本發(fā)明屬于標(biāo)本處理技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種病理標(biāo)本的處理方法。

背景技術(shù)：

活體組織病理診斷是外科的第一診斷，是金標(biāo)準(zhǔn)。醫(yī)生可以根據(jù)標(biāo)本的檢測結(jié)果作出正確的診斷，制定疾病下一步的治療計(jì)劃。病理報(bào)告的準(zhǔn)確性在相當(dāng)程度上對疾病的診斷和治療起決定性作用。而正確處理病理標(biāo)本不僅能給病理診斷及臨床診斷提供有效的保證，而且也維護(hù)了患者身心，杜絕了因不當(dāng)標(biāo)本處理帶來的糾紛。現(xiàn)有調(diào)查顯示，手術(shù)室現(xiàn)行的標(biāo)本處理方法不能有效防止護(hù)理差錯。

病理標(biāo)本處理中最關(guān)鍵的步驟就是病理標(biāo)本的固定和保存。病理樣本離體后，由于微環(huán)境的變化將發(fā)生自溶和(或)腐敗，使其結(jié)構(gòu)破壞，同時在微觀上，細(xì)胞退化、自溶。處理樣本的目的，就是用各種方法使病理標(biāo)本盡量保持其離體前狀態(tài)。更為關(guān)鍵的是，由于需要顯微鏡觀察，因此，病理組織學(xué)不僅要求離體樣本在宏觀方面(如色澤、體積、軟硬度等)盡量接近離體前狀態(tài)，更要求在細(xì)胞水平的微觀方面要盡量接近活體狀態(tài)。目前，病理標(biāo)本最為普遍的處理劑是甲醛溶液和乙醇溶液，然而上述兩者均存在明顯的缺陷。甲醛易使標(biāo)本機(jī)體發(fā)硬、變形、褪色、不保鮮；甲醛溶液中因含有甲醇易聚合產(chǎn)生沉淀，需經(jīng)常更換；甲醇具有強(qiáng)烈的刺激性氣味，其不僅污染環(huán)境，還會不同程度地傷害操作者的眼睛和呼吸系統(tǒng)，嚴(yán)重危害人體健康，這對一線醫(yī)學(xué)工作者來說是非常有害的。而含乙醇的保存液長期使用后也會使樣本機(jī)體發(fā)硬，其褪色現(xiàn)象比甲醛更明顯；并且這兩種溶液保存的樣本存在不易造型，運(yùn)輸麻煩的缺陷。

因此，探索低毒、低刺激且效果更好的病理標(biāo)本處理方法具有重要的學(xué)術(shù)意義和現(xiàn)實(shí)意義。

公開號為105248410A的專利涉及一種生物標(biāo)本的保存方法，所述方法為將新鮮的待保存生物樣本用甲醛溶液浸泡固定10~36h后，使用濃度不低于12%的聚丙烯酰胺凝膠封存；該發(fā)明提供的生物標(biāo)本保存方法先使用甲醛溶液對待保存的生物預(yù)處理固定一段時間后，再將處理后的生物使用特定濃度的聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行封存，封存后的標(biāo)本能夠長期保色保鮮，兩年之內(nèi)顏色和形態(tài)保持不變，并且本發(fā)明使用的聚丙烯酰胺凝膠為固態(tài)，具備無毒，易造型，運(yùn)輸方便的特點(diǎn)。公開號為105519520A的專利公開了一種標(biāo)本保存液，其組分如下：聚二甲基二烯丙基氯化銨35g，山梨酸鉀40g，納米銀8g，檸檬酸30g，甘露醇6g，丙三醇40ml，戊二醛1g，無水乙醇50ml，D-山梨醇3g，香精1g，海藻糖10g，硫酸鎂5g，純凈水補(bǔ)滿1000mL，利用該保存液處理標(biāo)本的方法為：先將標(biāo)本用甲醛固定好，然后浸泡在具有該標(biāo)本保存液的帶蓋標(biāo)本瓶中。該標(biāo)本保存液可為組織標(biāo)本保存液長期保存組織標(biāo)本，標(biāo)本的軟硬度和韌性保持良好，標(biāo)本保持原始形狀和顏色，不變質(zhì)腐臭，保存液長期使用不需更換，溶液清澈，沉淀少。上述標(biāo)本的處理方法中仍采用甲醛進(jìn)行即時固定，而且時間較長，影響處理效率，且安全性依然沒有得到有效改善。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種病理標(biāo)本的處理方法，安全系數(shù)高，固定效果理想，形態(tài)保持良好，提高病理確診效率。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種病理標(biāo)本的處理方法，是將取材后的病理組織依次經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色和封固獲得病理標(biāo)本，其中：

