本發(fā)明屬于SERS檢測技術領域，具體涉及一種基于SERS位移和強度相結合的異質體分辨糖蛋白檢測芯片。

背景技術：

許多疾病經(jīng)常與糖蛋白的變異有關(如高爾基體糖蛋白73、血小板膜活化糖蛋白、血清酸性糖蛋白等)，使得檢測糖蛋白變得至關重要。以肝癌標記物甲胎蛋白(AFP)為例，AFP是一種胚胎蛋白，也是一種糖蛋白，在胚胎1-2個月時主要由卵黃囊和肝臟合成，之后主要由肝臟合成。3月齡時血清AFP含量達到最高峰，約為3000ng/mL，隨著分娩的臨近，血清中AFP水平呈直線下降。出生后1-2年降至正常成人水平。在胚胎時期，AFP是血清中的正常成分，可能起著與血清白蛋白相似的作用。在成年人階段因其合成通常受到抑制故血清中含量甚微，一般不超過20ng/mL，絕大多數(shù)低于5ng/mL。若成人血清AFP含量升高，則往往是疾病的表現(xiàn)。常見于畸胎瘤及各種原因引起的急慢性肝炎、肝硬化、尤其是肝癌，偶見于其他腫瘤如胃腸道腫瘤、肺癌、結腸癌、胰腺癌、膽囊癌。

鑒于AFP與肝癌的密切關系，許多學者對AFP的應用進行了多方面的研究，其重點是AFP在肝癌的早期診斷、藥物療效觀察、手術是否徹底、有無遠處移、患者的預后判斷以及基因治療等方面的應用。AFP發(fā)現(xiàn)至今的三十多年里，其檢測方法不斷得到改進，特異性和靈敏度不斷提高，對肝癌的診斷日趨精確。除了目前常用的酶聯(lián)免疫分析法和放射免疫分析法外，檢測血清AFP曾經(jīng)使用過的方法有瓊脂免疫擴散、免疫對流電泳、反向間接血凝、放射免疫火箭電泳自顯影等方法，這些方法要么靈敏度低，要么方法復雜，現(xiàn)已淘汰。

研究工作已經(jīng)證實肝部病變產(chǎn)生的AFP與正常的AFP在糖基鏈上存在不同，通過AFP與小豆凝集素的作用強弱，可以將AFP分成三類：AFP-L1、AFP-L2，AFP-L3。人們研究發(fā)現(xiàn)，AFP-L1主要存在于胚胎階段的細胞當中，屬于正常人的甲胎蛋白；AFP-L2來自于懷孕的母體分泌的甲胎蛋白；而AFP-L3是肝癌細胞特異性產(chǎn)生的蛋白，如果檢測AFP總濃度，這個濃度既包含需要檢測的AFP-L3也包含了非特性異性的AFP-L1和AFP-L2的濃度，特異性的降低的同時，也使蛋白芯片產(chǎn)生了很嚴重的假陽性結果。在診斷學中，認為當異質體AFP-L3占AFP總量超過10％時，可以診斷為早期肝癌，隨后成為一種新的診斷指標AFP-L3％，即異質體％。因此發(fā)展一種可以讀出AFP-L3％的異質體分辨的蛋白芯片具有十分重要的意義和應用前景。

表面增強拉曼散射(SERS)是一種超靈敏的表面分析技術，借助分子在SERS活性基底的吸附可將分子本身的拉曼信號顯著增強。在一些特殊體系中，SERS的增強因子可以達到10¹⁴-10¹⁵，使單分子檢測成為可能。經(jīng)歷了30年的發(fā)展，近年來SERS已被廣泛應用在表面吸附、電化學和催化反應、生物醫(yī)學檢測等諸多領域。由于水對信號無影響，使得拉曼光譜受到生物科學工作者的青睞。與其他超靈敏檢測技術相比，拉曼光譜有其自身的優(yōu)點：1)極高的檢測靈敏度：可以實現(xiàn)單分子檢測，對拉曼信號較弱的蛋白質檢測提供了一種非常好的方法。2)極高的選擇性：表面選擇定則和共振增強的選擇性使得SERS可以在極其復雜的體系中只增強目標分子或集團。3)微區(qū)與原位檢測：光學檢測，樣品尺寸可以小到微米級。4)無損檢測：采用的是可見光，對材料和人體都是非破壞性的。

