本發(fā)明涉及一種高效液相色譜制備方法，具體是一種辛癸酸甘油酯主要化學(xué)成分的高效液相色譜分離制備方法，即采用等度洗脫方式，使用紫外檢測(cè)器，將辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分有效分離并收集的方法。

背景技術(shù)：

辛癸酸甘油酯是國標(biāo)gb2760許可使用的食品添加劑，在食品工業(yè)中被廣泛用作乳化劑，2012年《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑辛癸酸甘油酯（gb28302-2012）》也對(duì)辛癸酸甘油酯感官要求和理化指標(biāo)進(jìn)行了規(guī)定。國標(biāo)gb28302-2012中給出了辛癸酸甘油酯的基本化學(xué)結(jié)構(gòu)信息。然而，辛癸酸甘油酯是一種由多種成分組成的混合物，對(duì)其化學(xué)組成尚不完全清楚，相關(guān)成分檢測(cè)方法的報(bào)道也不多見。辛癸酸甘油酯屬于中鏈甘油三酯（medium-chaintriglycerides,mct），一般認(rèn)為是包含飽和辛酸甘油三酯、飽和癸酸甘油三酯、飽和單辛酸二癸酸甘油三酯和飽和二辛酸單癸酸甘油三酯的混合物^[1]。

美國食品藥品管理局（fda）在1994年宣布辛癸酸甘油酯為“一般公認(rèn)安全”（gras）的物質(zhì)。但如果大量辛癸酸甘油酯被攝入人體，會(huì)導(dǎo)致辛酸累積在血液中，從而導(dǎo)致辛酸進(jìn)入腦髓造成人體產(chǎn)生神經(jīng)衰弱^[1,2]。一般一次性攝入限量為25g-30g，如果一次性大于100g時(shí)，由于其在人體內(nèi)消化比較快，導(dǎo)致小腸管腔浸透壓較高，可能引起腸胃不適癥狀。

雖然關(guān)于脂肪酸甘油酸酯的研究工作國內(nèi)外已有一些報(bào)道^[3-5]，但是對(duì)于辛癸酸甘油酯的分離制備方法卻鮮有報(bào)道。在已有的研究中，一般對(duì)于甘油酯類難揮發(fā)物質(zhì)通常以高壓液相色譜（hplc）或衍生化后經(jīng)氣相色譜（gc）測(cè)定^[6,7]。

中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所的黃家璧小組報(bào)道過一篇使用高效液相色譜分析甘油酯的文章^[8]，使用k-1鍵合型ods，12cm×φ5mm柱，示差檢測(cè)器分析了脂肪酸甘油酯，并且使用質(zhì)譜測(cè)定其特征離子峰和分子離子峰。結(jié)果顯示，在甘油三酯樣品中，辛酸和癸酸混合酯化除生成甘油三正辛酸酯和甘油三正癸酸酯外，還有其它成分，經(jīng)質(zhì)譜分析推測(cè)為甘油1,2-和/或1,3-二正辛酸-正癸酸酯以及甘油1,2-和/或1,3-二正癸酸-正辛酸酯。

浙江大學(xué)的鄒建凱小組^[9]將0.1g商品辛癸酸甘油酯以10ml正己烷溶解，使用hp6890p5973gc-ms聯(lián)用儀進(jìn)行分析測(cè)定。作者根據(jù)氣相色譜質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析推測(cè)，商品辛癸酸甘油酯中主要含有三辛酸甘油酯、二辛酸單癸酸酯和單辛酸二癸酸甘油酯，其相對(duì)含量分別為20.53%，44.51%，20.74%（占峰面積）。

浙江皇馬化工集團(tuán)有限公司的萬慶梅等人公開了一種聚氧乙烯單辛癸酸甘油酯的制備方法^[10]。以甘油和辛癸酸為原料經(jīng)催化提純得到單辛癸酸酯，再與環(huán)氧乙烷經(jīng)縮合反應(yīng)，最終得到聚氧乙烯單辛癸酸甘油酯。

綜上所述，目前雖然針對(duì)甘油酸酯已有一些研究工作，但以往的報(bào)道多關(guān)注于辛癸酸甘油酯的分析，針對(duì)辛癸酸甘油酯化學(xué)成分的分離制備方法仍無報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況而提供一種高效分離制備辛癸酸甘油酯，從而得到高純度的辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分的方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

一種辛癸酸甘油酯主要化學(xué)成分的高效液相色譜分離制備方法，具體步驟如下：

（1）取辛癸酸甘油酯樣品，用有機(jī)溶劑溶解辛癸酸甘油酯樣品，配制成辛癸酸甘油酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%~80%的溶液；