所述固定是采用固定液將病理組織進(jìn)行固定，固定時間為4~15小時，所述固定液的組成為：蒼術(shù)醇12~15g，乙氧基化乙炔二醇5~10ml，綠原酸10~20g，聚乙烯吡咯烷酮30~70g，氯化鈉30~40g，乙酸乙酯5~10ml，純水補(bǔ)至1000ml；所述脫水是采用體積濃度依次為50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及無水乙醇作為脫水劑，逐步置換出所述固定后的病理組織中的水分；所述透明是將所述脫水后的病理組織依次浸入體積濃度為50%二甲苯和100%二甲苯溶液中進(jìn)行透明處理；所述包埋是采用透明樹脂對浸蠟后的病理組織進(jìn)行迅速包埋；所述封固是將染色后的病理組織采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的混合物進(jìn)行封固，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的質(zhì)量比為1：0.1~0.5：0.1~0.3。

優(yōu)選地，所述固定液的組成為：蒼術(shù)醇13g，乙氧基化乙炔二醇7ml，綠原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，乙酸乙酯6ml，純水補(bǔ)至1000ml。

優(yōu)選地，所述固定液的組成為：蒼術(shù)醇14g，乙氧基化乙炔二醇8ml，綠原酸15g，聚乙烯吡咯烷酮50g，氯化鈉35g，乙酸乙酯8ml，純水補(bǔ)至1000ml。

優(yōu)選地，所述固定時間為5~8小時。

優(yōu)選地，所述透明樹脂為脲醛樹脂、環(huán)氧乙烯基樹脂、二甲基丙烯酸酯中的一種或兩種以上的組合。

優(yōu)選地，所述透明樹脂為脲醛樹脂與二甲基丙烯酸酯的組合物，所述脲醛樹脂與二甲基丙烯酸酯的質(zhì)量比為4~5：1。

優(yōu)選地，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的質(zhì)量比為1：0.3：0.2。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下：

1）本發(fā)明病理標(biāo)本的處理方法是在現(xiàn)有病理標(biāo)本的制作方法基礎(chǔ)上進(jìn)行的改進(jìn)，以傳統(tǒng)病理標(biāo)本的制作理念為引導(dǎo)，對病理組織在固定、脫水及其透明等步驟中存在的危險性、污染性及其不可控因素較多等問題進(jìn)行了進(jìn)一步的探索和研究，對各步驟所采用的試劑、具體方法及其相關(guān)性等進(jìn)行了統(tǒng)籌性的改進(jìn)。本發(fā)明病理組織的固定步驟采用全新的固定液，其中：蒼術(shù)醇：為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea (Thunb.) DC.的根莖提取物，可通過市售購買獲得，具有特有的中藥氣味，在本發(fā)明固定液中起到抑菌、消毒作用；乙氧基化乙炔二醇：為一種非離子型潤濕劑，具有超強(qiáng)的潤濕作用，能夠促進(jìn)蒼術(shù)醇、綠原酸等成分快速地流動并潤濕病理組織，進(jìn)而促進(jìn)固定作用的實(shí)現(xiàn)；綠原酸：具有較廣泛的抗菌作用，醫(yī)學(xué)上具有抗菌、抗病毒、抗氧化、消炎等作用，通過對加入量的控制，能夠有效避免其致敏作用，使其發(fā)揮抗菌、抗氧化等作用；聚乙烯吡咯烷酮：具有親水性、易流動的白色或近乎白色的粉末，具有膠體保護(hù)作用、成膜性、粘結(jié)性、吸濕性、增溶或凝聚作用，與乙氧基化乙炔二醇等成分配合快速在病理組織的表面及內(nèi)部成膜，凝聚，輔助強(qiáng)化固定效果；氯化鈉：具有調(diào)節(jié)固定液平衡及脫水殺菌的作用；乙酸乙酯：在乙氧基化乙炔二醇及聚乙烯吡咯烷酮等成分的固定作用下，使固定液具有持久悅?cè)说臍馕叮谏w不良?xì)馕?。固定液中各組分組配合理，效果明顯，具有防止組織和細(xì)胞自溶、滲透、殺菌、防腐等作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該固定液能夠完全替代甲醛溶液，而且性質(zhì)穩(wěn)定，無毒副作用。病理標(biāo)本經(jīng)固定處理后軟硬度適中，無明顯收縮發(fā)硬現(xiàn)象，韌性良好，無明顯變形和褪色；固定過程中，固定液無混濁或沉淀現(xiàn)象發(fā)生。采用本發(fā)明固定液進(jìn)行病理組織的固定不但可以避免被動吸入甲醛的危害，還可避免甲醛保存液易揮發(fā)、聚合沉淀多需定期更新和補(bǔ)充的麻煩和費(fèi)用。固定時間根據(jù)病理組織的不同，通常為4~15小時，優(yōu)選為4~8小時。此外，本發(fā)明固定液在室溫條件下，活性持久，不易發(fā)霉，能夠作為病理標(biāo)本的保存液長期使用。

