本發(fā)明涉及β-丙氨酸的定量檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
。
背景技術(shù)：
：β-丙氨酸是自然界中唯一存在的β型氨基酸，在醫(yī)藥、化工、食品、環(huán)境等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，可合成泛酸、肌肽、帕米磷酸鈉、巴柳氮等，它還可以作為藥劑制備中的沉淀劑，水的凈化絮凝劑，電鍍緩蝕劑，鉛中毒的解毒劑?，F(xiàn)有公開(kāi)的技術(shù)文獻(xiàn)中，測(cè)定β-丙氨酸轉(zhuǎn)化液中β-丙氨酸的含量為柱前衍生后，用c18柱進(jìn)行液相檢測(cè)，此方法需預(yù)先處理樣品，步驟較為復(fù)雜，耗時(shí)長(zhǎng)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種β-丙氨酸的定量檢測(cè)方法，能夠快速、準(zhǔn)確的測(cè)定β-丙氨酸的含量，適于工業(yè)生產(chǎn)中使用，尤其適用于轉(zhuǎn)化液中β-丙氨酸含量的快速測(cè)定。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：β-丙氨酸的定量檢測(cè)方法，使用高效液相色譜法檢測(cè)，所用色譜柱為氨基鍵合硅膠柱，柱溫為30℃；以0.05mol/l的磷酸鹽緩沖溶液為流動(dòng)相，其ph值為4.0，流速為0.7～1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm；檢測(cè)步驟為：1）將待測(cè)樣品用流動(dòng)相稀釋制備成為樣品待測(cè)液，將β-丙氨酸對(duì)照品溶于流動(dòng)相制備成為對(duì)照品溶液；2）將樣品待測(cè)液、對(duì)照品溶液分別采用相同的檢測(cè)條件用高效液相色譜儀檢測(cè)，得到樣品待測(cè)液色譜圖、對(duì)照品溶液色譜圖，通過(guò)外標(biāo)法測(cè)算出待測(cè)樣品中β-丙氨酸的含量。所述磷酸鹽緩沖溶液為磷酸二氫鉀緩沖溶液。樣品待測(cè)液和對(duì)照品溶液的色譜柱進(jìn)樣量均為20μl。優(yōu)選的，所述流動(dòng)相流速為1.0ml/min。所述對(duì)照品溶液按以下方法制得：稱取β-丙氨酸對(duì)照品20.0mg于50ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。本發(fā)明還提供了如上所述的β-丙氨酸的定量檢測(cè)方法的應(yīng)用，用于轉(zhuǎn)化液中β-丙氨酸含量的測(cè)定。采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于：本發(fā)明能夠簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定化工生產(chǎn)產(chǎn)物中β-丙氨酸的含量，相比于現(xiàn)有技術(shù)，操作更簡(jiǎn)單，耗時(shí)更短，適于工業(yè)生產(chǎn)中使用，尤其適用于轉(zhuǎn)化液中β-丙氨酸含量的快速測(cè)定。附圖說(shuō)明圖1是β-丙氨酸轉(zhuǎn)化液一個(gè)樣品的色譜圖；圖2是β-丙氨酸對(duì)照品的色譜圖。具體實(shí)施方式下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。一種轉(zhuǎn)化液中β-丙氨酸的定量檢測(cè)方法，其步驟如下：1）配制流動(dòng)相0.05mlo/l的磷酸二氫鉀緩沖液，調(diào)節(jié)其ph值為4.0，過(guò)濾，脫氣；2）調(diào)節(jié)高效液相色譜儀，平衡色譜柱，采用的高效液相色譜儀為日本島津lc-15c，進(jìn)樣體積為20μl（定量環(huán)），色譜柱采用氨基鍵合硅膠柱，5μm，4.6*250mm；3）對(duì)照品溶液的制備：稱取標(biāo)品β-丙氨酸固體20.0mg至50ml容量瓶中，用流動(dòng)相定容，即得對(duì)照品溶液。4）樣品待測(cè)溶液的制備：從轉(zhuǎn)化液中吸取0.5ml，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。5）將對(duì)照品溶液和樣品待測(cè)溶液分別用高效液相色譜法檢測(cè)，記錄色譜圖及峰面積，檢測(cè)條件為：控制柱溫為30℃；流動(dòng)相流速：0.7～1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm。需要說(shuō)明的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)需要，也可以適當(dāng)調(diào)整選擇采用其他廠家和型號(hào)的高效液相色譜儀、其他粒徑和長(zhǎng)度的氨基鍵合硅膠柱以及其他進(jìn)樣體積，也能達(dá)到本發(fā)明的目的。6）含量計(jì)算：待測(cè)樣品液中β-丙氨酸的含量為：x=c樣×待測(cè)樣品的稀釋倍數(shù)=(c對(duì)×a樣/a對(duì))×待測(cè)樣品的稀釋倍數(shù)，式中：c對(duì)為對(duì)照品溶液中β-丙氨酸的濃度，單位為mg/ml；a對(duì)為對(duì)照品溶液色譜圖的峰面積或峰高；a樣為樣品待測(cè)液色譜圖的峰面積或峰高；c樣為樣品待測(cè)液中待測(cè)溶液的濃度，單位為mg/ml。實(shí)施例1-3實(shí)施例1-3分別取不同生產(chǎn)批次β-丙氨酸轉(zhuǎn)化液樣品0.5ml，按上述方法測(cè)量，測(cè)量數(shù)據(jù)見(jiàn)下表。實(shí)施例稀釋步驟c對(duì)（mg/ml）a對(duì)a樣x（mg/ml）10.5ml→25ml0.40564441231646037.5220.5ml→25ml0.405644412328652813.0830.5ml→25ml0.405644412327631912.62供試品溶液色譜圖見(jiàn)圖1所示：9.208min為β-丙氨酸的峰，其余的為雜峰，主峰的出峰時(shí)間適宜、理論塔板數(shù)大于5000，且與雜峰分離度良好。對(duì)照品溶液色譜圖見(jiàn)圖2所示，9.202min為β-丙氨酸的峰。以上對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)介紹，本發(fā)明中應(yīng)用具體個(gè)例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行了闡述，以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)，這些改進(jìn)也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁(yè)12