1.一種對蛋白的唾液酸含量進(jìn)行檢測的方法,其特征在于,包括步驟:
(1)提供一待分析樣品,其中含有待分析蛋白;
(2)對步驟(1)中的樣品進(jìn)行酸水解,得到酸水解產(chǎn)物;
(3)對(2)中所述的酸水解產(chǎn)物用標(biāo)記試劑進(jìn)行標(biāo)記,獲得經(jīng)標(biāo)記的混合物;
(4)用有機(jī)溶劑對所述經(jīng)標(biāo)記的混合物進(jìn)行色譜預(yù)處理,獲得預(yù)處理的混合物;
(5)將所述預(yù)處理的混合物上樣于親水相互作用色譜柱,進(jìn)行色譜分離,獲得含標(biāo)記的唾液酸的洗脫液;
(6)對所述的洗脫液進(jìn)行檢測,從而獲得所述蛋白的唾液酸含量的測定結(jié)果。
2.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中所述酸水解所用酸選自下組:乙酸、三氟乙酸、硫酸、鹽酸、甲酸、三氯乙酸、磷酸、硝酸。
3.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述待分析蛋白為抗體蛋白。
4.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述待分析蛋白為融合蛋白。
5.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述標(biāo)記試劑選自:4,5-亞甲二氧基-1,2-苯二胺二鹽酸鹽(DMB),或具有式I結(jié)構(gòu)的標(biāo)記化合物:
式中,
化合物1,X=O,R=CH3;
化合物2,X=O,
化合物3,X=NH,R=H;
化合物4,X=NH,R=CH3;
化合物5,X=NH,
化合物6,X=NH,
6.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述有機(jī)溶劑選自下組:乙腈、甲醇、乙醇、DMSO、異丙醇、或其組合。
7.如權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述色譜柱為BEH amide柱。
8.如權(quán)利要求1-7中任一所述的方法,其特征在于,所述色譜分析的參數(shù)流速為0.1-0.8ml/min,較佳地為0.2-0.6ml/min,更佳地為0.4ml/min。
9.如權(quán)利要求1-7中任一所述的方法,其特征在于,所述色譜分析的流動相包含水相和有機(jī)溶劑。
10.一種試劑盒,其特征在于,所述試劑盒包括:
(1)酸水解試劑;
(2)標(biāo)記試劑;
(3)任選的標(biāo)準(zhǔn)品和/或標(biāo)準(zhǔn)曲線,所述標(biāo)準(zhǔn)品選自NGNA、NANA或其組合;和
(4)描述利用(1)所述酸水解試劑進(jìn)行酸水解和利用(2)所述標(biāo)記試劑進(jìn)行唾液酸標(biāo)記的使用說明書。