2）本發(fā)明采用50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及無水乙醇由低濃度至高濃度對固定處理后的病理組織進(jìn)行梯度脫水，增設(shè)脫水梯度，減小梯度之間的濃度差，使脫水力度柔和而徹底，可以有效防止脫水過程中組織的變形或變性。本發(fā)明透明過程仍選用二甲苯作為透明劑，與傳統(tǒng)不同的是，采用兩梯度設(shè)置，先用體積濃度為50%二甲苯透明處理1~4小時，再用100二甲苯透明處理0.5~2小時，這樣處理能給予病理組織一個緩沖過渡階段，容易控制透明程度，而且不易導(dǎo)致組織變脆。

3）本發(fā)明浸蠟、包埋、切片及染色與常規(guī)操作相同，處理時間上較傳統(tǒng)處理更短。本發(fā)明封固步驟采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的混合物作為封固劑，并且經(jīng)實(shí)踐發(fā)現(xiàn)當(dāng)聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的質(zhì)量比為1：0.1~0.5：0.1~0.3時封固效果更突出，封固快速、完整，無褪色、變形現(xiàn)象，還具有抗菌效果。而且試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)聚丙烯酰胺含量較高時，例如：聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的質(zhì)量比為1：0.05：0.05時，封固花費(fèi)的時間較長，保色不牢固。

綜上，本發(fā)明在現(xiàn)有病理組織處理方法的基礎(chǔ)上，對固定、脫水、透明及其封固步驟等進(jìn)行改進(jìn)，使病理組織的處理過程中所用的試劑毒性明顯減少，固定效果良好，脫水及透明程度更加易于掌控，使得組織不易變形、變脆、發(fā)硬，而且封固完整，著色顯著。

具體實(shí)施方式

為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步清楚闡述本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的保護(hù)內(nèi)容不僅僅局限于下面的實(shí)施例。在下文的描述中，給出了大量具體的細(xì)節(jié)以便提供對本發(fā)明更為徹底的理解。

本發(fā)明所涉及的病理組織是指有病變的組織或臟器，并不限定于某一特定組織，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)普遍知識能夠常規(guī)選擇將某一病理組織采用本發(fā)明方法進(jìn)行處理，并獲得預(yù)期的效果。

實(shí)施例1~實(shí)施例5：以取自人體肝臟的病理組織為例

一種病理標(biāo)本的處理方法，是將取材后的病理組織依次經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色和封固獲得病理標(biāo)本，其中：

固定：采用固定液將病理組織進(jìn)行固定，固定時間為6小時，所述固定液的組成如表1所示；

脫水：采用體積濃度依次為50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及無水乙醇作為脫水劑，逐步置換出所述固定后的病理組織中的水分，上述濃度的脫水處理時間均為1~3小時；

透明：將所述脫水后的病理組織依次浸入體積濃度為50%二甲苯和100%二甲苯溶液中進(jìn)行透明處理，其中50%二甲苯溶液透明處理時間為2~4小時，采用100%二甲苯溶液處理至觀察到病理組織透明為止；

浸蠟：將所述透明處理后的病理組織浸入熔溶的石蠟中0.5~4小時；

包埋：采用透明樹脂對浸蠟后的病理組織進(jìn)行迅速包埋，所述透明樹脂為脲醛樹脂與二甲基丙烯酸酯的組合物，所述脲醛樹脂與二甲基丙烯酸酯的質(zhì)量比為4：1；

切片：采用切片刀將包埋后的病理組織切成連續(xù)的、厚薄均勻的蠟片，選取平整光滑的蠟片水浴展開，吸去表面水分，及時烘烤；

染色：將烘烤處理后的病理組織進(jìn)行HE染色，使染色鮮艷、紅藍(lán)分明；

封固：將染色后的病理組織采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的混合物進(jìn)行封固，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的質(zhì)量比為1：0.3：0.2。

表1固定液的組成

實(shí)施例6~實(shí)施例11：以取自人體的肺病理組織為例

一種病理標(biāo)本的處理方法，是將取材后的病理組織依次經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色和封固獲得病理標(biāo)本，其中：

