專利名稱：：一種夏枯草制劑的質量檢測方法
技術領域：
：本發(fā)明屬中藥質量檢測領域，具體來說涉及一種夏枯草制劑的質量檢測方法。
背景技術：
：夏枯草制劑的質量檢測方法之一是采用分光光度法測定總黃酮含量，但黃酮類化合物種類很多，因此該方法專屬性差，不能有效控制產(chǎn)品質量。因此夏枯草制劑的質量檢測方法又增加了高效液相色譜法測定金絲桃苷含量，但夏枯草中金絲桃苷含量較低，在制劑中含量限度低于萬分之一，還需要結合測定總黃酮含量來控制產(chǎn)品質量，方法繁瑣，費時費力，因此，還需要進一步改進。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于克服上述缺點而提供一種能有效控制夏枯草制劑質量，準確度高、技術先進的使用高效液相色譜法測定夏枯草中槲皮素的含量的夏枯草制劑的質量檢測方法。發(fā)明人根據(jù)“中藥新藥研究的技術要求”，試驗采用了專屬性強、靈敏度高的高效液相色譜法測定夏枯草制劑中所含熊果酸、金絲桃苷和槲皮素的含量，但熊果酸、金絲桃苷的含量均低于萬分之一，而槲皮素的含量高于萬分之一，且槲皮素與其他組份分離度、重現(xiàn)性、精密度、回收率都較好，故確定本發(fā)明的夏枯草制劑的質量檢測方法采用高效液相色譜法測定夏枯草制劑中槲皮素的含量。本發(fā)明的一種夏枯草制劑的質量檢測方法，取夏枯草2667份，分別加水12、10、8倍煎煮三次，每次2小時，濾過，合并煎液，濾液濃縮至相對密度為1.08～1.15(60～70℃)的浸膏，取70％浸膏噴霧干燥，得噴霧粉，備用，剩余浸膏加甜菊素6份混勻后作為粘合劑與噴霧粉、糊精515份沸騰制粒，干燥，混合，整粒，制得本品1000份，其特征在于包括以下步驟(1)供試品溶液的制備取本品研細，精密稱取0.5～1.0g，置錐形瓶中，加體積比為70∶10∶20的甲醇/鹽酸/水的提取-水解溶液25ml，于80℃水浴中回流提取2小時，取下，放冷，用20％氫氧化鈉溶液/70％甲醇溶液中和PH至3～5，轉至50ml容量瓶，用70％甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；(2)對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇，制成每1ml含槲皮素15.00～20.00ug的溶液；(3)含量測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄□D)測定；(4)色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，體積比為50∶50的甲醇-0.4％磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為360～372nm，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算應不低于3000。本發(fā)明的夏枯草制劑的質量檢測方法，其中(2)對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品20.00mg置于200ml量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，精密吸取20ml置于100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即制成每1ml含槲皮素20.00ug的溶液。本發(fā)明的夏枯草制劑的質量檢測方法，其中檢測波長為372nm。本發(fā)明的夏枯草制劑可以是常規(guī)的各種劑型。本發(fā)明的方法與現(xiàn)有夏枯草制劑的質量檢測方法相比主要優(yōu)越性如下經(jīng)過反復實驗，發(fā)現(xiàn)夏枯草中槲皮素含量較高，故確定采用高效液相色譜法測定夏枯草顆粒中槲皮素的含量。經(jīng)試驗表明，槲皮素與其他組份分離度好，線性關系、重現(xiàn)性、精密度、穩(wěn)定性、回收率都較好。供試品溶液的制備采用回流2小時處理能夠得到較好的檢測結果，又可以節(jié)省時間，提高效率，因此，本發(fā)明的方法準確度高、技術先進、操作快速簡便，能使產(chǎn)品質量得到更有效的控制。具體實施例方式以下通過夏枯草顆粒的實施例和試驗例來進一步說明本發(fā)明的有益效果。夏枯草顆粒(1)制備取夏枯草2667g，分別加水12、10、8倍煎煮三次，每次2小時，濾過，合并煎液，濾液濃縮至相對密度為1.08～1.15(60～70℃)的浸膏，取70％浸膏噴霧干燥，得噴霧粉，備用。剩余浸膏加甜菊素6g混勻后作為粘合劑與噴霧粉、糊精515g沸騰制粒，干燥，混合，整粒，制得1000g本品，分裝成每袋裝3g。(2)用法用量口服，一次1袋，一日2次。(3)性狀本品為棕褐色的顆粒；氣香，味微甜、微苦。