眾所周知，蛋白芯片是通過靶分子和捕捉分子相互作用來監(jiān)測蛋白分子之間的相互作用，將拉曼技術與蛋白芯片相結合，不但可以增加拉曼檢測的靈敏度，同時也將蛋白芯片的靈敏度大大提高。將SERS蛋白芯片賦予其他新的功能和指標也是發(fā)明的創(chuàng)新點。

技術實現(xiàn)要素：

針對上面的問題，我們首次應用抗體納米金及具有拉曼活性和良好生物相容性的銀組裝膜作為基底，設計了一個可以讀出異質體％的基于表面增強拉曼的三明治結構的蛋白芯片，這種蛋白芯片目前最具潛力的應用是肝癌的早期診斷。而且還可以應用于其他同源異質體蛋白的分辨與檢測，這種蛋白芯片可以有效排除由傳統(tǒng)免疫方法帶來的假陽性和假陰性，同時降低了芯片制作成本。

本發(fā)明的目的是提供一種新的蛋白芯片，它能夠讀出異質體％，實現(xiàn)目標蛋白總量和異質體蛋白的分別檢測。在肝癌早期診斷中，這種蛋白芯片對甲胎蛋白(AFP)的高分辨可以大大提高診斷的準確性。而且檢測讀出異質體％的定量方式首次采用了最新的定量方法(拉曼特征峰的位移)和舊的定量方法(內標和特征峰相對強度)相結合的方式。

本發(fā)明所述的蛋白芯片檢測方法包括：蛋白芯片及抗體納米金的制備；目標糖蛋白總量AFP和異質體糖蛋白AFP-L3檢測兩部分，通過目標蛋白總量和其中異質體蛋白濃度相除可以得到異質體％。

本發(fā)明所述的方法包括兩個部分：

1.蛋白芯片和抗體納米金溶液的制備

1.1蛋白芯片的制備：

1.1.1羥基化：將硅片放入質量分數(shù)95～98％的濃硫酸水溶液和質量分數(shù)25～30％的過氧化氫水溶液混合溶液中，兩種溶液的體積比7：3，直至溶液不再有氣泡出現(xiàn)為止，將硅片取出并用水清洗，然后浸泡在水溶液中；

1.1.2將上一步羥基化得到的硅片浸泡在質量百分數(shù)為1～3％的聚二烯基丙二甲基氯化銨(PDDA)水溶液30～40分鐘，取出后用水清洗，氮氣吹干；

1.1.3將上一步修飾了PDDA分子的硅片放入Meisel&Lee法制備的銀溶膠(銀離子粒徑60nm)中浸泡4～6個小時，取出后用水沖洗，氮氣吹干，得到表面組裝銀的SERS納米芯片；

1.1.4納米芯片對巰基苯甲酸-AFP抗體的修飾

表面組裝銀的SERS納米芯片的修飾包括兩部分：首先是對巰基苯甲酸-AFP抗體的修飾，然后是牛血清蛋白的封閉，目的是得到生物相容性良好的蛋白芯片，而且具有特異性結合甲胎蛋白的能力。

首先，將上一步制備好的表面組裝銀的SERS納米芯片在10^-3～10^-4M的對巰基苯甲酸(4-MBA)乙醇溶液中浸泡4～6個小時，將納米芯片取出后用酒精沖洗，氮氣吹干；然后為了加快反應，活化羧基，將氮氣吹干的納米芯片再浸泡在0.5～2mg/mL的(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽)(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)等濃度的混合水溶液中12～15小時，活化羧基；最后將活化羧基的SERS納米芯片取出后用水沖洗，氮氣吹干，再浸泡在30ng/mL的AFP(對AFP-L1、AFP-L2，AFP-L3均有免疫響應)抗體的磷酸緩沖溶液(pH＝7.4)中反應12～15小時，將SERS納米芯片取出后用磷酸緩沖溶液(pH＝7.4)沖洗，氮氣吹干。

1.1.5牛血清蛋白封閉

為防止非特異性結合，將上一步得到的SERS納米芯片浸泡在0.1mg/mL的牛血清蛋白的磷酸緩沖溶液(pH＝7.4)中1～3小時，將SERS納米芯片取出后用磷酸緩沖溶液(pH＝7.4)沖洗，氮氣吹干，得到本發(fā)明所述的蛋白芯片；