固定：采用固定液將病理組織進(jìn)行固定，固定時間為8小時，所述固定液的組成為蒼術(shù)醇13g，乙氧基化乙炔二醇7ml，綠原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，乙酸乙酯6ml，純水補(bǔ)至1000ml；

脫水：采用體積濃度依次為50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及無水乙醇作為脫水劑，逐步置換出所述固定后的病理組織中的水分，上述濃度的脫水處理時間均保持2~4小時；

透明：將所述脫水后的病理組織依次浸入體積濃度為50%二甲苯和100%二甲苯溶液中進(jìn)行透明處理，其中50%二甲苯溶液透明處理時間為2~4小時，采用100%二甲苯溶液處理至觀察到病理組織透明為止；

浸蠟：將所述透明處理后的病理組織浸入熔溶的石蠟中0.5~4小時；

包埋：采用透明樹脂對浸蠟后的病理組織進(jìn)行迅速包埋，所述透明樹脂的組成如表2所示；

切片：采用切片刀將包埋后的病理組織切成連續(xù)的、厚薄均勻的蠟片，選取平整光滑的蠟片水浴展開，吸去表面水分，及時烘烤；

染色：將烘烤處理后的病理組織進(jìn)行HE染色，使染色鮮艷、紅藍(lán)分明；

封固：將染色后的病理組織采用聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的混合物進(jìn)行封固，所述聚丙烯酰胺、聚乙烯吡咯烷酮與二甲苯的質(zhì)量比為1：0.3：0.2。

表2透明樹脂的組成

實(shí)施例12~實(shí)施例17：以取自人體的腦病理組織為例

一種病理標(biāo)本的處理方法，是將取材后的病理組織依次經(jīng)固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色和封固獲得病理標(biāo)本，其中：

固定：采用固定液將病理組織進(jìn)行固定，固定時間為10小時，所述固定液的組成為蒼術(shù)醇13g，乙氧基化乙炔二醇7ml，綠原酸13g，聚乙烯吡咯烷酮40g，氯化鈉32g，乙酸乙酯6ml，純水補(bǔ)至1000ml；

脫水：采用體積濃度依次為50%乙醇、60%乙醇、75%乙醇以及無水乙醇作為脫水劑，逐步置換出所述固定后的病理組織中的水分，上述濃度的脫水處理時間均保持3小時；

透明：將所述脫水后的病理組織依次浸入體積濃度為50%二甲苯和100%二甲苯溶液中進(jìn)行透明處理，其中50%二甲苯溶液透明處理時間為2~4小時，采用100%二甲苯溶液處理至觀察到病理組織透明為止；

浸蠟：將所述透明處理后的病理組織浸入熔溶的石蠟中0.5~4小時；

包埋：采用透明樹脂對浸蠟后的病理組織進(jìn)行迅速包埋，所述透明樹脂為環(huán)氧乙烯基樹脂與二甲基丙烯酸酯的組合物，所述環(huán)氧乙烯基樹脂與二甲基丙烯酸酯的質(zhì)量比為4：1；

切片：采用切片刀將包埋后的病理組織切成連續(xù)的、厚薄均勻的蠟片，選取平整光滑的蠟片水浴展開，吸去表面水分，及時烘烤；

染色：將烘烤處理后的病理組織進(jìn)行HE染色，使染色鮮艷、紅藍(lán)分明；

封固：將染色后的病理組織采用表3所示的封固劑進(jìn)行封固。

表3封固劑的組成

對比例1

該對比例1所描述的病理標(biāo)本的處理方法，與實(shí)施例2所不同的是：

固定步驟：采用體積濃度為20%的甲醛溶液進(jìn)行固定，固定時間為10小時，其余步驟同實(shí)施例2。

對比例2~對比例4

該對比例2~對比例4所描述的病理標(biāo)本的處理方法，與實(shí)施例2所不同的是：

固定步驟：采用如表4所示的固定液進(jìn)行固定，固定時間為6小時，其余步驟同實(shí)施例2。

表4固定液的組成

對比例5

該對比例5所描述的病理標(biāo)本的處理方法，與實(shí)施例2所不同的是：

固定步驟：采用如下固定液進(jìn)行固定，固定液的組成為：聚二甲基二烯丙基氯化銨35g，山梨酸鉀40g，納米銀8g，檸檬酸30g，甘露醇6g，丙三醇40ml，戊二醛1g，無水乙醇50ml，D-山梨醇3g，香精1g，海藻糖10g，硫酸鎂5g，純凈水補(bǔ)滿1000mL，固定時間為6小時，其余步驟同實(shí)施例2。

