本發(fā)明涉及植物及食品中有機(jī)硒檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種植物來(lái)源有機(jī)硒含量的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
目前檢測(cè)食品中有機(jī)硒的含量，有湖北地標(biāo)富有機(jī)硒食品硒含量要求，有杭州地標(biāo)稻米中有機(jī)硒和無(wú)機(jī)硒含量的測(cè)定。國(guó)標(biāo)中有富硒酵母、富硒食用菌粉、硒化卡拉膠。
而湖北地標(biāo)的檢測(cè)方法是將水相中的硒，經(jīng)過(guò)環(huán)己烷萃取，除去部分有機(jī)硒，剩下的水溶性硒經(jīng)過(guò)消化處理后，都計(jì)算為無(wú)機(jī)硒。通過(guò)總硒減去無(wú)機(jī)硒含量，得到有機(jī)硒的含量。國(guó)標(biāo)中的富硒酵母、富硒食用菌粉的標(biāo)準(zhǔn)是水相中的硒直接用原子熒光檢測(cè)，數(shù)值作為無(wú)機(jī)硒含量。原子熒光檢測(cè)中，+4價(jià)的硒是主要響應(yīng)值，但是其他價(jià)態(tài)的硒，在原子熒光上也有響應(yīng)值，會(huì)引起干擾。
其他有機(jī)硒含量的檢測(cè)方法，例如高效液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜、高效液相色譜-在線消解-原子熒光、氣相質(zhì)譜，設(shè)備投入大，人員要求配置高。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是解決上述技術(shù)缺陷，提供簡(jiǎn)單、快速，且在制備過(guò)程中，減少水溶性有機(jī)硒對(duì)檢測(cè)造成干擾的一種植物來(lái)源有機(jī)硒含量的檢測(cè)方法。
本發(fā)明保護(hù)一種植物來(lái)源有機(jī)硒含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟：
s1、待測(cè)樣品中總硒含量的測(cè)量；
s2、首先取待測(cè)樣品加純水、取濾液、獲得濃縮液a；然后在濃縮液a中加入氯化鈉、取濾液，加入無(wú)水乙醇、取濾液、獲得濃縮液b；最后在濃縮液b內(nèi)加入硝酸、加熱、蒸發(fā)、加入鹽酸，冷卻后進(jìn)行定容，采用原子熒光檢測(cè)法測(cè)量無(wú)機(jī)硒含量；
s3、采用差減法計(jì)算有機(jī)硒含量。
優(yōu)選地，步驟s1中，具體包括如下步驟：
s11、將待測(cè)樣品加入純硝酸后置入微波消解罐中進(jìn)行靜置；
s12、將步驟s11進(jìn)行靜置后的樣品用微波消解儀消解，然后用20％的鹽酸溶液將消解后的溶液稀釋、定容；
s13、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及建立回歸方程：以硒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)溶液為母液配制成濃度梯度為0-200μg/ml的硒標(biāo)準(zhǔn)使用液，采用氫化物發(fā)生—原子熒光光譜法對(duì)硒標(biāo)準(zhǔn)使用液進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)硒標(biāo)準(zhǔn)使用液的測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立回歸方程；
s14、測(cè)定計(jì)算：用氫化物發(fā)生—原子熒光光譜儀對(duì)步驟s13的空白樣品和步驟s12獲得的樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，得到樣品中總硒的含量。
進(jìn)一步地，步驟s14中，原子熒光光譜儀的測(cè)定條件為：負(fù)高壓為240v；燈電流為80ma；原子化溫度為300℃；載氣流速600ml/min，輔助氣流速200ml/min，載流為體積分?jǐn)?shù)5％的鹽酸溶液，還原劑為5～15g/l的硼氫化鉀溶液。
優(yōu)選地，步驟s11中，待測(cè)樣品的用量為0.1～0.3g，純硝酸的用量為2～15ml，靜置5～30min；
步驟s12中，微波消解過(guò)程中，溫度從130℃升溫至180℃，時(shí)長(zhǎng)為20～40min；
優(yōu)選地，步驟s2中，包括如下步驟：
s21、首先，稱取待測(cè)樣品，加純水溶解后靜置，于水浴超聲后過(guò)濾，取濾液、加熱獲得濃縮液a；
s22、在步驟s11獲得的濃縮液a中加入氯化鈉直至氯化鈉不再溶解為止，搖勻、靜置、過(guò)濾、取濾液；再加入無(wú)水乙醇于常溫下靜置3-10h，過(guò)濾去固體，取濾液、蒸發(fā)獲得濃縮液b；