1.2抗體納米金溶液的制備

通過傳統(tǒng)的Meisel&Lee法制備20nm的金溶膠，將1mL金溶膠8000～15000轉/分鐘離心5～10分鐘后去掉上層清液，然后和100μL、1mg/mL的5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)的乙腈溶液混合，反應3～6小時后，加入20μL飽和的AFP-L3抗體的磷酸緩沖溶液，反應12～16小時，再加入100μL、0.1mg/mL的牛血清蛋白的磷酸緩沖溶液(pH＝7.4)封閉，離心去掉上層清液后用磷酸緩沖溶液(pH＝7.4)重新分散至500μL并保存于4℃冰箱中，得到抗體納米金溶液。

2.AFP總濃度和異質體蛋白濃度的檢測

2.1 AFP總濃度的檢測

分別取100μL不同濃度的AFP(如實施例1中所述的濃度值為0、1、10、100、1000ng/mL，還可以是其它的濃度數(shù)值，選取的濃度數(shù)值越多，得到的曲線越精確)水溶液于500μL離心管中，將步驟1.1.5制備好的多個蛋白芯片分別放入其中，反應12～16小時；取出蛋白芯片后用水沖凈，氮氣吹干后，放入樣品臺，分別進行拉曼檢測。經(jīng)過數(shù)據(jù)比對發(fā)現(xiàn)對巰基苯甲酸的拉曼特征峰在1075cm^-1處的位移和不同甲胎蛋白濃度的對數(shù)呈現(xiàn)的線性關系：加入AFP(0、1、10、100、1000ng/mL)后對巰基苯甲酸1075cm^-1對應的拉曼位移分別為0、0.55、1.36、1.99、3.03。利用步驟1.1.5制備的蛋白芯片通過拉曼檢測的數(shù)據(jù)，繪制甲胎蛋白濃度的對數(shù)與該濃度對應的對巰基苯甲酸的特征峰在1075cm^-1處位移的散點圖，擬合得到標準曲線如圖1所示，曲線方程為y＝0.79601x+0.52596，其中x代表AFP總濃度的對數(shù)，y代表對巰基苯甲酸在1075cm^-1處拉曼特征峰的位移。

同樣地，取100μL未知濃度的AFP水溶液于500μL離心管中，取步驟1.1.5制備好的蛋白芯片放入其中，反應12～16小時；取出的蛋白芯片用水沖凈，氮氣吹干，放入樣品臺，進行拉曼檢測。隨后該譜圖中1075cm^-1處的位移值帶入標準曲線1的線性方程中，即可得到未知AFP的濃度。最后將檢測完成AFP總濃度的蛋白芯片保存在裝有400μL的磷酸緩沖溶液的離心管中，以備下一步異質體蛋白濃度的檢測。

2.2異質體蛋白濃度的檢測

分別取100μL不同濃度的AFP-L3(如實施例1中所述的濃度值為8、50、100、400、1000ng/mL，還可以是其它的濃度數(shù)值，選取的濃度數(shù)值越多，得到的曲線越精確)水溶液于500μL離心管中，將步驟1.1.5制備好的多個蛋白芯片分別放入其中，反應12～16小時；取出蛋白芯片后用水沖凈，氮氣吹干后，重新放入裝有400μL磷酸緩沖液的離心管中，分別加入100μL抗體納米金溶液，繼續(xù)反應12～16小時。隨后將蛋白芯片取出用水沖洗，氮氣吹干，放入樣品臺，分別進行拉曼檢測。在這個體系中，因為對巰基苯甲酸在1075cm^-1處的峰強度與體系無關，而且強度穩(wěn)定不變，我們將它作為內標峰。5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)在1340cm^-1處的特征峰強度與AFP-L3的濃度成正相關，AFP-L3的濃度越大，峰強越大：加入AFP-L3(8、50、100、400、1000ng/mL)得到的拉曼譜圖中特征峰與內標峰的強度比分別為0.08、0.14、0.2、0.55、1.2。因此，繪制5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)在1340cm^-1處的特征峰強度與對巰基苯甲酸在1075cm^-1處的特征峰峰強度的比值與AFP-L3濃度的散點圖，然后進行擬合，得到的標準曲線如圖2所示。線性方程為y＝0.07501+0.00119x，其中x代表AFP-L3的濃度，y代表兩個特征峰強度的比值。