對比例6

該對比例6所描述的病理標(biāo)本的處理方法，與實(shí)施例2所不同的是：

透明步驟：將所述脫水后的病理組織浸入體積濃度為100%二甲苯溶液中進(jìn)行透明處理，至觀察到病理組織透明為止；其余步驟同實(shí)施例2。

為充分說明本發(fā)明對于現(xiàn)有技術(shù)的貢獻(xiàn)，進(jìn)行如下效果比對：

實(shí)驗(yàn)方案：臨床采集乳腺癌組織樣本130份，隨機(jī)分成13組，每組10份，分別采用實(shí)施例2、6、7、11、12、13、14及對比例1~6的處理方法制片，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)、著色及其完整性。

結(jié)果評價：①對病理標(biāo)本處理過程中所產(chǎn)生的氣味、刺激性以及毒性進(jìn)行調(diào)查，由參加的醫(yī)護(hù)人員進(jìn)行評分；②由病理專家對所得病理標(biāo)本的形態(tài)、著色、完整性、判讀準(zhǔn)確度進(jìn)行評分；上述各項(xiàng)目的評分區(qū)間為1分至5分，按照各指標(biāo)的強(qiáng)弱程度或優(yōu)良級別進(jìn)行打分，分?jǐn)?shù)越高代表該指標(biāo)越優(yōu)，分?jǐn)?shù)越低則表明該指標(biāo)越差，1分、2分、3分、4分、5分依次代表差、一般、較好、良好、優(yōu)異。上述指標(biāo)的評分結(jié)果見表5所示。

表5指標(biāo)評價結(jié)果

由表5可以看出，采用本發(fā)明實(shí)施例2制備病理標(biāo)本，氣味、刺激性以及毒性等均評價良好，而且所得病理標(biāo)本形態(tài)保存良好，未發(fā)生明顯的膨脹、固縮等變化，有利于判讀準(zhǔn)確度的提高。實(shí)施例6及實(shí)施例7分別采用脲醛樹脂、環(huán)氧乙烯基樹脂作為透明樹脂包埋劑，較實(shí)施例2的組合使用來說，在形態(tài)及著色的保持上有所下降。實(shí)施例11采用環(huán)氧乙烯基樹脂與二甲基丙烯酸酯作為透明樹脂包埋劑，較實(shí)施例6、7來說稍有改善，但是仍然劣于實(shí)施例2。實(shí)施例12~14采用不同的封固劑進(jìn)行封固處理，在病理標(biāo)本的形態(tài)、著色、完整性等方面與實(shí)施例2相比均存在不同程度的差異。

對比例1采用甲醛作為固定液，盡管病理標(biāo)本效果較好，但是氣味、刺激性及其毒性方面均較差。對比例2~4改變固定液的組成，發(fā)現(xiàn)制作的病理標(biāo)本均不利于判讀準(zhǔn)確率的提高。而對比例5采用與本發(fā)明完全不同的組配固定液進(jìn)行固定處理，發(fā)現(xiàn)依然與本發(fā)明實(shí)施例2存在明顯的區(qū)別。對比例6在透明處理時直接采用100%二甲苯進(jìn)行透明處理，也不利于判讀準(zhǔn)確率的提高。

綜合上述分析，本發(fā)明病理標(biāo)本的處理方法用于處理病理組織，有利于保持病理組織的原狀、保持其完整性以及著色的牢固性等，總而提高病理組織判讀的準(zhǔn)確率，而且將本發(fā)明所得病理標(biāo)本儲存6個月后進(jìn)行顯微觀察發(fā)現(xiàn)變化不明顯，無肉眼可見的霉點(diǎn)、腐點(diǎn)、膨脹或固縮等現(xiàn)象。本發(fā)明病理組織的處理方法各步驟相互協(xié)同，對病理標(biāo)本的安全、快速、準(zhǔn)確制作具有積極的效果。

臨床應(yīng)用

取20個病理標(biāo)本，其中：宮頸活檢4個；胃鏡活檢7個，腸鏡組織活檢5個，乳腺纖維腺瘤3個，子宮腺肌病 1 個。病理標(biāo)本的處理方法按照實(shí)施例2進(jìn)行。

結(jié)果表明：上述20個病理標(biāo)本制片效果理想，病理組織保持完整，無殘片等現(xiàn)象，而且鏡下觀察清晰，均經(jīng)病理醫(yī)師閱片，確定符合診斷要求。

最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員對本發(fā)明的技術(shù)方案所做的其他修改或者等同替換，只要不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。