s23、在經(jīng)步驟s22獲得的濃縮液b中加入硝酸，待溶液不再反應(yīng)時(shí)，于電熱板上加熱，溶液蒸發(fā)至10～30ml，加入鹽酸溶液，繼續(xù)加熱直至溶液變?yōu)榍辶翢o(wú)色并伴有白煙出現(xiàn)，即可進(jìn)行冷卻；
s24、用20％的鹽酸溶液將步驟s23冷卻后的溶液定容，即可用原子熒光法檢測(cè)無(wú)機(jī)硒含量。
優(yōu)選地，步驟s21中，待測(cè)樣品用量為0.5～1.0g；純水的用量為30～80ml，水浴溫度為50～70℃，超聲時(shí)間為10～30min；
步驟s21、s22中濃縮液a、濃縮液b的體積均為5～20ml，無(wú)水乙醇的加入量為50～150ml；
步驟23中，加入硝酸的量為5～15ml；
優(yōu)選地，步驟s21、步驟s23中加熱溫度均為40～60℃。
一種植物來(lái)源有機(jī)硒含量的檢測(cè)方法，其優(yōu)點(diǎn)是：
在無(wú)機(jī)硒含量測(cè)量過(guò)程中，對(duì)待測(cè)樣品依次進(jìn)行水解、濃縮、醇沉，以去除待測(cè)樣品中水溶性的有機(jī)硒，從而減少檢測(cè)過(guò)程中的干擾；再進(jìn)行濃縮、消解，以獲得可檢測(cè)的無(wú)機(jī)硒檢測(cè)狀態(tài)；
且方法簡(jiǎn)單、人員配置要求低，設(shè)備價(jià)格低廉、檢測(cè)成本低，穩(wěn)定性高，檢測(cè)精確度高，檢測(cè)速度快。
附圖說(shuō)明
圖1為標(biāo)準(zhǔn)曲線。
具體實(shí)施方式
以下就具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明：
實(shí)施例一
s1、總硒的測(cè)定測(cè)量待測(cè)樣品中總硒含量：設(shè)計(jì)富硒植物a、富硒植物b、壓片糖果樣品a、固體飲料b五組待測(cè)樣品，且各稱取0.2g(精確至0.0001g)，分別進(jìn)行如下步驟：
放入微波消解罐，加入5ml純硝酸，靜置10min，用微波消解儀從130℃升溫至180℃，耗時(shí)30min。將經(jīng)微波消解儀消解后的溶液，用20％的鹽酸溶液稀釋后定容(其中，富硒植物a待測(cè)液定容至5000ml、富硒植物b待測(cè)液定容至5000ml、壓片糖果樣品a待測(cè)液定容至250ml、固體飲料b待測(cè)液定容至50ml)，混勻，以獲得樣品溶液；
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及建立回歸方程：以硒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)溶液為母液配制成濃度梯度為0-200μg/ml的硒標(biāo)準(zhǔn)使用液，采用氫化物發(fā)生—原子熒光光譜法對(duì)硒標(biāo)準(zhǔn)使用液(即空白樣品)進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)硒標(biāo)準(zhǔn)使用液的測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立回歸方程；
具體如下：以濃度為100μg/ml硒國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)溶液,用20％鹽酸，稀釋成0μg/ml、0.8μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的溶液，上述0μg/ml、0.8μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml，即得硒標(biāo)準(zhǔn)使用液；
測(cè)定計(jì)算：用氫化物發(fā)生—原子熒光光譜儀對(duì)上述步驟的空白樣品和獲得的樣品溶液進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得富硒植物a、富硒植物b、壓片糖果樣品a、固體飲料b的總硒含量分別為：944.1mg/kg、345.5mg/kg、87.0mg/kg、4.1mg/kg。
將標(biāo)準(zhǔn)液在如下條件下進(jìn)樣測(cè)試：高壓為240v；燈電流為80ma；原子化溫度為300℃；載氣流速600ml/min，輔助氣流速200ml/min，載流為體積分?jǐn)?shù)5％的鹽酸溶液，還原劑為10g/l的硼氫化鉀溶液。根據(jù)測(cè)定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并建立回歸方程為y＝14.194x+8.4945，r2＝0.9999；標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。
s2、將步驟s1的五組待測(cè)樣品分別進(jìn)行如下操作：