(4)鑒別①取本品1.5g，加水20ml溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，每次20ml，合并提取液，置水浴上蒸干，殘渣加水20ml，加熱使溶解，水溶液加于已處理好的聚酰胺柱(內徑1.8cm、高6cm)上，用水60ml洗脫，棄去水洗液，再用乙醇60ml洗脫，收集洗脫液，置水浴上蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取夏枯草對照藥材4g加水50ml，回流提取30分鐘，過濾，濾液照供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；再取金絲桃苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G高效薄層板上使成條狀，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，熱風吹干后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。②取本品6g，加乙醇50ml，加熱回流3小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取供試品溶液10μl及對照品溶液1μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，100℃加熱至斑點清晰，分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(5)檢查應符合顆粒劑項下有關各項規(guī)定(《中國藥典》2000年版一部附錄IC)。實施例1夏枯草顆粒的質量檢測方法，包括以下步驟(1)供試品溶液的制備取本品研細，精密稱取0.5g，置錐形瓶中，加體積比為70∶10∶20的甲醇/鹽酸/水的提取-水解溶液25ml，于80℃水浴中回流提取2小時，取下，放冷，用20％氫氧化鈉溶液/70％甲醇溶液中和PH至3～5，轉至50ml容量瓶，用70％甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；分別稱取兩個平行樣S1、S2S1S2空瓶51.780252.7992空瓶+樣51.317252.3322樣0.46300.4670(2)對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品20.00mg置于200ml量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，精密吸取20ml置于100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即制成每1ml含槲皮素20.00ug的溶液；同樣制備方法分別制成對照品溶液1、對照品溶液2對照品溶液1對照品溶液2空瓶71.0018270.09875空瓶+樣71.0218270.11875樣0.020000.02000(3)色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，體積比為50∶50的甲醇-0.4％磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為360～372nm，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算不低于3000。含量測定方法分別精密吸取二種對照品溶液和二份供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，連續(xù)進樣各2次，照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄□D)測定，記錄色譜圖，測定峰面積，以下式計算樣品中槲皮素的含量As供試品溶液的峰面積；照品溶液的峰面積；Cs對照品濃度(mg/ml)；Ms供試品取樣量(g)；V定容體積(ml)□測定結果□計算(平均含量3.0270g/袋)S＝1.4mg/袋RSD＝1.0％實施例2夏枯草顆粒的質量檢測方法，包括以下步驟(1)供試品溶液的制備取本品研細，精密稱取0.5g，置錐形瓶中，加體積比為70∶10∶20的甲醇/鹽酸/水的提取-水解溶液25ml，于80℃水浴中回流提取2小時，取下，放冷，用20％氫氧化鈉溶液/70％甲醇溶液中和PH至3～5，轉至50ml容量瓶，用70％甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；分別稱取兩個平行樣S1、S2S1S2空瓶52.533251.2136空瓶+樣52.032250.7233樣0.50100.4903(2)對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品20.00mg置于200ml量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，精密吸取20ml置于100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即制成每1ml含槲皮素20.00ug的溶液；同樣制備方法分別制成對照品溶液1、對照品溶液2對照品溶液1對照品溶液2空瓶71.0018270.09875空瓶+樣71.0218270.11875樣0.020000.02000(3)色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，體積比為50∶50的甲醇-0.4％磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為360～372nm，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算不低于3000。