皮素峰計算應(yīng)不低于2000 ； 對照品溶液的制備取槲皮素對照品適量，精密稱定，加體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液制成每Iml含槲皮素150 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取本品細(xì)粉約lg，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液50ml，密塞，稱定重量，加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用體積份數(shù)比3:1的乙醇-5mol/L鹽酸水溶液混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得; 黃酮類成分的指紋圖譜建立 照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動相Α，以異丙醇為流動相B，以體積份數(shù)比O. 5%磷酸水溶液為流動相C，梯度洗脫；流速為Iml/min,檢測波長為360nm ;理論板數(shù)按參照物金絲桃苷峰計算應(yīng)不低于2000 ；參照物溶液的制備取槲皮素、山奈素、金絲桃苷、蘆丁對照品適量，精密稱定，加體積份數(shù)比75%乙醇制成每Iml含槲皮素16 μ g、山奈素3 μ g、金絲桃苷74 μ g、蘆丁 13 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備取待檢測制劑細(xì)粉約6-10g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入體積份數(shù)比75%乙醇50ml，密塞，稱定重量，加熱回流lh，放冷，再稱定重量，用體積份數(shù)比75%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 測定法分別精密吸取參照物溶液與供試品溶液各IOul，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，即得； 供試品特征譜圖中應(yīng)呈現(xiàn)12個特征峰，其中4個峰應(yīng)分別與相應(yīng)的參照物峰保留時間相一致；與金絲桃苷參照峰相應(yīng)的峰為S峰，計算各特征峰與S峰的相對保留時間和相對峰面積，面積在5%以下的色譜峰不做峰面積要求，其相對保留時間和相對峰面積應(yīng)在規(guī)定值的±10%之內(nèi)；相對保留時間規(guī)定值為:0.33 (峰1)、0. 89 (峰2)、1.00 (峰3)、1.08 (峰4),1. 19 (峰 5),1. 50 (峰 6),1. 74 (峰 7),1. 92 (峰 8),2. 13 (峰 9),2. 30 (峰 10),2. 75 (峰11)、3.21 (峰 12);相對峰面積規(guī)定值為:0.19 (峰 1)、0· 16 (峰 2)、1.00 (峰 3)、0. 30 (峰4),0. 09 (峰 5),0. 13 (峰 6),0. 29 (峰 7),0. 86 (峰 8),0. 59 (峰 9),0. 31 (峰 10),0. 40 (峰11),0. 07 (峰 12)。
10.如權(quán)利要求8或9所述的質(zhì)量檢測方法，其特征是，所述制劑為雪山胃寶丸、手參腎寶膠囊。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種藏藥烈香杜鵑及其制劑的質(zhì)量檢測方法，該方法包括采用紫外-分光光度法測定烈香杜鵑及其制劑中總黃酮的含量，采用高效液相色譜法同一色譜條件下同時測定烈香杜鵑及其制劑中總槲皮素含量，采用高效液相色譜法建立烈香杜鵑及其制劑中黃酮類成分的指紋圖譜，通過指紋圖譜中共有峰的有無，可有效保證烈香杜鵑及其制劑的質(zhì)量，進(jìn)而保證了患者用藥的安全。本發(fā)明質(zhì)量檢測方法供試品溶液穩(wěn)定，精密度高，重現(xiàn)性良好，具有一定的專屬性，所得指紋圖譜中各特征成分分離效果良好，可用于烈香杜鵑藥材的質(zhì)量檢測，有利于保證藏藥烈香杜鵑及其制劑的安全有效、質(zhì)量可控和臨床療效。
文檔編號G01N21/33GK102809545SQ20121029504
公開日2012年12月5日 申請日期2012年8月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月20日
發(fā)明者張義智, 江玉娟, 孫緒丁, 劉玉芹, 任松鵬 申請人:山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司