（2）設(shè)置液相色譜儀的流動(dòng)相為乙腈或甲醇，設(shè)置液相色譜儀的洗脫方式為等度洗脫；

（3）設(shè)置液相色譜儀的流動(dòng)相流速、紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長和參比波長、液相色譜儀色譜柱溫度；

（4）設(shè)置安捷倫1200餾分收集器，以出峰時(shí)間或色譜峰斜率加閾值為基準(zhǔn)收集辛癸酸甘油酯中各化學(xué)成分；

（5）取步驟（1）的樣品5~200μl注入經(jīng)步驟（2）（3）（4）設(shè)置的液相色譜儀，完成辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分的分離制備。

所述步驟（1）的有機(jī)溶劑為脂肪醇和腈類化合物。優(yōu)選乙腈、甲醇或乙醇。

液相色譜儀采用安捷倫zorbaxrx-c8色譜柱，色譜柱的規(guī)格為長度250mm、內(nèi)徑4.6mm、粒度5μm。液相色譜儀的流動(dòng)相流速0.5~3ml/min，檢測(cè)波長為210nm~230nm、參比波長233nm~240nm，液相色譜儀色譜柱溫度20^oc~40^oc。

本發(fā)明使用安捷倫zorbaxrx-c8色譜柱，1200餾分收集器，紫外檢測(cè)器，首次實(shí)現(xiàn)了對(duì)辛癸酸甘油酯的各主要化學(xué)成分的高效分離制備，對(duì)進(jìn)一步了解辛癸酸甘油酯的各方面性質(zhì)打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)在于：使用合適的檢測(cè)波長和參比波長，首次實(shí)現(xiàn)了使用紫外檢測(cè)器對(duì)甘油酯類化合物的檢測(cè)；首次實(shí)現(xiàn)了利用液相色譜對(duì)辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分的高效分離制備。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：使用等度洗脫的方式，一次分離制備就可以得到高純度的辛癸酸甘油酯的各化學(xué)成分；使用餾分收集器實(shí)現(xiàn)自動(dòng)收集，整個(gè)進(jìn)樣、分離、收集過程自動(dòng)化程度高易于操作，具有進(jìn)一步產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的應(yīng)用價(jià)值；整個(gè)分離工藝穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，環(huán)保、分離總收率高，為更大型的制備液相色譜分離辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分收集到充分的數(shù)據(jù)。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的流程圖；

圖2為實(shí)施例1的高效液相色譜圖；

圖3為實(shí)施例2的高效液相色譜圖；

圖4為實(shí)施例3的高效液相色譜圖；

圖5為實(shí)施例4的高效液相色譜圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明以下結(jié)合實(shí)施例做進(jìn)一步描述：

實(shí)施例1

采用安捷倫1200高效液相色譜儀、安捷倫zorbaxrx-c8色譜柱，色譜柱的規(guī)格為長度250mm、內(nèi)徑4.6mm、粒度5μm。

一種辛癸酸甘油酯主要化學(xué)成分的高效液相色譜分離制備方法，包括以下步驟：

（1）取10g辛癸酸甘油酯樣品，置于50ml燒杯中，加入乙腈震蕩搖勻，配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%的辛癸酸甘油酯的乙腈溶液。

（2）設(shè)置液相色譜儀的流動(dòng)相為乙腈；液相色譜儀的流動(dòng)相流速2ml/min；液相色譜儀的檢測(cè)波長220.4nm，參比波長237.2nm；液相色譜儀的柱溫箱25^oc。

（3）取步驟（1）的溶液50μl注入經(jīng)步驟（2）設(shè)置的液相色譜儀，完成辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分的分離制備，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖2。

圖2中保留時(shí)間為11.823min、14.157min、17.562min、22.075min的色譜峰分別為三辛酸甘油酯、二辛酸一癸酸甘油酯、一辛酸二癸酸甘油酯和三癸酸甘油酯的色譜峰，餾分收集時(shí)間段分別為11.5-12.8min、13.9-15.1min、17.0-18.4min、21.5-23min。其中二辛酸一癸酸甘油酯與一辛酸二癸酸甘油酯的分離度達(dá)到11，完全符合《2010版中國藥典》分離度不小于1.5的規(guī)定，其中分離度指：相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與平均峰寬的比值。并且分離得到的各組分經(jīng)gc-ms分析后確認(rèn)純度均大于99%，表明辛癸酸甘油酯中各組分可以在同一色譜條件下達(dá)到很好的分離。

實(shí)施例2

采用安捷倫1200高效液相色譜儀、安捷倫zorbaxrx-c8色譜柱，色譜柱的規(guī)格為長度250mm、內(nèi)徑4.6mm、粒度5μm。

一種辛癸酸甘油酯主要化學(xué)成分的高效液相色譜分離制備方法，包括以下步驟：

（1）取10g辛癸酸甘油酯樣品，置于50ml燒杯中，加入乙腈震蕩搖勻，配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%的辛癸酸甘油酯的乙腈溶液。