含量測定方法分別精密吸取二種對照品溶液和二份供試品溶液各10μl注入液相色譜儀，連續(xù)進樣各2次，照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄□D)測定，記錄色譜圖，測定峰面積，以實施例同樣的方式計算樣品中槲皮素的含量□測定結果<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="792">對照品溶液2112.188701.60.856931-701.6211.842703.80.876829-703.8平均峰面積700.4RSD0.4％</table></tables><tablesid="table5"num="005"><tablewidth="660">進樣序號保留時間峰面積對稱性理論板數(shù)分離度供試品溶液1115.210306.80.867189-215.239311.80.817217-供試品溶液2115.215291.10.867362-215.220293.50.847541-</table></tables>□計算(平均含量3.0023g/袋)S＝1.3mg/袋RSD＝2.1％實施例3～12夏枯草顆粒的質量檢測方法，包括以下步驟(1)供試品溶液的制備取本品研細，精密稱取1.0g，置錐形瓶中，加體積比為70∶10∶20的甲醇/鹽酸/水的提取-水解溶液25ml，于80℃水浴中回流提取2小時，取下，放冷，用20％氫氧化鈉溶液/70％甲醇溶液中和PH至3～5，轉至50ml容量瓶，用70％甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；其余步驟同實施例1實施倒3～12十批供試品測定結果見下表<tablesid="table6"num="006"><tablewidth="752">實施例批號槲皮素的含量(mg·袋-1)第一次第二次平均值</table></tables>根據(jù)以上實施例1～12共12批樣品的含量測定結果，并考慮藥材含量的波動，確定本品每袋含夏枯草以槲皮素(C15H10O7·2H2O)計，不得少于1.0mg。試驗例1、樣品前處理(1)性狀見上述夏枯草顆粒質量標準，十批樣品均與此描述一致。(2)鑒別夏枯草制劑所含金絲桃苷及夏枯草對照藥材的薄層定性鑒別。因現(xiàn)有技術夏枯草口服液中僅有金絲桃苷的薄層定性鑒別，為了更準確地體現(xiàn)該產(chǎn)品的質量可靠性，增加夏枯草對照藥材的薄層定性鑒別。經(jīng)試驗供試品色譜中在與對照品及對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，故選擇本發(fā)明的方法。(3)含量測定為夏枯草顆粒所含槲皮素成分的含量測定，現(xiàn)有技術夏枯草口服液采用分光光度法測總黃酮，該方法專屬性差，根據(jù)“中藥新藥研究的技術要求”，試驗采用了專屬性強、靈敏度高的高效液相色譜法測定夏枯草顆粒中所含熊果酸、金絲桃苷和槲皮素的含量，但熊果酸、金絲桃苷的含量均低于萬分之一，而槲皮素的含量高于萬分之一，故確定采用高效液相色譜法測定本品中槲皮素的含量。色譜條件如下所述，槲皮素與其他組份分離度、重現(xiàn)性、精密度、回收率都較好。(4)藥品與藥劑甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，樣品由貴陽新天藥業(yè)股份有限公司提供。(5)儀器分析條件儀器為Agilent1100高效液相色譜儀，VWD檢測器，Agilent1100化學工作站。(6)色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱EliteHypersilC18，5μm，4.6×250mm，流動相采用甲醇-0.4％磷酸溶液(50∶50)，檢測波長372nm，柱溫為25℃，流速為1.0ml/min，理論塔板數(shù)以槲皮素峰計應不低于3000。(7)檢測波長的選擇取槲皮素對照品溶液進行UV光譜掃描，在372nm處有最大吸收，故選372nm作為檢測波長。(8)供試品溶液處理的選擇按實施例含量測定方法中供試品溶液制備方法，通過超聲1小時、超聲2小時、超聲3小時、回流1小時、2小時、3小時的比較證明，回流2小時能夠得到滿意的實驗結果，又可以節(jié)省時間，提高效率，具體數(shù)據(jù)見表一。表一供試品溶液處理試驗2、方法學考察(1)線性關系的考察精密稱取槲皮素對照品10.5mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20ml至50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即制成每1ml含42.0μg的對照品溶液，分別精密吸取上述對照品溶液2ml、5ml、10ml、15ml和20ml置于20ml量瓶中，加甲醇至刻度。分別吸取上述對照品溶液10μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定。以槲皮素進樣量(μg)為橫坐標，相應的峰面積(A)為縱坐標，計算回歸方程為A＝3851.4C-45.446r＝0.9999具體數(shù)據(jù)見表二表二線性關系考察試驗表明槲皮素進樣量在0.042～0.42μg范圍內線性關系良好。