s21、首先取待測(cè)樣品0.5g(精確至0.0001g)，置于100ml燒杯，加入30ml純水(用于提取待測(cè)樣品中水溶性硒)，靜置10min，于50℃水浴超聲30min，過(guò)濾、取濾液，60℃加熱濃縮，即獲得濃縮液a；
s22、當(dāng)濃縮液a濃縮為10ml時(shí)，向濃縮液中加入氯化鈉，直至氯化鈉不再溶解，搖勻，靜置，過(guò)濾，取濾液，用水定容濾液至10ml，加入80ml無(wú)水乙醇，于常溫下靜置3h，過(guò)濾去固體(即去除待測(cè)樣品中剩余水溶性的有機(jī)硒)，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至10ml，即獲得濃縮液b；
s23、于濃縮液b中緩慢加入5ml硝酸，待溶液不再反應(yīng)時(shí)于電熱板上60℃加熱，溶液蒸發(fā)至近干；加入5ml鹽酸溶液(6mol/l)，繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o(wú)色并伴有白煙出現(xiàn)，冷卻，用于將濃縮液中的硒價(jià)態(tài)轉(zhuǎn)換到四價(jià)能檢測(cè)的狀態(tài)；
s24、用20％的鹽酸溶液定容(其中，富硒植物a待測(cè)液定容至250ml、富硒植物b待測(cè)液定容至250ml、壓片糖果樣品a待測(cè)液定容至50ml、固體飲料b待測(cè)液定容至50ml)，混勻，測(cè)得富硒植物a、富硒植物b、壓片糖果樣品a、固體飲料b的無(wú)機(jī)硒含量分別為87.8mg/kg、26.6mg/kg、6.7mg/kg、0.34mg/kg：。
s3、用步驟s1測(cè)得的硒總量減去步驟s2測(cè)得的無(wú)機(jī)硒含量，即獲得樣品中有機(jī)硒含量，且測(cè)得結(jié)果如表1所示：
表1
實(shí)施例二
與實(shí)施例不同之處在于：
步驟s21中，加入50ml純水，靜置20min，于70℃水浴超聲30min；
步驟s22中，加入100ml無(wú)水乙醇，于常溫下靜置10h，過(guò)濾去固體，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至20ml，即獲得濃縮液b；
步驟s23中，于濃縮液b中緩慢加入10ml硝酸。
步驟s24中、用20％的鹽酸溶液定容(其中，富硒植物a待測(cè)液定容至250ml、富硒植物b待測(cè)液定容至250ml、壓片糖果樣品a待測(cè)液定容至50ml、固體飲料b待測(cè)液定容至50ml)，混勻，測(cè)得富硒植物a、富硒植物b、壓片糖果樣品a、固體飲料b的無(wú)機(jī)硒含量分別為：82.1mg/kg、27.3mg/kg、7.1mg/kg、0.1mg/kg。
步驟s3中、用步驟s1測(cè)得的硒總量減去步驟s2測(cè)得的無(wú)機(jī)硒含量，即獲得樣品中有機(jī)硒含量，且測(cè)得結(jié)果如表2所示：
表2
實(shí)施例三
與實(shí)施例不同之處在于：
步驟s21中，加入80ml純水，靜置30min，于70℃水浴超聲10min；
步驟s22中，加入50ml無(wú)水乙醇，于常溫下靜置5h，過(guò)濾去固體，將濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至20ml，即獲得濃縮液b；
步驟s23中，于濃縮液b中緩慢加入5ml硝酸。
步驟s24中、用20％的鹽酸溶液定容(其中，富硒植物a待測(cè)液定容至250ml、富硒植物b待測(cè)液定容至250ml、壓片糖果樣品a待測(cè)液定容至50ml、固體飲料b待測(cè)液定容至50ml)，混勻，測(cè)得富硒植物a、富硒植物b、壓片糖果樣品a、固體飲料b的無(wú)機(jī)硒含量分別為：95.9mg/kg、24.9mg/kg、8.4mg/kg、0.19mg/kg。
步驟s3中、用步驟s1測(cè)得的硒總量減去步驟s2測(cè)得的無(wú)機(jī)硒含量，即獲得樣品中有機(jī)硒含量，且測(cè)得結(jié)果如表2所示：
表2
上述實(shí)施例一、實(shí)施例二、實(shí)施例三中，所述富硒植物a為堇葉碎米薺，取莖葉烘干后粉碎作為待測(cè)樣品；
富硒植物b為恩施德源健康科技發(fā)展有限公司種植基地種植的富硒西蘭花，取花球烘干后粉碎作為待測(cè)樣品；
壓片糖果樣品a為恩施德源健康科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品富硒苦瓜雪蓮果精華片。
固體飲料b為恩施德源健康科技發(fā)展有限公司產(chǎn)品富硒復(fù)合益生元飲料。
根據(jù)實(shí)施例一、實(shí)施例二、實(shí)施例三實(shí)驗(yàn)結(jié)果，證明此方法簡(jiǎn)單便捷、回收率良好，方法穩(wěn)定性高。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。