繼續(xù)步驟2.1的操作，進行異質體蛋白濃度的檢測。向檢測完未知AFP濃度的蛋白芯片的離心管中加入100μL步驟1.2制備的抗體納米金溶液，反應12～16小時，反應后取出用水沖洗，氮氣吹干，再次進行拉曼檢測，將得到的1340cm^-1處與1075cm^-1的峰強度比值帶入到標準曲線2的線性方程中，得到未知濃度的AFP-L3濃度。

通過步驟2.1、2.2得到的AFP與AFP-L3的濃度進行計算，c(AFP-L3)/c(AFP)＝AFP-L3％，得出AFP-L3％。在肝癌早期診斷中，AFP-L3％大于10％可以診斷為肝癌。

上述方法中，采用三明治納米材料作為基底進行SERS測試，SERS光譜結果結合掃描電子顯微鏡(SEM)(如圖3所示)，拉曼信號和電鏡圖像吻合，在蛋白芯片的表面附著上述方法制備的抗體納米金納米粒子。

本發(fā)明中，我們采用了兩種傳統(tǒng)納米材料作為基底，對探針分子對巰基苯甲酸和5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)進行了表面增強拉曼(SERS)檢測，改善了SERS基底的檢測的穩(wěn)定性。通過新型基底的使用，解決了通過SERS方法無法得到AFP-L3％的難題，同時得到了更多分子與基底相互作用、分子量的信息。同時也為發(fā)展SERS作為醫(yī)學診斷工具奠定基礎。

本發(fā)明中使用的儀器是共聚焦拉曼光譜儀(Horiba LabRam ARAMIS)，激發(fā)源波長為632.8nm功率為10W，掃描時間為10s。

附圖說明

圖1：蛋白芯片特征峰位移隨AFP濃度變化圖以及標準曲線，該圖表明該蛋白芯片可以在1～1000ng/mL區(qū)間內有良好的線性變化，可以用于定量檢測AFP，最低檢測限為0.1ng/mL。圖中A為不同AFP濃度對應的拉曼譜圖，B為各濃度拉曼譜圖波數(shù)在1075cm^-1附近的放大圖，C為根據(jù)AFP濃度對數(shù)和其對應的拉曼位移繪制的標準曲線。

圖2：抗體納米金溶液特征峰相對強度變化隨AFP-L3濃度變化圖以及標準曲線，表明該方法在8～1000ng/mL區(qū)間內有良好的線性響應，可以完成異質體糖蛋白的定量檢測，最低檢測限為0.5ng/mL。圖中A為不同AFP-L3濃度對應的拉曼譜圖，B為根據(jù)AFP-L3濃度變化和其對應的特征峰與內標峰比值繪制的標準曲線，C為各濃度拉曼譜圖波數(shù)在1340cm^-1附近的放大圖。

圖3：反應后基底材料的掃描電鏡圖，圖中A為無AFP-L3加入抗體納米金溶液的掃描電鏡圖，圖中B為有AFP-L3加入抗體納米金溶液的掃描電鏡圖，可以發(fā)現(xiàn)圖B由于免疫反應使得抗體納米金作用在了蛋白芯片的表面，因此產(chǎn)生了5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)的拉曼信號。

圖4：實際肝癌病人血清的實驗結果示意圖，圖中A為未加入AFP時的SERS譜圖，B為加入AFP后的SERS譜圖，可以發(fā)現(xiàn)在1075cm^-1處有一個位移。隨后加入抗體納米金后的SERS譜圖如圖C所示，可以看到在1340cm^-1處有一個新峰，根據(jù)這個峰的相對強度與1075cm^-1的特征峰相比，根據(jù)標準曲線可以讀出相應異質體的濃度值。