（2）設(shè)置液相色譜儀的流動(dòng)相為乙腈；液相色譜儀的流動(dòng)相流速1ml/min；液相色譜儀的檢測(cè)波長220.4nm，參比波長237.2nm；液相色譜儀的柱溫箱25^oc。

（3）取步驟（1）的溶液50μl注入經(jīng)步驟（2）設(shè)置的液相色譜儀，完成辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分的分離，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖3。

圖3中保留時(shí)間為23.705min、28.374min、35.208min、44.294min的色譜峰分別為三辛酸甘油酯、二辛酸一癸酸甘油酯、一辛酸二癸酸甘油酯和三癸酸甘油酯的色譜峰，餾分收集時(shí)間段分別為23.0-24.0min、28.0-30.0min、34.3-37.3min。其中二辛酸一癸酸甘油酯與一辛酸二癸酸甘油酯的分離度達(dá)到16，完全符合《2010版中國藥典》分離度不小于1.5的規(guī)定。并且分離得到的各組分純度均大于99%，表明辛癸酸甘油酯中各組分可以在同一色譜條件下達(dá)到很好的分離。

實(shí)施例3

采用安捷倫1200高效液相色譜儀、安捷倫zorbaxrx-c8色譜柱，色譜柱的規(guī)格為長度250mm、內(nèi)徑4.6mm、粒度5μm。

一種辛癸酸甘油酯主要化學(xué)成分的高效液相色譜分離制備方法，包括以下步驟：

（1）取10g辛癸酸甘油酯樣品，置于50ml燒杯中，加入乙醇震蕩搖勻，配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%的辛癸酸甘油酯的乙醇溶液。

（2）設(shè)置液相色譜儀的流動(dòng)相為乙腈；液相色譜儀的流動(dòng)相流速2ml/min；液相色譜儀的檢測(cè)波長220.4nm，參比波長237.2nm；液相色譜儀的柱溫箱25^oc。

（3）取步驟（1）的溶液50μl注入經(jīng)步驟（2）設(shè)置的液相色譜儀，完成辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分的分離，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖4。

圖4中保留時(shí)間為11.792min、14.094min、17.422min、21.876min的色譜峰分別為三辛酸甘油酯、二辛酸一癸酸甘油酯、一辛酸二癸酸甘油酯和三癸酸甘油酯的色譜峰，餾分收集時(shí)間段分別為11.5-12.6min、13.9-14.0min、17.0-18.3min、21.4-22.8min。其中二辛酸一癸酸甘油酯與一辛酸二癸酸甘油酯的分離度達(dá)到12，完全符合《2010版中國藥典》分離度不小于1.5的規(guī)定。并且分離得到的各組分純度均大于99%，表明辛癸酸甘油酯中各組分可以在同一色譜條件下達(dá)到很好的分離。

實(shí)施例4

采用安捷倫1200高效液相色譜儀、安捷倫zorbaxrx-c8色譜柱，色譜柱的規(guī)格為長度250mm、內(nèi)徑4.6mm、粒度5μm。

一種辛癸酸甘油酯主要化學(xué)成分的高效液相色譜分離制備方法，包括以下步驟：

（1）取10g辛癸酸甘油酯樣品，置于50ml燒杯中，加入甲醇震蕩搖勻，配成質(zhì)量分?jǐn)?shù)75%的辛癸酸甘油酯的乙醇溶液。

（2）設(shè)置液相色譜儀的流動(dòng)相為甲醇；液相色譜儀的流動(dòng)相流速1ml/min；液相色譜儀的檢測(cè)波長220.4nm，參比波長237.2nm；液相色譜儀的柱溫箱25^oc。

（3）取步驟（1）的溶液20μl注入經(jīng)步驟（2）設(shè)置的液相色譜儀，完成辛癸酸甘油酯中主要化學(xué)成分的分離，記錄色譜圖，結(jié)果見附圖5。

圖5中保留時(shí)間為17.485min、19.544min、21.816min、24.077min的色譜峰分別為三辛酸甘油酯、二辛酸一癸酸甘油酯、一辛酸二癸酸甘油酯和三癸酸甘油酯的色譜峰，餾分收集時(shí)間段分別為16.8-18.1min、18.7-20.3min、20.8-22.6min、23.5-24.6min。其中二辛酸一癸酸甘油酯與一辛酸二癸酸甘油酯的分離度達(dá)到3.5，完全符合《2010版中國藥典》分離度不小于1.5的規(guī)定。并且分離得到的各組分純度均大于99%，表明辛癸酸甘油酯中各組分可以在同一色譜條件下達(dá)到很好的分離。

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