(2)精密度試驗精密稱取槲皮素對照品10.5mg置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取20ml至100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即制成每1ml含21.0μg的對照品溶液。取此對照品溶液，重復進樣五次，每次10μl，測定槲皮素峰面積，結果RSD為0.9％，表明儀器的精密度良好。見表三。表三精密度試驗(3)重復性試驗取同批(批號20021001)供試品，按正文含量測定方法制備供試品溶液5份并測定含量，有良好的重重復性，結果見表四。表四重復性試驗(4)穩(wěn)定性試驗樣品穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液(批號20021001)按正文含量測定方法在不同時間分別測定峰面積，共測定6次。結果RSD為1.6％，表明供試品溶液在24h內穩(wěn)定，見表五。表五樣品穩(wěn)定性試驗對照品穩(wěn)定性試驗取同一份對照品溶液(21.0μg/ml)按正文含量測定方法在不同時間分別測定峰面積，共測定7次。結果RSD為1.4％，表明對照品溶液在24h內穩(wěn)定，見表六。表六對照品穩(wěn)定性試驗(5)加樣回收率試驗精密稱取已知含量(0.43mg·g-1)的同一供試品(批號20021001)5份，精密加入槲皮素對照溶液(0.02mg·ml-1)5ml，按正文所述方法提取并按色譜條件進行測定，以下式計算回收率，結果見表七，說明本方法有良好的回收率。表七回收率實驗結果以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非對本發(fā)明作任何形式上的限制，任何未脫離本發(fā)明技術方案內容，依據(jù)本發(fā)明的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術方案的范圍內。權利要求1.一種夏枯草制劑的質量檢測方法，取夏枯草2667份，分別加水12、10、8倍煎煮三次，每次2小時，濾過，合并煎液，濾液濃縮至溫度為60～70℃、相對密度為1.0g～1.15的浸膏，取70％浸膏噴霧干燥，得噴霧粉，備用，剩余浸膏加甜菊素6份混勻后作為粘合劑與噴霧粉、糊精515份沸騰制粒，干燥，混合，整粒，制得本品1000份，其特征在于包括以下步驟(1)供試品溶液的制備取本品研細，精密稱取0.5～1.0g，置錐形瓶中，加體積比為70∶10∶20的甲醇/鹽酸/水的提取-水解溶液25ml，于80℃水浴中回流提取2小時，取下，放冷，用20％氫氧化鈉溶液/70％甲醇溶液中和PH至3～5，轉至50ml容量瓶，用70％甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；(2)對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇，制成每1ml含槲皮素15.00～20.00ug的溶液；(3)含量測定方法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定；(4)色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，體積比為50∶50的甲醇-0.4％磷酸溶液為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長為360～372nm，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計算應不低于3000。2.如權利要求1所述的夏枯草制劑的質量檢測方法，其中(2)對照品溶液的制備精密稱取槲皮素對照品20.00mg置于200ml量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，精密吸取20ml置于100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，即制成每1ml含槲皮素20.00ug的溶液。3.如權利要求1或2所述的夏枯草制劑的質量檢測方法，其中，檢測波長為372nm。4.如權利要求3所述的夏枯草制劑的質量檢測方法，其中每袋3g含夏枯草以槲皮素(C15H10O7·2H2O)計，不得少于1.0mg。5.如權利要求4所述的夏枯草制劑的質量檢測方法，其中夏枯草制劑是常規(guī)的各種劑型。全文摘要本發(fā)明公開了一種夏枯草制劑的質量檢測方法，包括下述步驟供試品溶液的制備，精密稱取樣品，置錐形瓶中，加體積比為70∶10∶20的甲醇/鹽酸/水的提?。馊芤海?0℃水浴中回流提取2小時，取下，放冷，用20％氫氧化鈉溶液/70％甲醇溶液中和pH至3～5，用70％甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；對照品溶液的制備，精密稱取槲皮素對照品適量，加甲醇，制成每1ml含槲皮素15.00～20.00ug的溶液；含量測定，分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定。本發(fā)明的方法準確度高、技術先進、操作快速簡便，能使產(chǎn)品質量得到更有效的控制。文檔編號G01N1/28GK1601273SQ20041004091公開日2005年3月30日申請日期2004年10月21日優(yōu)先權日2004年10月21日發(fā)明者董大倫申請人:貴陽新天藥業(yè)股份有限公司