具體實施方式

實施例1：建立標準曲線

首先，通過上述方法制備蛋白芯片和抗體納米金溶液。

1.在一個200mL燒杯中加入質量分數(shù)98％的濃硫酸水溶液和質量分數(shù)30％的過氧化氫水溶液，兩者的體積比＝7：3。

2.將硅片切成邊長為0.5cm的方塊。

3.將切好的硅片放進濃硫酸和過氧化氫的混合溶液中，此時溶液開始有氣泡產(chǎn)生。

4.將該燒杯加熱，直至沒有氣泡冒出。將酸液倒出，用水稀釋。隨后將硅片用大量水清洗干凈，再在質量分數(shù)為1％的PDDA水溶液中浸泡半小時，取出后用大量水沖洗，氮氣吹干。

5.再將硅片浸泡到Meisel&Lee方法制備的60nm銀溶膠中，浸泡4小時。將硅片從銀溶膠中取出用水沖洗，氮氣吹干，并浸泡到10^-4M 4-MBA乙醇溶液中，4小時后取出，用酒精沖洗，氮氣吹干。

6.將硅片經(jīng)過濃度為1mg/mL的EDC/NHS等濃度混合溶液活化羧基后4小時取出，用水沖洗后氮氣吹干，加入500μL、30ng/mL的AFP抗體，反應12小時后取出用緩沖液洗凈。再用0.1mg/mL的BSA溶液浸泡半小時取出，用水沖洗后，氮氣吹干，保存在離心管中待用，得到所需的蛋白芯片。

7.通過傳統(tǒng)的Meisel&Lee法制備20nm的金溶膠，將1mL金溶膠10000轉/分離心7分鐘后去掉上層清液，和100μL、1mg/mL的5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)的乙腈溶液混合，反應3小時后，加入20μL飽和的AFP-L3抗體的磷酸緩沖溶液，反應12個小時，再加入100μL、0.1mg/mL的牛血清蛋白的磷酸緩沖溶液封閉，離心去掉上層清液后用磷酸緩沖溶液重新分散至500μL并保存于4℃冰箱中，得到抗體納米金溶液。

8.分別取100μL不同濃度的AFP(0、1、10、100、1000ng/mL)水溶液于500μL離心管中，將步驟6制備好的多個蛋白芯片分別放入其中，反應12小時；取出蛋白芯片后用水沖凈，氮氣吹干后，放入樣品臺，分別進行拉曼檢測。經(jīng)過數(shù)據(jù)比對發(fā)現(xiàn)對巰基苯甲酸的拉曼特征峰在1075cm^-1處的位移和不同甲胎蛋白濃度的對數(shù)呈現(xiàn)的線性關系：加入AFP(0、1、10、100、1000ng/mL)后拉曼譜圖中1075cm^-1處對應的拉曼位移分別為0、0.55、1.36、1.99、3.03。繪制甲胎蛋白濃度的對數(shù)與該濃度對應的對巰基苯甲酸的特征峰在1075cm^-1處位移的散點圖，擬合得到標準曲線如圖1所示，曲線方程為y＝0.79601x+0.52596，其中x代表AFP總濃度的對數(shù)，y代表對巰基苯甲酸在1075cm^-1處拉曼特征峰的位移，進而根據(jù)此標準曲線可用于未知的AFP總濃度的檢測。

9.分別取100μL不同濃度的AFP-L3(8、50、100、400、1000ng/mL)水溶液于500μL離心管中，將步驟6制備好的多個蛋白芯片分別放入其中，反應12小時；取出蛋白芯片后用水沖凈，氮氣吹干后，重新放入裝有400μL磷酸緩沖液的離心管中，分別加入100μL步驟7制備的抗體納米金溶液，繼續(xù)反應12小時。隨后將蛋白芯片取出用水沖洗，氮氣吹干，放入樣品臺，分別進行拉曼檢測。加入AFP-L3(8、50、100、400、1000ng/mL)得到的拉曼譜圖中特征峰與內標峰的強度比分別為0.08、0.14、0.2、0.55、1.2。因此，繪制5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)在1340cm^-1處的特征峰強度與對巰基苯甲酸在1075cm^-1處的特征峰峰強度的比值與AFP-L3濃度的散點圖，然后進行擬合，得到的標準曲線如圖2所示。線性方程為y＝0.07501+0.00119x，其中x代表AFP-L3的濃度，y代表兩個特征峰強度的比值。利用這個線性方程可以對未知濃度的AFP-L3進行定量。

實施例2：

對高AFP肝病患者的診斷

該方法主要用于對肝病患者進行診斷。對肝癌患者的診斷確認分為兩個步驟，第一是對AFP濃度進行檢測，其次是對AFP-L3濃度進行檢測。

首先，通過上述方法制備蛋白芯片和抗體納米金。

1.在一個200mL燒杯中加入質量分數(shù)98％的濃硫酸水溶液和質量分數(shù)30％的過氧化氫水溶液，兩者的體積比＝7：3。

2.將硅片切成邊長為0.5cm的方塊。

3.將切好的硅片放進濃硫酸和過氧化氫的混合溶液中，此時溶液開始有氣泡產(chǎn)生。

4.將該燒杯加熱，直至沒有氣泡冒出。將酸液倒出，用水稀釋。隨后將硅片用大量水清洗干凈，再在質量分數(shù)為1％的PDDA水溶液中浸泡半小時，取出后用大量水沖洗，氮氣吹干。

5.再浸泡到Meisel&Lee方法制備的60nm銀溶膠中，浸泡4小時。將硅片從銀溶膠中取出用水沖洗，氮氣吹干，并浸泡到10^-4M 4-MBA乙醇溶液中，4小時后取出，用酒精沖洗，氮氣吹干。

6.經(jīng)過濃度為1mg/mL的EDC/NHS等濃度混合溶液活化羧基后4小時取出，用水沖洗后氮氣吹干，加入500μL、30ng/mL的AFP抗體，反應12小時后取出用緩沖液洗凈。再用0.1mg/mL的BSA溶液浸泡半小時取出，用水沖洗后，氮氣吹干，得到所需蛋白芯片，并保存在離心管中待用。

7.通過傳統(tǒng)的Meisel&Lee法制備20nm的金溶膠，將1mL金溶膠10000轉離心7分鐘后去掉上層清液，和100μL的1mg/mL的5,5'-二硫代雙(琥珀酰亞胺基-2-硝基苯甲酸)的乙腈溶液混合，反應3小時后，加入20μL飽和的AFP-L3抗體的磷酸緩沖溶液，反應12個小時，再加入100μL、0.1mg/mL的牛血清蛋白的磷酸緩沖溶液封閉，離心去掉上層清液后用磷酸緩沖溶液重新分散至500μL并保存于4℃冰箱中，得到抗體納米金溶液。

取100μL患者血清，分散到400μL的磷酸緩沖液中，室溫下將蛋白芯片浸泡在其中4小時后取出，用磷酸緩沖溶液沖洗后，氮氣吹干。將吹干后蛋白芯片放入樣品臺進行拉曼檢測，如圖4所示，根據(jù)標準品繪制的標準曲線1可以得到特征峰的位移對應該患者的AFP濃度為548.1ng/mL。隨后將芯片重新浸泡在磷酸緩沖液中，加入100μL抗體納米金溶液，室溫下反應4小時后，用磷酸緩沖液沖洗，氮氣吹干后進行第二步檢測。

如圖4所示，A為未加入AFP時的SERS譜圖，B為加入AFP后的SERS譜圖，可以發(fā)現(xiàn)在1075cm^-1處有一個位移。隨后加入抗體納米金后的SERS譜圖如圖C所示，可以看到在1340cm^-1處有一個新峰，根據(jù)這個峰的相對強度與1075cm^-1的特征峰相比，根據(jù)標準曲線可以讀出相應異質體的濃度值。根據(jù)標準品與內標峰的相對強度繪制的標準曲線得出，該特征峰的相對強度對應該患者的AFP-L3濃度為547.5ng/mL。根據(jù)公式c(AFP-L3)/c(AFP)＝AFP-L3％計算，結果遠大于10％，因此可以診斷此肝病患者為肝癌。分別用化學反光法和AFP-L3試劑盒對實驗實例結果進行驗證，通過化學發(fā)光法檢測該患者血清得到的AFP總濃度為540.6ng/mL；AFP-L3試劑盒檢測得到AFP-L3的濃度為527ng/mL。結果表明本發(fā)明芯片檢測精度高，診斷肝癌具有良好的準確性。

Meisel&Lee參考文獻：

Lee,P.C.；Meisel,D.J.Phys.Chem.1982,86,3391-3395